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服务园地
2006年 第3期
分析应用通讯
本期要目
高效液相色谱法测定肉类中安定、氯氮平及盐酸氯
丙嗪残留量
高效液相色谱法
检测
工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训
血浆氟罗沙星
土壤中磺酰脲类除草剂多残留液质联用分析
Agilent HC-C18液相色谱柱分析毒死蜱乳油
液相真空脱气机使用须知
液相色谱柱的维护(三)
气相色谱常见问题解析(一)
ZORBAX Eclipse Plus液相色谱柱
我们的服务 之六:
液相系列仪器维护保养
维护保养的目的:减少仪器故障,保证仪器系统长
期的可靠性。
维护保养的内容:对整套仪器进行清洗、润滑及检查。
维护保养的步骤:
G1310A/11A/12A-泵
● 对仪器进行一般性检查。
● 清洗溶剂入口过滤头,清洗脱气机所有通道。
● 将泵头从仪器上卸下,拆开。
● 将柱塞杆卸下并清洗,检查柱塞杆表面有无不正
常的地方,必要时更换。
● 清洗支撑环,清洗沉积在上面的盐分,检查是否
有划痕,必要时更换。
● 将旧的密封圈和磨损支架取下来,清洗柱塞腔,
更换新的密封圈。
● 如果装有密封圈清洗装置,更换清洗密封圈。
● 检查泵头中弹簧是否损坏或被腐蚀,必要时更换。
● 重新安装泵头。
● 更换冲洗阀中的PTFE过滤沙芯和出口球阀中的
过滤网。
● 如果需要更换主动阀中的过滤沙芯。
● 检查所有废液盘/接口安装是否正确。
● 检查排液管是否有堵塞。
● 检查泄漏传感器是否安装正确,是否正常工作。
清洗泄漏传感器上的盐分,更换被腐蚀的传感器。
● 用手持控制器或化学工作站检查压力信号。
泵的测试:
● 进行内置的泄漏测试
G1313A/27A-自动进样器
● 对仪器进行一般性检查。
● 检查转子密封圈,必要时更换。
● 检查定子是否有划痕,必要时更换定子面。
● 更换计量装置柱塞密封圈。
● 检查针/针座是否损坏,必要时更换。
● 检查针/针座准直性,必要时进行校正。
● 检查针和计量驱动器的传送带。
● 检查所有废液盘/接口安装是否正确。
● 检查排液管是否有堵塞。
● 检查泄漏传感器是否安装正确,是否正常工作。
清洗泄漏传感器上的盐分,更换被腐蚀的传感器。
● 清洗传送机械杆
自动进样器测试:
● 用死堵头将ALS的出口堵上
● 进行内置的压力测试
● 如果压力测试不通过,检查是否有泄漏。
● 检查六通阀、针、针座及连接处是否有泄漏。
G1316A -柱温箱
● 对仪器进行一般性检查。
● 检查柱切换阀,如需要更换转子密封圈/转子面。
● 检查所有废液盘/接口安装是否正确。
● 检查泄漏传感器是否安装正确,是否正常工作。
清洗泄漏传感器上的盐分,更换被腐蚀的传感器。
柱温箱测试:
● 对恒温器进行测试
G1314A - VWD检测器
● 对仪器进行一般性检查。
● 检查所有废液盘/接口安装是否正确。
● 检查排液管是否有堵塞。
● 检查泄漏传感器是否安装正确,是否正常工作。
清洗泄漏传感器上的盐分,更换被腐蚀的传感器。
VWD测试:
● 波长校准
● 光强测试
● 流通池测试
● 如果需要清洗或更换流通池窗口并更换密封垫片
G1315A - DAD/G1365A - MWD检测器
● 检查仪器记录本(不包括最近维修的项目)。
● 检查是否需要升级的项目(安全、固件等)。
● 对仪器进行一般性检查。
● 检查所有废液盘/接口安装是否正确。
● 检查排液管是否有堵塞。
● 检查泄漏传感器是否安装正确,是否正常工作。
清洗泄漏传感器上的盐分,更换被腐蚀的传感器。
DAD测试:
● 波长校准
● 光强测试
● 流通池测试
● 如果需要清洗或更换流通池窗口并更换密封垫片
● 暗电流和滤光片测试
G1321A FLD检测器
● 检查仪器记录本(不包括最近维修的项目)。
● 检查是否需要升级的项目(安全、固件等)。
● 对仪器进行一般性检查。
● 检查所有废液盘/接口安装是否正确。
● 检查排液管是否有堵塞。
● 检查泄漏传感器是否安装正确,是否正常工作。
清洗泄漏传感器上的盐分,更换被腐蚀的传感器。
● 检查流通池是否有泄漏。
FLD测试:
● 验证激发和发射波长
● 检查氙灯光强
G1362A - RID检测器
● 对仪器进行一般性检查。
● 检查所有废液盘/接口安装是否正确。
● 检查排液管是否有堵塞。
● 检查泄漏传感器是否安装正确,是否正常工作。
清洗泄漏传感器上的盐分,更换被腐蚀的传感器。
● 检查是否有泄漏。
RID测试:
● 检查二极管的平衡,必要时调节光路的平衡
Agilent 1100系列仪器测试:
● 用流动相将系统冲洗做好准备,进样测试。
● 将测试结果填写到计划维修的文件中。
安捷伦服务热线:800-820-3278
活动信息
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应用园地应用园地
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高效液相色谱法测定肉类中安定、
氯氮平及盐酸氯丙嗪残留量
刘 瑾 刘长海 吴小虎 方玮 冯恺
上海市药品检验所
安定(Diazepam)、氯氮平(Clozapine)、盐酸氯丙嗪(Chlorpromazine
Hydrochloride)均为临床常用的镇静、催眠药物,主要表现在对中枢神经系统
的抑制,可引起近似生理性睡眠。长期服用该类药物可产生依赖性或成瘾性。
使用不当会使动物体内药物蓄积浓度过高而影响食用者的安全,所以对其残
留量进行检测是必要的。有关安定、氯氮平和盐酸氯丙嗪检测的报道较多,
但同时检测上述三种成分的方法尚无。因此,有必要建立一种快速、准确、
可靠的检测方法。本文介绍使用高效液相色谱法同时检测安定、氯氮平和盐
酸氯丙嗪残留的方法。
1. 色谱条件
仪器: Agilent 1100高效液相色谱系统,配备DAD检测器及相应色谱工作站
色谱柱: Agilent TC-C18(4.6×150mm, 5 µm)
预柱:Dikma EasyGuard C18(4×8mm, 5 µm)
柱温: 35ºC
流动相: A相为含0.1%三乙胺的35mmol/L醋酸铵溶液,B相为乙腈;
梯度洗脱:0~3min,A相60%;4~13 min,
A相35%;14~24 min,A相20%
流速: 1.0mL/min
检测波长: 254nm
进样量: 20 µL
2. 样品前处理
称取5g粉碎后的样品,加入20mL乙腈均质5分钟,超声处理30分钟,高速离
心。转移上清液,残渣中加入20mL乙腈混合,超声处理30分钟,高速离心。
合并上清液,加正己烷适量,振摇提取。放置后使分层,分离乙腈层,蒸干。
加乙腈1mL至残渣中,涡旋使残渣溶解,高速离心,取上清液进行测定。
图2 空白样品溶液色谱图
图3 加样回收溶液色谱图
1. 安定(diazepam) 2. 氯氮平(clozapine)
3. 盐酸氯丙嗪(chlorpromazine hydrochloride)
3. 结论
选用Agilent TC-C18色谱柱进行分析,主要考虑到该型号色谱柱适用于低有机
相起始的梯度分析。研究表明,本方法的检测限可以达到2.3µg/kg(安定),
2.2µg/kg(氯氮平),3.1µg/kg(盐酸氯丙嗪)。线性范围均为0~4µg/mL,线性
相关系数均为1.000。回收率在72.4%~89.9%之间,相对标准偏差小于7%。
结果表明,该残留检测方法可靠,重现性好,精密度和准确度均能达到残留
分析的要求。
高效液相色谱法检测
血浆氟罗沙星
邱相君 王建刚
河南科技大学医学院药理学教研室
氟罗沙星又称多氟沙星,为三氟喹诺酮类口服抗菌药,对革兰氏阴性和革兰
氏阳性菌、分枝杆菌、厌氧菌、支原体、衣原体均具有强大的抗菌活性。本
研究以Agilent TC-C18为色谱柱,建立了人血浆氟罗沙星检测的高效液相色谱
方法。
1. 材料与方法
高效液相色谱仪: Agilent 1100,包括在线脱气机、四元泵、
自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器和化学工作站
色谱条件:
色谱柱: TC-C18(4.6×150mm, 5µm)及TC-C18保护柱
(4.6×12.5mm, 5µm)
流动相: 乙腈 : 0.1%三氟乙酸 : 水 = 20:20:60(V/V/V)
流速: 1.0mL/min
柱温: 40ºC
检测波长: 286nm 参比波长:380nm
进样量: 10µL
血浆样品的处理方法:
准确吸取待测血浆样品0.5mL于1.5mL EP管中,加入100µg/mL恩诺沙星内标
应用液40µL,再加入35%高氯酸40µL,旋涡振荡10秒后,12000rpm离心10min,
上清液用于液相分析。
2. 实验结果
2.1 HPLC图谱
血浆中氟罗沙星峰形良好,分离完全,无杂质峰干扰。体外试验血浆中氟罗沙
星能与血浆中其他成分较好分离;氟罗沙星体内与体外保留时间一致,见图1。
2.2 线性关系及定量下限
配制浓度相当于0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00mg/L的
血浆样品,按血浆样品处理方法处理,测定氟罗沙星及内标峰面积,绘制内
标校正曲线;氟罗沙星在0.1~8.0mg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),
定量下限为0.1mg/L。
2.3 相对回收率试验
配制低、中、高3个浓度(0.25,2.00,6.00mg/L)的血浆对照品溶液,平行5
组,按血浆样品处理方法处理。依据标准曲线计算各自的浓度,相对回收率
结果见表1。
表1 血浆氟罗沙星相对回收率(n=5, x ±s)
Added Found Recovery RSD
(µg/mL) (µg/mL) (%) (%)
0.25 0.252±0.005 100.970±2.068 2.048
2.00 1.975±0.027 98.739±1.346 1.363
6.00 5.943±0.067 99.044±1.123 1.134
2.4 精密度试验
配制低、中、高3个浓度(0.25,2.00,6.00mg/L)的血浆对照品溶液,平行5组,
按血浆样品处理方法处理;于同一日内测定,计算日内精密度;连续5天内测
定,计算日间精密度,结果见表2。
表2 血浆氟罗沙星精密度(n=5, x ± s)
Added Intra-day RSD Inter-day RSD
(µg/mL) precision (%) precision (%)
0.25 0.254±0.004 1.749 0.257±0.001 0.550
2.00 1.977±0.020 1.006 2.017±0.024 1.212
6.00 6.007±0.099 1.656 6.021±0.082 1.362
3. 结论
本实验采用Agilent TC-C18色谱柱,在酸性流动相条件下,取得了良好的分离
效果;色谱峰形对称,柱效高,重现性好。本方法简便、快速、准确可靠,
适用于人血浆氟罗沙星浓度的测定及其药代动力学研究。
A-氟罗沙星及内标
B-空白血浆
C-空白血浆加氟罗沙星及内标
D-样品
图1 对照品溶液色谱图
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高效液相色谱法测定肉类中安定、
氯氮平及盐酸氯丙嗪残留量
刘 瑾 刘长海 吴小虎 方玮 冯恺
上海市药品检验所
安定(Diazepam)、氯氮平(Clozapine)、盐酸氯丙嗪(Chlorpromazine
Hydrochloride)均为临床常用的镇静、催眠药物,主要表现在对中枢神经系统
的抑制,可引起近似生理性睡眠。长期服用该类药物可产生依赖性或成瘾性。
使用不当会使动物体内药物蓄积浓度过高而影响食用者的安全,所以对其残
留量进行检测是必要的。有关安定、氯氮平和盐酸氯丙嗪检测的报道较多,
但同时检测上述三种成分的方法尚无。因此,有必要建立一种快速、准确、
可靠的检测方法。本文介绍使用高效液相色谱法同时检测安定、氯氮平和盐
酸氯丙嗪残留的方法。
1. 色谱条件
仪器: Agilent 1100高效液相色谱系统,配备DAD检测器及相应色谱工作站
色谱柱: Agilent TC-C18(4.6×150mm, 5 µm)
预柱:Dikma EasyGuard C18(4×8mm, 5 µm)
柱温: 35ºC
流动相: A相为含0.1%三乙胺的35mmol/L醋酸铵溶液,B相为乙腈;
梯度洗脱:0~3min,A相60%;4~13 min,
A相35%;14~24 min,A相20%
流速: 1.0mL/min
检测波长: 254nm
进样量: 20 µL
2. 样品前处理
称取5g粉碎后的样品,加入20mL乙腈均质5分钟,超声处理30分钟,高速离
心。转移上清液,残渣中加入20mL乙腈混合,超声处理30分钟,高速离心。
合并上清液,加正己烷适量,振摇提取。放置后使分层,分离乙腈层,蒸干。
加乙腈1mL至残渣中,涡旋使残渣溶解,高速离心,取上清液进行测定。
图2 空白样品溶液色谱图
图3 加样回收溶液色谱图
1. 安定(diazepam) 2. 氯氮平(clozapine)
3. 盐酸氯丙嗪(chlorpromazine hydrochloride)
3. 结论
选用Agilent TC-C18色谱柱进行分析,主要考虑到该型号色谱柱适用于低有机
相起始的梯度分析。研究表明,本方法的检测限可以达到2.3µg/kg(安定),
2.2µg/kg(氯氮平),3.1µg/kg(盐酸氯丙嗪)。线性范围均为0~4µg/mL,线性
相关系数均为1.000。回收率在72.4%~89.9%之间,相对标准偏差小于7%。
结果表明,该残留检测方法可靠,重现性好,精密度和准确度均能达到残留
分析的要求。
高效液相色谱法检测
血浆氟罗沙星
邱相君 王建刚
河南科技大学医学院药理学教研室
氟罗沙星又称多氟沙星,为三氟喹诺酮类口服抗菌药,对革兰氏阴性和革兰
氏阳性菌、分枝杆菌、厌氧菌、支原体、衣原体均具有强大的抗菌活性。本
研究以Agilent TC-C18为色谱柱,建立了人血浆氟罗沙星检测的高效液相色谱
方法。
1. 材料与方法
高效液相色谱仪: Agilent 1100,包括在线脱气机、四元泵、
自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器和化学工作站
色谱条件:
色谱柱: TC-C18(4.6×150mm, 5µm)及TC-C18保护柱
(4.6×12.5mm, 5µm)
流动相: 乙腈 : 0.1%三氟乙酸 : 水 = 20:20:60(V/V/V)
流速: 1.0mL/min
柱温: 40ºC
检测波长: 286nm 参比波长:380nm
进样量: 10µL
血浆样品的处理方法:
准确吸取待测血浆样品0.5mL于1.5mL EP管中,加入100µg/mL恩诺沙星内标
应用液40µL,再加入35%高氯酸40µL,旋涡振荡10秒后,12000rpm离心10min,
上清液用于液相分析。
2. 实验结果
2.1 HPLC图谱
血浆中氟罗沙星峰形良好,分离完全,无杂质峰干扰。体外试验血浆中氟罗沙
星能与血浆中其他成分较好分离;氟罗沙星体内与体外保留时间一致,见图1。
2.2 线性关系及定量下限
配制浓度相当于0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00mg/L的
血浆样品,按血浆样品处理方法处理,测定氟罗沙星及内标峰面积,绘制内
标校正曲线;氟罗沙星在0.1~8.0mg/L浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),
定量下限为0.1mg/L。
2.3 相对回收率试验
配制低、中、高3个浓度(0.25,2.00,6.00mg/L)的血浆对照品溶液,平行5
组,按血浆样品处理方法处理。依据标准曲线计算各自的浓度,相对回收率
结果见表1。
表1 血浆氟罗沙星相对回收率(n=5, x ±s)
Added Found Recovery RSD
(µg/mL) (µg/mL) (%) (%)
0.25 0.252±0.005 100.970±2.068 2.048
2.00 1.975±0.027 98.739±1.346 1.363
6.00 5.943±0.067 99.044±1.123 1.134
2.4 精密度试验
配制低、中、高3个浓度(0.25,2.00,6.00mg/L)的血浆对照品溶液,平行5组,
按血浆样品处理方法处理;于同一日内测定,计算日内精密度;连续5天内测
定,计算日间精密度,结果见表2。
表2 血浆氟罗沙星精密度(n=5, x ± s)
Added Intra-day RSD Inter-day RSD
(µg/mL) precision (%) precision (%)
0.25 0.254±0.004 1.749 0.257±0.001 0.550
2.00 1.977±0.020 1.006 2.017±0.024 1.212
6.00 6.007±0.099 1.656 6.021±0.082 1.362
3. 结论
本实验采用Agilent TC-C18色谱柱,在酸性流动相条件下,取得了良好的分离
效果;色谱峰形对称,柱效高,重现性好。本方法简便、快速、准确可靠,
适用于人血浆氟罗沙星浓度的测定及其药代动力学研究。
A-氟罗沙星及内标
B-空白血浆
C-空白血浆加氟罗沙星及内标
D-样品
图1 对照品溶液色谱图
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色谱俱乐部
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土壤中磺酰脲类除草剂多残留液
质联用分析
张微 崔昕 潘灿平
中国农业大学理学院
磺酰脲类除草剂是一类新型超高效除草剂,在土壤和水环境中存在一定残留
危害,常有由于磺酰脲除草剂在土壤中残留而引起的后茬作物药害例子。本
研究用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱,建立了土壤中10种磺酰脲类除草剂
多残留HPLC-MS分析方法。
1. 实验部分
1.1 仪器和试剂
液-质联用仪:Agilent 1100 LC/MSD Trap液相/离子阱质谱联用仪
试剂及标样:甲醇、乙腈等有机溶剂均为色谱纯;Milli-Q超纯水;磷酸二氢钾,
磷酸氢二钾,85%磷酸,氢氧化钠均为分析纯;磺酰脲类除草剂标样由农业
部农药检定所购买。
1.2 样品制备
提取:取10g土壤加入提取液(0.2mol/L pH7.8磷酸盐缓冲液:甲醇=8:2,v/v)10mL,
涡旋3min,超声波振荡5min,离心10min(4000转/min),重复提取3次,合并
上清液。用85%磷酸调节上清液pH至2.5,待净化浓缩。
SPE净化与浓缩:先后以甲醇和0.2mol/L磷酸缓冲液(pH2.5)活化C18固相萃
取小柱;上样后抽真空10min,后用3mL洗脱液(乙腈:pH7.8磷酸盐缓冲液
=9:1,v/v)洗脱,收集洗脱液,N2吹干,乙腈定容至1mL。
1.3 色谱条件
色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 x 250mm, 5µm)
流动相: 乙腈 : 甲醇 : 0.2%冰醋酸(梯度洗脱程序列于表1)
流速: 1mL/min
柱温: 30ºC
检测波长:254nm
进样量: 10µL
表1 流动相梯度洗脱程序
时间 水(0.2%冰醋酸) 乙腈 甲醇
0.00 80 10 10
14.00 10 45 45
16.00 4 48 48
18.00 80 10 10
1.4 质谱条件
采用ESI电离方式,正离子检测模式,扫描范围100~500 m/z;碎裂电压2.75V;
毛细管电压3.5 kV;雾化气压力40 psi;干燥气(N2)流速6 mL/min,温度350ºC。
10种磺酰脲类除草剂的质谱检测条件见表2。
表2 10种磺酰脲类除草剂的质谱检测条件
除草剂 分子量 监测离子 成分 保留时间
MW m/z (min)
烟嘧磺隆 nicosulfuron 410.4 411 M+H 10.7
433 M+Na
噻吩磺隆thifensulfuron-methyl 387.4 388 M+H 11.1
410 M+Na
甲磺隆metsulfuron-methyl 381.4 382 M+H 11.5
甲嘧磺隆sulfometuron-methyl 364.4 365 M+H 11.9
387 M+Na
氯磺隆chlorsulfuron 357.8 358 M+H 12.2
胺苯磺隆ethametsulfuron-methyl 410.4 411 M+H 12.4
433 M+Na
苯磺隆tribenuron 395.4 418 M+H 13.5
苄嘧磺隆bensulfuron-methyl 410.4 411 M+H 13.9
433 M+Na
吡嘧磺隆pyrazosulfuron-ethyl 414.4 415 M+H 15.0
437 M+Na
氯嘧磺隆chlorimuron-ethyl 414.8 415 M+H 15.3
437 M+Na
2. 结果与讨论
2.1 分离效果
标样中10种目标化合物的色谱分离结果见附图。由图可见,10种物质在该色
谱条件下,能得到较好的分离,峰形较好。
2.2 定量测定
在10g土壤中定量加入10种磺酰脲类除草剂混标,按1.2节进行处理和测定。
结果表明,在0.01~1.0 mg/kg添加水平范围内,平均添加回收率在80.2%~
104.5%之间(除苯磺隆外,苯磺隆对酸敏感,在pH2.5时发生分解);磺酰脲
类除草剂在土壤中的最小检出限在0.6~3.5μg/kg之间。
3. 结论
本方法研究表明,ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱对磺酰脲类除草剂有较好
的分离效果,10种磺酰脲类除草剂的液相色谱分离在乙腈-甲醇-水(0.2%冰醋
酸)梯度洗脱下完成,目标化合物全部集中在10~16分钟之间流出,有利于质
谱的测定。
Agilent HC-C18液相色谱柱分析
毒死蜱乳油
姜忠涛
上海市农业技术推广服务中心
毒死蜱(chlorpyrifos)是一种农药杀虫剂,在一般贮存条件下稳定,对铜和黄铜
有腐蚀性。480g/L毒死蜱乳油是一种淡黄色至棕色的稳定均相液体。本研究
采用Agilent HC-C18液相柱对毒死蜱乳油进行了含量测定分析。
1. 实验部分
1.1 仪器和试剂
仪器: Agilent 1100液相色谱仪,配有自动进样器及
VWD可变波长紫外检测器
色谱柱: Agilent HC-C18(4.6×250mm, 5µm)
试剂: 色谱级乙腈,Milli-Q超纯水
样品: 480g/L毒死蜱乳油,上海市秦禾有限公司生产。
毒死蜱标准品: 含量99.6%,国家农药质检中心提供。
1.2 操作条件
流动相: 乙腈:水 = 70:30
流量: 1.0mL/min
柱温: 室温
检测波长: 300nm
进样量: 20uL
1.3 实验步骤
标样溶液的配制:称取0.0526g毒死蜱标准品,置于50mL容量瓶中,用乙腈
溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。
试样溶液的配制:称取0.1128g毒死蜱乳油样品,置于50mL容量瓶中,用乙
腈溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。
测定:在上述操作条件下,待仪器基线稳定后,连续注入数针标样溶液,待
相邻两针的峰面积差值小于0.5%,按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标
样溶液的顺序进行测定。
2. 结果与讨论
2.1 分离效果
由图可见,毒死蜱在该色谱条件下的柱效高、峰形好(理论塔板数为14825,
拖尾因子为1.015)。
2.2 定量测定
本研究采用外标法定量,并考查了测定的准确度和精密度。结果表明,回收
率均在98%~104%范围之内,相对标准偏差在1.25%~10.02%之间。
3. 结论
采用Agilent1100高效液相色谱仪和HC-C18反相液相色谱柱,可以很好地分离
测定毒死蜱乳油中的毒死蜱。本方法操作简便、节省溶剂,具有较好的准确
度和精密度,建议相关部门可以积极试用。
液相真空脱气机使用须知
邹祥旺
1. 真空脱气机的作用
液相色谱中流动相在线混合时容易产生气泡,特别是在低压混合时,这会影
响到泵混合的准确性以及流量的精确性。在线真空脱气机可以及时有效地去
除流动相中的溶解气体,从而降低压力脉动,提高色谱保留重现性。 此外,
高精密度低流量输出、紫外低波长检测,或样品/检测器对流动相中溶解氧
敏感时,使用在线真空脱气机也都是非常必要的。
2. 真空脱气机种类及原理
真空脱气机主要由四通道(四组管状的高分子半透膜)真空腔和真空泵构成。打
开电源开关后,控制电路即开启真空泵,真空泵运行使真空腔内产生部分真
空。真空度由压力传感器测定,根据传感器信号,脱气机通过运行或关闭真
空泵来维持真空度。流动相在LC泵的抽动下通过真空腔内的特殊高分子半透
膜,此时半透膜的外部空间处于部分真空状态,流动相中溶解的气体渗过半
透膜进入真空腔继而被真空泵抽出,这样溶剂到达脱气机出口时几乎已被完
全脱气而不含任何气体了。
10种磺酰脲类除草剂混合标准溶液的LC-MS总离子流图
1. 烟嘧磺隆;2.噻吩磺隆;3.甲磺隆;4.甲嘧磺隆;5.氯磺隆;
6. 胺苯磺隆;7.苯磺隆;8.苄嘧磺隆;9.吡嘧磺隆;10.氯嘧磺隆
毒死蜱乳油样品在HC-C18柱上的色谱图
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应用园地应用园地
色谱俱乐部
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土壤中磺酰脲类除草剂多残留液
质联用分析
张微 崔昕 潘灿平
中国农业大学理学院
磺酰脲类除草剂是一类新型超高效除草剂,在土壤和水环境中存在一定残留
危害,常有由于磺酰脲除草剂在土壤中残留而引起的后茬作物药害例子。本
研究用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱,建立了土壤中10种磺酰脲类除草剂
多残留HPLC-MS分析方法。
1. 实验部分
1.1 仪器和试剂
液-质联用仪:Agilent 1100 LC/MSD Trap液相/离子阱质谱联用仪
试剂及标样:甲醇、乙腈等有机溶剂均为色谱纯;Milli-Q超纯水;磷酸二氢钾,
磷酸氢二钾,85%磷酸,氢氧化钠均为分析纯;磺酰脲类除草剂标样由农业
部农药检定所购买。
1.2 样品制备
提取:取10g土壤加入提取液(0.2mol/L pH7.8磷酸盐缓冲液:甲醇=8:2,v/v)10mL,
涡旋3min,超声波振荡5min,离心10min(4000转/min),重复提取3次,合并
上清液。用85%磷酸调节上清液pH至2.5,待净化浓缩。
SPE净化与浓缩:先后以甲醇和0.2mol/L磷酸缓冲液(pH2.5)活化C18固相萃
取小柱;上样后抽真空10min,后用3mL洗脱液(乙腈:pH7.8磷酸盐缓冲液
=9:1,v/v)洗脱,收集洗脱液,N2吹干,乙腈定容至1mL。
1.3 色谱条件
色谱柱: ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 x 250mm, 5µm)
流动相: 乙腈 : 甲醇 : 0.2%冰醋酸(梯度洗脱程序列于表1)
流速: 1mL/min
柱温: 30ºC
检测波长:254nm
进样量: 10µL
表1 流动相梯度洗脱程序
时间 水(0.2%冰醋酸) 乙腈 甲醇
0.00 80 10 10
14.00 10 45 45
16.00 4 48 48
18.00 80 10 10
1.4 质谱条件
采用ESI电离方式,正离子检测模式,扫描范围100~500 m/z;碎裂电压2.75V;
毛细管电压3.5 kV;雾化气压力40 psi;干燥气(N2)流速6 mL/min,温度350ºC。
10种磺酰脲类除草剂的质谱检测条件见表2。
表2 10种磺酰脲类除草剂的质谱检测条件
除草剂 分子量 监测离子 成分 保留时间
MW m/z (min)
烟嘧磺隆 nicosulfuron 410.4 411 M+H 10.7
433 M+Na
噻吩磺隆thifensulfuron-methyl 387.4 388 M+H 11.1
410 M+Na
甲磺隆metsulfuron-methyl 381.4 382 M+H 11.5
甲嘧磺隆sulfometuron-methyl 364.4 365 M+H 11.9
387 M+Na
氯磺隆chlorsulfuron 357.8 358 M+H 12.2
胺苯磺隆ethametsulfuron-methyl 410.4 411 M+H 12.4
433 M+Na
苯磺隆tribenuron 395.4 418 M+H 13.5
苄嘧磺隆bensulfuron-methyl 410.4 411 M+H 13.9
433 M+Na
吡嘧磺隆pyrazosulfuron-ethyl 414.4 415 M+H 15.0
437 M+Na
氯嘧磺隆chlorimuron-ethyl 414.8 415 M+H 15.3
437 M+Na
2. 结果与讨论
2.1 分离效果
标样中10种目标化合物的色谱分离结果见附图。由图可见,10种物质在该色
谱条件下,能得到较好的分离,峰形较好。
2.2 定量测定
在10g土壤中定量加入10种磺酰脲类除草剂混标,按1.2节进行处理和测定。
结果表明,在0.01~1.0 mg/kg添加水平范围内,平均添加回收率在80.2%~
104.5%之间(除苯磺隆外,苯磺隆对酸敏感,在pH2.5时发生分解);磺酰脲
类除草剂在土壤中的最小检出限在0.6~3.5μg/kg之间。
3. 结论
本方法研究表明,ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱对磺酰脲类除草剂有较好
的分离效果,10种磺酰脲类除草剂的液相色谱分离在乙腈-甲醇-水(0.2%冰醋
酸)梯度洗脱下完成,目标化合物全部集中在10~16分钟之间流出,有利于质
谱的测定。
Agilent HC-C18液相色谱柱分析
毒死蜱乳油
姜忠涛
上海市农业技术推广服务中心
毒死蜱(chlorpyrifos)是一种农药杀虫剂,在一般贮存条件下稳定,对铜和黄铜
有腐蚀性。480g/L毒死蜱乳油是一种淡黄色至棕色的稳定均相液体。本研究
采用Agilent HC-C18液相柱对毒死蜱乳油进行了含量测定分析。
1. 实验部分
1.1 仪器和试剂
仪器: Agilent 1100液相色谱仪,配有自动进样器及
VWD可变波长紫外检测器
色谱柱: Agilent HC-C18(4.6×250mm, 5µm)
试剂: 色谱级乙腈,Milli-Q超纯水
样品: 480g/L毒死蜱乳油,上海市秦禾有限公司生产。
毒死蜱标准品: 含量99.6%,国家农药质检中心提供。
1.2 操作条件
流动相: 乙腈:水 = 70:30
流量: 1.0mL/min
柱温: 室温
检测波长: 300nm
进样量: 20uL
1.3 实验步骤
标样溶液的配制:称取0.0526g毒死蜱标准品,置于50mL容量瓶中,用乙腈
溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。
试样溶液的配制:称取0.1128g毒死蜱乳油样品,置于50mL容量瓶中,用乙
腈溶解并稀释至刻度,摇匀,备用。
测定:在上述操作条件下,待仪器基线稳定后,连续注入数针标样溶液,待
相邻两针的峰面积差值小于0.5%,按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标
样溶液的顺序进行测定。
2. 结果与讨论
2.1 分离效果
由图可见,毒死蜱在该色谱条件下的柱效高、峰形好(理论塔板数为14825,
拖尾因子为1.015)。
2.2 定量测定
本研究采用外标法定量,并考查了测定的准确度和精密度。结果表明,回收
率均在98%~104%范围之内,相对标准偏差在1.25%~10.02%之间。
3. 结论
采用Agilent1100高效液相色谱仪和HC-C18反相液相色谱柱,可以很好地分离
测定毒死蜱乳油中的毒死蜱。本方法操作简便、节省溶剂,具有较好的准确
度和精密度,建议相关部门可以积极试用。
液相真空脱气机使用须知
邹祥旺
1. 真空脱气机的作用
液相色谱中流动相在线混合时容易产生气泡,特别是在低压混合时,这会影
响到泵混合的准确性以及流量的精确性。在线真空脱气机可以及时有效地去
除流动相中的溶解气体,从而降低压力脉动,提高色谱保留重现性。 此外,
高精密度低流量输出、紫外低波长检测,或样品/检测器对流动相中溶解氧
敏感时,使用在线真空脱气机也都是非常必要的。
2. 真空脱气机种类及原理
真空脱气机主要由四通道(四组管状的高分子半透膜)真空腔和真空泵构成。打
开电源开关后,控制电路即开启真空泵,真空泵运行使真空腔内产生部分真
空。真空度由压力传感器测定,根据传感器信号,脱气机通过运行或关闭真
空泵来维持真空度。流动相在LC泵的抽动下通过真空腔内的特殊高分子半透
膜,此时半透膜的外部空间处于部分真空状态,流动相中溶解的气体渗过半
透膜进入真空腔继而被真空泵抽出,这样溶剂到达脱气机出口时几乎已被完
全脱气而不含任何气体了。
10种磺酰脲类除草剂混合标准溶液的LC-MS总离子流图
1. 烟嘧磺隆;2.噻吩磺隆;3.甲磺隆;4.甲嘧磺隆;5.氯磺隆;
6. 胺苯磺隆;7.苯磺隆;8.苄嘧磺隆;9.吡嘧磺隆;10.氯嘧磺隆
毒死蜱乳油样品在HC-C18柱上的色谱图
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色谱俱乐部色谱俱乐部
新品介绍
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安捷伦现有的脱气机主要有两种:G1322系列和G1379系列。两者的区别在
于腔体不同,G1379将腔体分成四个独立的单元,并两两组合在一起,其半
透膜也不是管状,而是真正的两层膜。其余结构与G1322无异。G1322通路
的内体积大,可用于半制备型液相色谱。G1379内体积小,溶剂切换方便,
常用于分析型液相色谱和毛细液相色谱等流速不太大的系统。
3. 真空脱气机使用须知
脱气机最常见的问题是因盐分析出或长菌而导致的管路堵塞。管路堵塞后,
脱气机不能有效脱气,特征征兆为压力波动大和保留时间漂移。判断脱气机
是否工作正常的方法有(1)打开Purge阀,设定泵的流速2ml/min,提起当前所
使用溶剂瓶内的管线及溶剂入口过滤头,使之脱离液面一小段时间,此时溶
剂传送管内会产生一小段气泡,放下过滤头,让此段气泡通过脱气机,如果
脱气机正常,气泡应消失或缩小。(2)关闭泵,拧开脱气机出口或比例阀入口
管线,此时溶剂会因为重力流出,脱气机或溶剂入口过滤头堵塞时,溶剂会
流出不畅或不流出。
使用脱气机时请注意以下一些方面:
(1) 防止溶剂长菌
水相(特别是pH4~7的缓冲溶液)最易生菌,良好的使用规范包括:
A. 上机前过滤流动相,除去其中的颗粒、细菌等有形性物质。
B. 建议用棕色溶剂瓶承纳水相,并避免阳光直射。
C. 每两天更换一次溶剂或重新过滤溶剂。
D. 仪器较长时间不用时,将承纳水相的通道置换为有机相。
(2) 溶剂的置换
实验过程中我们经常要更换溶剂,当两种溶剂性质相差较大时,应注意溶剂
的过度,以免操作不当造成对脱气机乃至整个系统的损害。
A. 缓冲溶液/有机相切换:以水作为过度溶剂
原因:高盐缓冲液遇到有机相易盐析出,造成管路堵塞。
B. 正相/反相间溶剂切换:以异丙醇作为过度溶剂
原因:大部分正相溶剂和反相溶剂不能互溶,但都与异丙醇有很好的互溶性。
(3) 定期清洗/更换溶剂入口过滤头
清洗时将过滤头取下,以35%浓硝酸浸泡1小时以上,用水冲洗干净。如果确
认脱气机管路被堵塞,可打开Purge阀,然后以热水(约60ºC)及异丙醇冲洗通路。
更多详细信息请阅读参考手册或访问安捷伦生命科学与化学分析事业部售后
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液相色谱柱的维护(三)
黄悯嘉
这一期中我们将讨论到液相色谱柱在使用中遇见高水相流动相的问题。大家
都知道每天做完实验要冲洗色谱柱,这是一个很好的习惯。但是有不少人会
直接拿纯水长时间去冲色谱柱,这样做对于长碳链的高碳载量的色谱柱(尤其
是普通的C18柱)来说是很不利的。
我们知道,C18的键合相是疏水性基团,尤其对于一些已经封端的键合相,
其疏水性要比未封端的强。而对于反相柱来说,固定相往往需要很好地溶剂
化才可以充分地保留被分析物。根据相似相溶的原则,疏水的C18键合相容
易在有机相比例较高的流动相中溶剂化。如果流动相为纯水相,原本在键合
相周围的有机溶剂(如乙腈)会慢慢迁移到水相主体中,此时疏水的C18链会出
现折叠及塌坍的现像(如下图1所示)。当这种情况发生以后,键合相则无法充
分发挥它之前的作用了。具体在实验中会体现出保留时间的减小以及有时峰
可能会展宽的现像,这是因为被分析物进入色谱柱之后,所接触的固定相比
以前减少了。
对于固定相出现的坍塌现像,要恢复其键合相的状态,令其伸展开,最简单
的方式就是先采用一定含量的有机溶剂冲洗几分钟后,用纯有机溶剂再冲洗
二十分钟以上。对于在大部分键合相,起始的有机相比例为15%就足够了。
但对于碳载量高的C18键合相,则需要更高的有机相比例来冲。冲洗完后固
定相的状态,实际上可以通过比较保留时间而判断键合相是否依然坍塌。
所以,冲洗色谱柱时并不是简单地用100%水相。通常情况下,只需将含有缓
冲盐的那一相换成纯水相,按照同样的比例冲洗即可。比如:方法是
50%20mM磷酸二氢钾及50%乙腈,结束实验后,建议您用50%水和50%乙
腈冲洗;最后再用100%的乙腈冲洗。有一点要需要另外指出,不要将含有一
定比例的缓冲盐的流动相直接切换到100%有机相,这样做不仅不容易将缓冲
盐冲洗干净,而且如果原来的盐浓度较高,很容易发生盐析现象,而导致泵
的堵塞。如果您想彻底冲洗整套液相系统中的缓冲盐,建议将色谱柱取下,
方可用纯水冲洗。
实际上在不少水溶性很强的分析物中,经常会用到纯水相的流动相。这种情
况下,建议大家使用能耐高水相的色谱柱,如Zorbax SB-Aq,这款色谱柱可
以在低pH条件下耐受100%的高水相,而且使用寿命很长。
高水相下固定相坍塌示意图:
a) 在有机相和水相混合的流动相中 b) 固定相在纯水相中发生了坍塌现象
罗红霉素标准品色谱图
气相色谱常见问题解析(一)
吴华
色谱峰拖尾会影响组分的分离度、分析的灵敏度和定量的准确性,如果我们
在气相色谱分析中遇到拖尾峰,通常可以对问题进行一下初步的判断和归类,
然后从以下几个方面检查和排除故障:
1. 只有活性组分拖尾
极性或活性化合物容易被样品流经途径中的活性位点吸附而出现拖尾,这类
样品分析要求系统具有良好的惰性。一方面,需要保持系统(主要是进样口和
色谱柱)的洁净度,使用干净的衬管和分流平板。对于受到污染的色谱柱,可
以将进样口端截去0.5~1米,污染严重的话可以截去更多或用溶剂彻底清洗色
谱柱(须是交联键合固定相)。另一方面,应选用惰性更好的耗件,如去活的
衬管(不用或慎用玻璃棉)和惰性好的低流失色谱柱。正确的色谱柱安装也很
重要,如果是毛细管柱,色谱柱应切割的平整光洁,残留的毛边或碎屑都会
是潜在的活性位点,造成活性组分的吸附拖尾;注意色谱柱在FID/NPD/FPD
等检测器喷嘴内探伸的距离不宜过短,因活性组分有可能被喷嘴的金属管壁
吸附而拖尾。
2. 挥发性组分拖尾
早流出组分拖尾严重。多在不分流进样、柱上进样或样品溶剂与色谱柱极性
不匹配时出现,这主要是由于溶剂聚焦效应不够造成的。改善峰形的方法可
以是采用保留间隙柱(连接于分析柱前的一段3~5米去活空管柱)、降低进样口
温度50ºC、调整程序升温初始温度于溶剂沸点10~25ºC之下。还应确认色谱
柱安装后没有漏气,系统各连接处没有死体积。
3. 低挥发性组分拖尾
拖尾峰多是较晚流出的色谱峰,拖尾随保留增加而加剧。除了检查系统是否
存在污染,应注意消除冷凝点,适当提高进样口和/或检测器、色谱柱、传输
管线等处的温度。也有可能是系统死体积造成的,检查传输线接头或熔融石
英接头,减少死体积。
4. 所有组分都拖尾
主要原因包括进样口/色谱柱严重污染、分流比过低或色谱柱安装不当,如在
分流/不分流进样口,色谱柱探出密封垫圈的距离不应超过4~6mm,探出过长
会阻碍样品迅速有效地进入色谱柱,因而导致峰拖尾。毛细管柱伸入检测器
喷嘴距离太短,也可能使所有峰拖尾。
5. 其他可能导致峰拖尾的原因:
不分流模式下,延迟时间过长(通常应在0.5~1.0分钟之间)
进样技术不佳或进样时注射器中有样品残留
检测器尾吹气流量不足
PLOT色谱柱过载
组分共流出
某些含磷化合物在NPD白色铷珠上会显示拖尾峰,建议将基线补偿调节到70-
100pA以减少拖尾或更换为黑色铷珠。
ZORBAX Eclipse Plus液相色谱柱
安捷伦ZORBAX液相色谱柱家族最近又增加了一位新成员——ZORBAX Eclipse
Plus。由于采用了更先进的硅胶处理、键合以及封端技术,Eclipse Plus对于各
类型化合物都可以提供更卓越的峰形和更高的柱效。 特别是针对比较难分离
的碱性化合物,Eclipse Plus能够显著减少峰脱尾。例如,对于含有叔胺结构
的一些碱性化合物,由于其碱性较强,在反相条件下分离时容易与硅羟基相
互作用而导致峰的拖尾甚至峰变宽。罗红霉素就是这样一个含有叔胺结构的
大环内酯类化合物,它在多种反相柱上呈现严重拖尾,而采用Eclipse Plus它
的峰形得到了大大的改善(见右图)。
Eclipse Plus键合相: C18
色谱柱内径: 4.6mm, 3.0mm, 2.1mm
填料粒径: 5um, 3.5um, 1.8um
碳载量: 8%
比表面积: 160m2/g
孔径: 95Å
pH范围: 2-9
小物件 大作为——
安捷伦提供全系列认证的样品瓶及相关产品
截止至今年5月1日,安捷伦公司完成了大部分样品瓶及相关产品的认证工作,并对所有已认证的产品提供相应
的认证证书。使用安捷伦高品质的认证产品,帮助您获得高质量的分析测试结果。更多信息请详见
www.agilent.com/chem.vials或以出版号(5989-4902CHCN)检索中文宣传说明。
色谱条件依照2005版中国药典(二部)罗红霉素含量测定法
流动相:0.067mol/L 磷酸二氢铵溶液(用三乙胺调节pH值至7.0):乙腈=35:65
流速:1.0mL/min 柱温:30ºC 检测:210nm 进样量:10µL
真空脱气结构示意图
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ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6×250mm, 5µm
某相同规格其他C18柱
色谱俱乐部色谱俱乐部
新品介绍
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安捷伦现有的脱气机主要有两种:G1322系列和G1379系列。两者的区别在
于腔体不同,G1379将腔体分成四个独立的单元,并两两组合在一起,其半
透膜也不是管状,而是真正的两层膜。其余结构与G1322无异。G1322通路
的内体积大,可用于半制备型液相色谱。G1379内体积小,溶剂切换方便,
常用于分析型液相色谱和毛细液相色谱等流速不太大的系统。
3. 真空脱气机使用须知
脱气机最常见的问题是因盐分析出或长菌而导致的管路堵塞。管路堵塞后,
脱气机不能有效脱气,特征征兆为压力波动大和保留时间漂移。判断脱气机
是否工作正常的方法有(1)打开Purge阀,设定泵的流速2ml/min,提起当前所
使用溶剂瓶内的管线及溶剂入口过滤头,使之脱离液面一小段时间,此时溶
剂传送管内会产生一小段气泡,放下过滤头,让此段气泡通过脱气机,如果
脱气机正常,气泡应消失或缩小。(2)关闭泵,拧开脱气机出口或比例阀入口
管线,此时溶剂会因为重力流出,脱气机或溶剂入口过滤头堵塞时,溶剂会
流出不畅或不流出。
使用脱气机时请注意以下一些方面:
(1) 防止溶剂长菌
水相(特别是pH4~7的缓冲溶液)最易生菌,良好的使用规范包括:
A. 上机前过滤流动相,除去其中的颗粒、细菌等有形性物质。
B. 建议用棕色溶剂瓶承纳水相,并避免阳光直射。
C. 每两天更换一次溶剂或重新过滤溶剂。
D. 仪器较长时间不用时,将承纳水相的通道置换为有机相。
(2) 溶剂的置换
实验过程中我们经常要更换溶剂,当两种溶剂性质相差较大时,应注意溶剂
的过度,以免操作不当造成对脱气机乃至整个系统的损害。
A. 缓冲溶液/有机相切换:以水作为过度溶剂
原因:高盐缓冲液遇到有机相易盐析出,造成管路堵塞。
B. 正相/反相间溶剂切换:以异丙醇作为过度溶剂
原因:大部分正相溶剂和反相溶剂不能互溶,但都与异丙醇有很好的互溶性。
(3) 定期清洗/更换溶剂入口过滤头
清洗时将过滤头取下,以35%浓硝酸浸泡1小时以上,用水冲洗干净。如果确
认脱气机管路被堵塞,可打开Purge阀,然后以热水(约60ºC)及异丙醇冲洗通路。
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液相色谱柱的维护(三)
黄悯嘉
这一期中我们将讨论到液相色谱