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Bradford法测蛋白质浓度.doc

Bradford法测蛋白质浓度

qiangrenya
2011-08-24 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《Bradford法测蛋白质浓度doc》,可适用于自然科学领域

Bradford法测蛋白质浓度Bradford法测蛋白质浓度一、实验目的配制一组浓度分别为mgmlmgmlmgmlmgmlmgmlmgml的牛血清蛋白(BSA)溶液测定这组溶液的吸光度得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。测定未知蛋白质浓度样品的吸光度根据标准曲线得到蛋白质的浓度。二、实验原理考马斯亮蓝(CBB)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色最大光吸收在nm当它与蛋白质结合后变为青色蛋白质色素结合物在nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在min左右的时间内达到平衡完成反应十分迅速其结合物在室温下h内保持稳定。该法试剂配制简单操作简便快捷反应非常灵敏灵敏度比Lowry法还高倍可测定微克级蛋白质含量测定蛋白质浓度范围为~μgml是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。三、实验过程.准备所需的药品和仪器。.计算所需配制的溶液的量。先配制mgml的牛血清蛋白(BSA)母液再往母液中加入磷酸缓冲溶液(PBS)配制一组浓度分别为mgmlmgmlmgmlmgmlmgml的BSA溶液再将这组溶液稀释倍得到一组浓度分别为mgmlmgmlmgmlmgmlmgml的BSA溶液。计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液的体积。BSA体积(ul)PBS体积(ul)BSA浓度(mgml).具体操作过程。用天平称量g牛血清蛋白(BSA)溶于去离子水中配成ml的溶液溶液的浓度为mgml。用移液枪分别取ululululul的BSA溶液置于ml的EP管中再分别加入ululululul的磷酸缓冲溶液(PBS)配成ml的溶液震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分别为mgmlmgmlmgmlmgmlmgml的BSA溶液。移液枪分别移取ul刚配好的一组BSA溶液置于ml的EP管中各加入ul的PBS溶液震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分别为mgmlmgmlmgmlmgmlmgml的BSA溶液。另外量取ml的PBS溶液(BSA溶液浓度为mgml)作对照试验。用移液枪分别移取ul配好的一组BSA溶液滴加到孔板中再分别加入ul的考马斯亮蓝(CBB)。静置min后用酶标仪测得这组BSA溶液的吸光度。四、实验数据及处理测得的BSA溶液的吸光度如下:BSA浓度(mgml)吸光度用orgin作出吸光度对BSA浓度的关系曲线。五、实验结果分析得到的吸光度对BSA浓度的关系曲线为y=xR=。可以看出吸光度浓度的关系曲线中R值较小即测得的吸光度与浓度的线性不是很好。究其原因可能有以下两点:一是移液枪的操作不是很熟练二是移液枪在移液过程中存在着气泡使移的液体体积不准确。

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