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高效液相 色谱实验室 的良好规范
溶剂 的准备
正确准备溶剂对于高效液相色谱 试验是非常重要 的
, 它能有 效地避免鬼峰 、 降低基线噪声 , 从而提高分析能力 。
溶剂 质量
试验均应使用 高纯度 的溶 剂 , 级纯度 的溶 剂 比 分析 级 溶剂 的纯度更 高 , 所 以稍 贵 一 些 。 但是使用
级溶剂一般不会产生鬼峰 , 而使用 级溶剂可能会 由于杂质的存在导致 出现鬼峰 。
要保证配制流动相用水 的纯度足够高 。 因为去离子水通 常含一些有 机化合物 , 因此不推荐用 于 分析 。 常用 的超纯
水 几
·
是去离子水通过离子交换处理得到 , 现代的水净化装置可 以大量生产这种纯水 , 级纯水也 可 以从溶剂
经销商处购买 。
注 意 不要把 纯水放在塑料瓶 中
, 因为塑料 中的添加剂可 能会进人到水 中造成污染 。 最好用玻璃瓶储存超纯水 。
缓冲溶 液
缓冲溶液 的储存应有一定 的时间 限制 , 药典或相关资料对此都有要求 。 所有 的缓 冲溶液都应现用 现配
, 以确保不会 因为
缓冲溶液储存时间过长而使流动相 发生变化 , 同时也可避免生 长微生 物 。 的变化 和 微生 物 的生 长 都有 可 能影 响 色谱
分离 的效果 。
商品缓 冲溶液 中可能包含硫代硫酸钠等稳定剂
, 这些稳 定剂 的存在 可能会影 响缓 冲溶液 的光学 和 色谱性能 , 因 此 , 比较
理想的是购买不含稳定剂 的溶剂 。 注意 重复使用 的容器很容易被污染 , 因此推荐用小 容量容器装溶剂 。
过滤
理想情况下 , 所有溶剂都要通过 林 滤膜过滤后再使用 , 这样能够有效防止 由于微粒存在导致 流路管线堵塞 。 过滤
后应把溶剂放在密封容器 中 , 以 防止被重新污染 。 过滤后 的溶剂既可用 于色谱 分析 , 也可用 于 清洗诸如泵头 、 柱 塞杆 、单 向阀
和 密封圈等仪器部件 , 最大程度地清洗好这些部件能保证系统性能 良好 。
脱气
在流动相进人 系 统之前应首先脱气 。 没有脱气 的流动相进人到高压系统产生 的气抱会导致系统不稳
、
出现鬼峰等
问题 。 从溶液 中排除气泡 的
方法
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主要有 氦气脱气 、超 声波脱气和 真空 脱气 。 氦气或其他低溶解度气体是脱气 的有效方法
在线连续脱气可 以 防止空气重新溶解在溶剂 中 。
注意 确保溶剂瓶上有孔 , 与大气相通 , 以 防止溶剂 瓶 内部产生负压 。
溶剂 的使用
仪器
所有 流路上都应装过滤器 , 以 防止微粒进人系统 。 仪器不使用 时 , 应把过滤器浸人到 乙 睛水溶液 中 , 以 防止微生 物
的生长和污染物进人到过滤器中 。
流路管线应清洁通 畅 , 且不存在硬性弯曲部分 。
储液瓶应尽 可能与仪器处 于相 同高度 , 且应高于泵的人 口 。 流路管线应长度合适 , 保证在线过滤器达到储液瓶底部 。
注意 在做分析试验之前 , 应计算好总共需要多少 流动相 , 以 便 配制足够 的 流动相并装在合适 的 容器 中 。 流 动相 不 足会
造成系统抽干并充满空气 。 如果该类情况发生 , 需要用新配制的流动相重新冲洗系统并使基线平稳 。
流动相 特性
除非 系统和色谱柱能够耐受 , 一般不要使用强 酸或强碱溶液 。 因为 过高或过低可能会损害密封 圈 和 柱塞杆 。
如有疑问 , 使用之前最好与色谱柱或仪器经销商联系 , 了解清楚相关事项 。
水含量较高的流动相 中容易生长微生物 , 因此这类 流 动相 比纯有机溶剂 流动相 更 易 出现 问题 。 同时还应 注 意使用 水含
量较高的流动相时色谱柱使用方面 的限制 , 因为传统 的烷基键合 固定相在流动相 中有机溶剂 的含量低 于 以下 时容易 发生
碳链断裂 。 一些新型键合 固定相可 以在 以纯水为流动相 的条件下使用 。
为了避免使用含水流动相 时系统 中可能生成微生物 , 建议每隔 左右用纯有机溶剂冲洗 系统和 色谱柱 , 以清除
所生 长的微生物 。 此外 , 加人少量叠氮钠也是抑制纯水相 中微生 物生长 的有效方法 , 但是要注意它的剧毒性 。
注意 不要长时间 例如整个假期 将色谱柱和 系统充满水或缓 冲液
,
要经常用 至少含 的有机溶剂冲洗系统 。
大连依 利特分析仪 器有 限公 司 张庆 合 , 李 彤 编译
未完待续
浙公网安备 33021202002483