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微生物基础知识培训.ppt

微生物基础知识培训

求知
2011-07-27 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《微生物基础知识培训ppt》,可适用于自然科学领域

*我们所生活的环境中到处都存在着大量的微生物。在一般空气中微生物达个m在土壤中达×个g在严重污染的水中可达个ml。(饮用水要求细菌总数≤个ml大肠杆菌≤个ml。经水塔或贮水池贮存后短期内可繁殖至个ml。)人的头皮上有万个cm两手上约有万个g指甲污垢有亿个g粪便可达亿个。可以说微生物是无处不在无处不有。许多以前被人们认为是极端(高温、高压、强酸、强碱、低温等)甚至是致死的环境现在已发现生活着各种类型的微生物(称为极端微生物)。事实说明微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。分类三型八大类:真核细胞型微生物细胞核分化程度高有核膜和核仁细胞器完整。如真菌。原核细胞型微生物细胞核的分化较低仅有原始核无核膜、核仁。细胞器很不完善。DNA和RNA同时存在。这类微生物众多有细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体。非细胞型微生物是最小的一类微生物。无典型的细胞结构只能在活细胞内生长繁殖。核酸类型为DNA或RNA。病毒属之。葡萄球菌微生物形态乳酸杆菌炭疽杆菌炭疽杆菌  炭疽杆菌是人类历史上第一个被证实引起疾病的细菌。年RobertKoch首次在培养基上培养成功并说明其可形成内孢子体注射动物后可导致实验性炭疽是出现在历史上比较久的一种生物武器也是战争中常用的一种细菌曾使无数人丧命。二战时期日本部队曾经大量培养炭疽病菌并用活人标本进行实验。  炭疽杆菌是一种很大的格兰氏染色阳性杆菌可在普通培养基上需氧或厌氧条件下培养。芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌淡水中的螺旋菌酵母菌爱滋病病毒SARS病毒是一类新发现的冠状病毒禽流感病毒微生物的“生物界之最”微生物的“生物界之最”个体最小数量最多分布最广形态最简变异最易起源最早胃口最大抗性最强发现最晚食谱最广休眠最长界级最宽繁殖最快种类最多微生物五大共性微生物五大共性体积小面积大吸收多转化快生长旺繁殖快适应强易变异分布广种类多微生物的特点微生物的特点种类多、分布广微生物在土壤中的数量最多据统计一克土壤中含有几千万到几百亿的微生物。每毫克大肠杆菌细胞的表面积比每毫克人细胞的表面积大万被左右积极活动的大肠杆菌每小时能消耗它体重倍的乳糖微生物的食谱非常广泛凡是动植物能利用的营养微生物都能利用大量的动植物不能利用的物质甚至剧毒的物质微生物照样可以利用。如大肠杆菌在合适条件下每小时可以消耗相当于自身重量倍的糖而人体则需要年之久。个体小、胃口大微生物有惊人的繁殖速度大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代如细菌一般每~分钟既可分裂一次生产味精的谷氨酸短杆菌从摇瓶培养扩大到吨发酵罐的过程中在小时内细胞数目增加了亿倍乳酸菌每小时可产生为其体重~倍的乳酸一种产朊假丝酵母合成蛋白质的能力是大豆的倍比食用公牛强倍繁殖速、转化快适应强、异变异多数细菌能耐~-℃的低温在海洋深处的某些硫细菌可在~℃的高温条件下正常生长一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十年、几百年。由于微生物繁殖快也可在短时间内产生大量变异的后代。正是由于这个特性人们才能够按照自己的要求不断改良在生产上应用的微生物如青霉素生产菌的发酵水平由每毫升单位上升到近万单位利用变异和育种得到如此大幅度的产量提高。 营养物质PH一般细菌的生长最适酸碱度(pH)为~少数菌需在较酸或较碱的环境中生长繁殖。温度温度是细菌生长的重要因素之一各种细菌的适宜温度范围相差很大据此而有嗜热(℃)、嗜温及嗜冷菌之分。大多为嗜温菌(~℃)一般细菌的培养采用℃。气体  专性需氧菌:具有完善的呼吸酶系统仅能在有氧环境下生长。微需氧菌:在低氧压()生长最好。兼性厌氧菌:兼有有氧呼吸和无氧发酵两种功能但以有氧时生长较好。大多数病原菌属于此。专性厌氧菌:缺乏完善的呼吸酶系统(氧化还原电势高的呼吸酶、分解有毒氧基团的酶)只能在无氧环境中进行发酵。渗透压细菌的生长的环境因素粘质沙雷氏菌的菌落特征沙门氏菌的菌落特征铜绿假单孢菌的菌落特征弗氏志贺氏菌的菌落特征粘质沙雷氏菌的菌落特征各种细菌的菌落霉菌霉菌真菌在微生物世界中可以称得上是个"巨人家族"真菌的个头较大其中的许多成员对我们来说都是很熟悉的。例如在潮湿的天气里常常发现粮食、衣服、皮鞋上长了霉我们做酱、酱油、豆腐乳用的曲霉和毛霉等霉菌发面、酿酒用的酵母菌等都是真菌就连人们爱吃的蘑菇、木耳等蕈子也都是真菌大家族的成员。真菌是微生物中的一大类群属于真核微生物与人类关系非常密切。真菌是抗生素(如青霉素、头孢霉素)、有机酸等多种发酵工业的基础在自然界中则扮演着各种复杂有机物分解者的角色。然而有些真菌是病原菌引起人类和动植物病害有些真菌产生毒素使人、畜中毒严重者引起癌症。如黄曲霉产生的黄曲霉毒素毒害肝脏易引发肝癌。 各种曲霉的菌落各种病原真菌的菌落青霉的菌落青霉的菌落酵母菌酵母菌提起酵母菌这个名称也许有人不太熟悉但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。因为我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的我们喝的啤酒也离不开酵母菌的贡献酵母菌是人类实践中应用比较早的一类微生物我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素所以也可以做成高级营养品添加到食品中或用作饲养动物的高级饲料。酵母菌在自然界中分布很广尤其喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长例如在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果园土壤中最为常见。酵母菌的菌落酵母菌的菌落大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似但比细菌菌落大而厚菌落表面光滑、湿润、粘稠容易挑起菌落质地均匀正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一菌落多为乳白色少数为红色个别为黑色。各种酵母菌的菌落啤酒酵母的菌落红酵母的菌落微生物的营养微生物的营养水碳源氮源无机盐生长因子水:水是各种生物细胞必需的。水是良好的溶剂微生物的新陈代谢过程中的一切生化反应都离不开水的作用。碳源:碳源是合成菌体成分的原料也是微生物获取能量的主要来源。整体上看来微生物可以利用的碳源范围极广从大类上说可以分为有机碳源和无机碳源两大类凡必须利用有机碳源的微生物就是异养微生物凡能利用无机碳源的微生物就是自养微生物。糖类是最广泛利用的碳源。氮源氮源主要是供给合成菌体结构的原料很少作为能源利用。与碳源相似微生物作为一个整体来说能利用的碳源种类十分广泛。某些微生物(如固氮菌)能利用空气中分子态的氮或利用无机氮化物如铵盐、硝酸盐合成有机氮化物。多数致病菌则必须供给蛋白胨、氨基酸等有机氮化物才能生长。 无机盐类:无机盐主要可为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素。微生物需要的无机盐类很多主要有P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等其主要功能为构成菌体成分调节渗透压作为某些酶的成分并能激活酶的活性等。生长因子:有些微生物虽然供给它适合的碳源氮源和无机盐类仍不能生长还要供给一定量的所谓“生长因子”。其种类很多主要是B族维生素的化合物等。生长因子可以从酵母浸出液、血液或血清中获得。(Ⅰ延迟期Ⅱ对数期Ⅲ稳定期Ⅳ衰亡期)细菌生长的典型曲线微生物在空气中的分布微生物在空气中的分布空气本身缺乏微生物生活所必需的营养物日光对微生物也具有很强的杀菌作用另外空气一般是干燥的因此空气不是微生物生活的良好环境。空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘这类微生物大多数是腐生性的还来源于人和动物它们大多数是通过呼吸道排出的其中也包含有病原微生物悬浮在大气中。空气中微生物的分布随环境条件及微生物的抵抗力不同而呈现不同的分布规律。空气中存在较多的、存活时间较长的是各种真菌、放线菌的孢子及细菌芽胞。空气中微生物的数目决定于尘埃的总量。空气中的微生物的数量随人的密度、活动程度(尘土被搅动的情况)以及温度、湿度、风力等因素而异。空气中因缺乏营养物微生物在其中不能繁殖与久留只有抵抗力较强的微生物如芽胞杆菌、八叠球菌、葡萄球菌以及真菌(如青霉菌、曲霉菌、毛霉菌等)存活时间较长。空气携带细菌主要有种方式一是细菌可附着在尘土上(细微颗粒)长时间浮游在空气中其二细菌在人咳嗽、喷嚏、唱歌、讲话、呼吸时通过口腔、鼻腔部喷出的飞沫(大多数飞沫为μm)可长时间浮游在空气中飞沫的水分蒸发后便成飞沫核直径缩至l~μm附着的微生物随气流悬浮不定。空气中微生物是药品生产中引起污染的重要来源之一。因此必须做好空气的清洁卫生和消毒管理工作。微生物在人体中的分布 正常人体常见的微生物 在人的皮肤和与外界相通的粘膜腔道中都有微生物的生长繁殖。这些存在于人体各部位的微生物它们与宿主长期保持着共生与互生的关系通常称它们为正常菌群或正常人体常居菌。在正常情况下正常菌群的存在对人体是有益的。如大肠中大肠杆菌可以合成核黄素、B、维生素K及多种氨基酸等人体不可缺少的营养物质还能干扰和抵抗其它病原微生物对宿主的侵入。但某些正常菌群在人体抗力下降或当一些微生物异位侵入某些组织时都可以引起人体疾病这些细菌通常称条件致病菌。现将人体各部位存在的主要菌群分述如下。微生物在人体中的分布部位主要微生物的种类口 腔白色葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、梭形杆菌、螺旋体、真菌胃 一般无菌肠大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、葡萄球菌、粪链球菌、产气荚膜杆菌、破伤风杆菌、真菌、腺病毒等鼻咽腔葡萄球菌、绿色链球菌、类白喉杆菌、卡答儿球菌、绿浓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、副大肠杆菌、变形杆菌、腺病毒尿 道(男)前尿道:白色葡萄球菌、类白喉杆菌(女)无菌或少数革兰阳性球菌皮肤葡萄球菌白色葡萄球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、真菌阴道乳酸杆菌、白色念珠菌、类白喉杆菌、大肠杆菌外耳道葡萄球菌、类白喉杆菌、绿浓杆菌、非病原性抗酸菌眼结膜白色葡萄球菌、类白喉杆菌、结膜干燥杆菌等正常人体微生物的分布部位消毒与灭菌消毒与灭菌概述概述消毒:采用物理或化学的方法清除或杀灭外环境(传播媒介)中的病原微生物或其它有害微生物。外环境系指无生命的物体及其表面为叙述的方便人体体表皮肤的消毒除菌也放入此例。对消毒意义的理解有点需要注意其一是不必清除杀灭所有微生物主要是针对病原微生物其二消毒是相对的不是绝对的只要将微生物减少到无害化的程度。消毒剂:用于杀灭微生物的化学药物。如乙醇、新洁尔灭等。灭菌:用物理和化学的方法杀灭一切活的微生物(包括病原微生物和非病原微生物繁殖型或芽胞型微生物)其概念是绝对的。然而由于种种原因及遵照概率函数一些微生物总是以有限的机会得以生存因此灭菌的要求只是把微生物的存活概率减少到最低限度。据此工业化生产的灭菌允许将灭菌概率标准规定为即在万个试验对象中可有个以下的有菌生长就可认为该批产品是无菌的。灭菌剂:能杀灭一切微生物的药物。如过氧乙酸、甲醛等。根据上述定义消毒与灭菌是两个不同的概念消毒处理不一定能达到灭菌的程度而灭菌则一定能达到消毒之目的。灭菌是最彻底的消毒。无菌:是指物体或任一介质中没有活的微生物的存在即无论用何种方法检不出活的微生物。无菌操作:指在操作中采用或控制一定条件尽量避免产品污染微生物的一种操作方法程序。为此目的所用的一切物品、环境均应事先灭菌操作也应在无菌操作室中进行。无菌观念:指在无菌操作时避免污染任何微生物。“无菌”从定义上来说是一个绝对的概念但遗憾的是在科学和技术高度发展的今天药品的绝对无菌即做不到也无法加以证实。然而无菌制剂的安全性要求人们设定无菌的相对标准。FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品“无菌”的相对标准它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为(即产品的无菌保证值为)系同一标准的不同表示法。这一标准于起收录于USP中如今已为世界各国普遍接受和采用。药品生产过程中的消毒与灭菌与一般微生物学上有所不同。微生物学上的消毒与灭菌只要求杀灭和清除一切微生物使其不成为传染源。而药品生产过程中的消毒与灭菌因灭菌后直接用于人体故除要灭菌外尚需要考虑:、微生物的污染数量如大量污染即使灭菌其尸体、毒素仍然对人造成危害。、所选方法对其内在质量有无影响。、所用方法灭菌后有无残留毒性对于关键性的医疗用品要求更应严格。如环氧乙烷用于PVC一次性输液器灭菌效果虽好但它可引起人类畸变和癌症而PVC又是目前已知的塑料中吸附环氧乙烷最强的一种。据何复光等报道在环氧乙烷浓度为mg/l温度℃湿度作用h据气象色潜仪分析PVC输液器的环氧乙烷残留量达ppm。放于室温自然消散h残留量还达ppm。对此国外对于消毒灭菌后残留量进行了严格的控制如美国职业安全卫生局(OSHA)将原规定工人接触环氧乙烷的剂量从ppm降到lppm从而限制了环氧乙烷的使用。消毒与灭菌的方法按其性质可分为物理法和化学法两类。物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法利用物理因素作用于微生物将之杀灭或清除称为物理消毒法。常用的物理法有:机械消毒法、热力消毒法、光消毒法、电消毒法、声消毒法及辐射消毒法。此方法不是真正的杀灭微生物而只是达到机械排除。如刷、冲洗、擦拭、吸附、过滤等。上班前进入洁净室的洗手也属机械消毒法。由于反复冲洗、擦刷使细菌机械地被排除。有人证明用min流水冲洗可除菌min可除菌。过滤除菌是用物理阻留的方法除去微生物。如用砂滤法制备生活饮用水厂房空气净化设施以及戴口罩等都是利用过滤除菌的有效方法。目前滤膜器孔径最小可达μm能制取优质的注射用水.可将空气处理到l中只有颗µm尘粒的超净水平。一、机械消毒法在所有消毒与灭菌的方法中热力是一种应用最早效果最可靠.使用最广泛的方法。热杀灭微生物的机理是损伤微生物的细胞壁细胞膜、破坏微生物的蛋白质(凝固或变性).从而导致其死亡。热力消毒与灭菌的方法分为两类:干热和湿热。二、热力消毒法A)干热消毒与灭菌.灼烧:灼烧是直接用火焰灭菌。如微生物实验室接种针、接种环、涂菌捧等不怕热的金属器材的灭菌。在没有其它办法灭菌的情况下对于器械亦可用灼烧法灭菌。灼烧法来菌温度很高效果可靠但对器械有破坏性。.干烤:干烤灭菌是在烤箱中进行。适用于高温下不损坏、不变质物品的灭菌。例如玻璃制品:平板、试管、吸管注射器等均可用此法灭菌一般在℃下干烤l~h。(使用烤箱灭菌时应注意下列事项:()玻璃器皿应完全洗净以免吸附物高温时炭化洗净后完全干燥再放入烤箱内。()物品包装不宜过大放置物品不宜超过烤箱高度的三分之二。物品间应留有空隙以利于热空气对流。()灭菌过程中不得中途打开烤箱放入新物品以免突然冷却致使物品爆裂。()在高温下易损坏的物品如纸、棉织品、塑料制品、橡胶制品不可放入干烤箱内灭菌。()灭菌时间应从烤箱内温度达到所需温度时算起。.红外线照射:也是干热灭菌的一种方法。其波长是O~µm的电磁波有良好的热效应尤其是在~µm波长段。红外线的热能直接由放射的电磁波产生不需经空气传导加热速度快。但热效应只能在照到的表面产生不能使一个物体的左右前后均匀加热。高强度远红外线可产生℃高温故可用于医疗器械的灭菌年代前曾受重视但因后来塑料高分子产品增多使这种灭菌方法未能广泛使用。(B)湿热消毒与灭菌.煮沸法:煮沸法消毒是使用最早的消毒方法之一。由于其方法简单、方便、经济、实用效果好故今仍是一种常用的消毒方法。煮沸消毒的能力较强一般在水沸腾后再煮~min即可达到消毒目的。l℃几乎能立即杀灭细菌繁殖体、真菌、立克次氏体、螺旋体和病毒等。芽胞型菌则抗煮沸能力较强一般要h以上甚至高达h之多。如能在煮沸时加入增效剂可以增强煮沸消毒效果如在煮沸针尖时加入l~碳酸钠煮沸min即可达到灭菌要求同时还要防止其生锈保持它的锋利。零配件(如瓶塞穿孔器、接头、护套)的清洗处理中加盐酸或氢氧化钠液煮沸亦起到增效的作用。.高压蒸汽灭菌:目前常用下排气式高压灭菌器使用方法等介绍如下:手提式高压灭菌器:是实验室、卫生医疗单位常用的小型灭菌器。由铝合金材料制造为单层圆筒内有一铝质的盛物捅直径cm深cm容积约全重kg使用压力<.kg/cm。主要部件有压力表个指示高压锅内压力。排气阀个下接排气软管伸至盛物桶下部用以排除冷空气。安全阀个当高压锅内压力超过kg/cm时可自动开启排气。使用方法:在高压锅内放入约cm深的清水将消毒物品放入盛物桶内装物不宜太多且应使物品间留有空隙盖上锅盖注意将排气软管插入盛物桶壁上的方管内拧紧螺丝。当加热到表压为~磅/英寸*时打开排气阀。放冷空气至有蒸气排出即关闭排气l倒待上升至所需压力调节热源维持到预定时间。结束后排气至打开盖子取出物品。消毒液体时最好慢慢冷却以免减压过快液体外溢或瓶破裂。高压灭随应注意以下各点:()必须将灭菌器内冷空气抽尽或排尽空气的排尽程度与温度的关系极为密切(表)。           高压灭菌器内压力和冷空气排放与温度的关系 ()合理计算时间。其时间的计算应从灭菌器内达到温度要求时算起至完成灭菌为止。一般下排气式高压灭菌器为℃min或℃min。()包装与容器不宜过大过紧也不宜将物品放于铝饭盒内。()合理布放物品。不宜过多一般为且物品间留有空隙。()注意安全操作每次灭菌前应检查灭菌器是否处于良好的工作状态尤其是安全阀是否良好盖是否关紧。加热宜均匀灭菌后减压不可过猛。压力表退回“O”处才可打开盖。)为监测灭菌教果可采用留点温度计或嗜热脂肪芽胞菌生物指示菌片。 热力灭菌法高温杀灭細菌焚烧最彻底的灭菌方法烧灼直接用火焰灭菌方法干烤加热℃小时干热灭菌法湿热灭菌与干热灭菌的比较湿热灭菌法加压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法℃~分钟煮沸消毒法水煮℃分钟(繁殖体)~小时(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽℃~分钟(繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度(℃分钟)杀灭致病菌同一温度下湿热灭菌比干热灭菌效果好原因、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固、湿热的穿透力比干热大、湿热的蒸汽有潜热杀菌原理与作用紫外线可分为长波段、中波段和短波段组。以短波段.~nm的杀菌力最强。一般多以.nm作为紫外线杀菌波长的代表。紫外线照射能量较低不足以引起原子的电离仅产生激发作用使电子处于高能状态而不脱开。当微生物被照射此作用可引起细胞内成分特别是核酸、原浆蛋白与酶的化学变化从而使之死亡。各种微生物对紫外线的耐受力不同真菌孢子对紫外线的耐受力最强芽胞菌次之细菌繁殖体最差。但也有例外如橙黄八叠球菌的耐受力反比枯草杆菌芽胞高。三、紫外线消毒因紫外线是一种低能量的电磁辐射故穿透力极差空气中的湿度、尘粒对其均有影响在液体中亦随深度增加而降低。各种杂质(盐、有机物等)均可影响紫外线作用它不能透过固体物质。普通玻璃中有氧化铁可阻挡紫外线。因此它无法透过mm厚的窗玻璃。但能透过石英糊窗纸可透过~%聚氯乙烯薄膜开始时可透过但h后由于薄脱变质透过率可以降至%以下。消毒应用.空气消毒紫外线的空气消毒主要是利用局部空气先行照射消毒然后随着空气的对流而使全室空气得到消毒。为获得最大的反射章充分发挥紫外线的作用紫外线灯上需装反光性强的铝制反光罩。()固定式照射:将紫外灯固定于天花板上略高于人的头顶向下照射或固定于墙壁上侧向照射。每分神照射产生的效果相当于换气~次。每换气次约可清除原菌数的.。因紫外线对人体有害此类适于无人在的情况。若消毒必须在室内有人情况下进行则可用向上照射法即将灯固定于天花板或墙壁上离地m左右灯管下按装金属反光罩使光线反射到天花扳上。一般为防止损害人的健康每立方米的功率不超过IW。在~m的房间按装w紫外线灯管支。照射时每次~min间隔lh。用这样的方法可减少空气中微生物~甚至达%以上。()移动式照射:用支W紫外线灯管装于m的铝制圆筒内在一端装以m/min流量的风扇即制成了移动式紫外线空气消毒设备。这种装置依靠风扇使空气流经紫外线通道而将之消毒。可用于生活用房及缓冲间等消毒灭菌。在体积较小的房间lh照射可相当于换气次。.对水的消毒紫外线消毒清水装置的设计应使灯管不浸于水中。常用的直流式消毒装置呈管道状紫外线灯管固定于液面上lcm左右处。水由一端进人一端流出流过的水层不宜太厚一般不超过cm。使用注意要点l灯管表面应经常用酒精棉球轻轻擦拭除去表面的灰尘与污垢以减少对紫外线穿透的影响。.紫外线内眼看不见灯管放射出的蓝紫色光线并不代表紫外线强度。有条件的可用紫外线强度仪测定其强度无条件者可逐月记录使用时间。紫外线灯的平均寿命(每h开启次)可达h以上。.消毒时室内应保持清洁、干燥。空气中不应有灰尘或水雾如空气中含尘粒~粒/m则降低灭菌效率~湿度~紫外线照射h空气中细菌减少~%若相对湿度增到~%时则降低灭菌效率~一般相对湿度不宜超过~。不透紫外线的表面只有直接照射才能达到消毒目的因此要按时翻动以及室内不能放置过多不必要的物品。紫外线对人体有一定的危害直接照射(m远)~min可使皮肤产生红斑对眼睛直射s可产生刺激症状剂量再增大引起紫外线眼炎。因此应避免直接照射或眼睛直视。温度对紫外线有一定影响一般~℃若室温一℃~紫外线即失去作用。7.紫外线的灭菌效能与投射角度也有关系在等距离内每相差。则照射强度下降很多。如直射强度为.mW/cm倾斜时强度减至mW/cm若再倾斜。则强度减少到mW/cm。 微波是指频率在~MHz之间的电磁波。水可强烈地吸收微波使其极性分子转动分子间的磨擦而生热且升温迅速靠热力而灭菌。在数十秒至几分钟之内可达~℃并全部杀死液体中的微生物适于水溶性注射液的灭菌。另外固体药材饮片及固体制剂(丸剂、散剂、胶囊粉等)也含少量水分微波能穿透到固体内部由表至里被均匀加热而起干燥、灭菌的作用。多用于口服液体制剂的灭菌有望用于注射液的灭菌。但可能对某些药品的PH值、含量、颜色有影响。四 微波灭菌法臭氧是以无声放电法产生的。在一对交流电极之间隔以介电体当空气或氧气通过高压电极(~V)时在具有足够动能的放电电子中使氧分子电离一部分氧分子被聚合为臭氧。臭氧有很强的杀菌力高效、广谱。有的医用高分予器材厂采用臭氧发生器进行了净化车间的空气消毒效果甚为满意。五、电消毒法(一)概况年美国强生(Johnson)公司的一个分公司(Ethicon)首先应用辐照技术进行了手术缝合线的消毒。年。丹麦建立丁第一个钴辐射消毒装置。由于采用该方法消毒灭菌比热力消毒、环氧乙烷法具更优越的地方即灭菌彻底、不污染环境、无残留毒性、能耗低、更适用于热敏怕湿材料的灭菌等优点因此发展非常迅速。六、辐射消毒法辐射消毒法使用评价优点:()消毒效果可靠()不引起温度升高是一种“冷处理”灭菌()节约能源()不破坏包装可长期保存()穿透力强适用于封装灭菌()无残留毒性()处理过程干燥无消毒剂的沾污()可连续灭菌()无环境污染。缺点:()一次性投资大()必须有经过专门训练的技术人员管理。化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法一、气体灭菌法此法系指用化学思剂的气体或蒸汽对物品进行的灭菌。常用者为环氧乙烷、甲醛、过氧乙酸、丙二醇、乳酸、戊二醛等。(一)环氧乙烷在室温、常压下是无色气体具醚样臭可闻出的气味阈值为ppm沸点为.℃当温度低于℃时气体液化呈无色透明液体能溶于水。环氧乙烷具较强的扩散和穿透能力作用快对细菌芽胞、真菌和病毒等各种微生物均有杀灭作用属于广谱灭菌剂。.灭菌机理环氧乙烷属烷化剂它能与微生物的蛋白质、DNA等发生非特异性的烷基化作用对菌体细菌的代谢产生不可逆性破坏。.应用范围可用于对热敏感的塑料制品、橡胶制品、皮革制品、聚乙烯等包装的某些药品、工作衣.敷料等。.注意事项()环氧乙烷具可燃可爆性当与空气混合空气含量达(V/V)时即可爆炸。故应用时需用情性气体如二氧化碳或氟利昂等稀释如配成环氧乙烷加二氧化碳环氧乙烷~氟利昂~等多种规格的混合气。()环氧乙烷对塑料、橡胶、纸板等穿透力强亲和力也强。故灭菌完毕后需通空气或采用排除毒性气体装置将被某些材料吸收的环氧乙烷降到最低浓度。一些材料吸收环氧乙烷的情况列于表。二、表面消毒大多数的化学消毒剂仅能杀灭微生物的繁殖体而不能杀灭芽胞故一般用于表面消毒即在控制的环境中减少细菌维持无菌状态。选择的消毒剂必须是抗菌谱广的或有针对性的。(一)理想的化学消毒剂应县备的性质使用情况下的高效有效浓度低作用速度快性质稳定无腐蚀性低毒易溶于水可在低温下使用不易受外界理化因素影响无色、无味、无臭无残留毒性使用无危险性价廉。二)常用的消毒剂.醇类:醇类消毒作用较快性质稳定无腐蚀性无毒性能去污起清洁作用价廉易得。目前使用最为普遍的是乙醇。它属中效消毒剂可杀死各种微生物但不能杀灭细菌芽胞。杀菌机理是使菌体蛋白质变性。使用浓度。常用于皮肤及手的消毒。采取常用浓度仅ls就能杀灭绿脓杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、伤寒杆菌等。表面活性剂:带阳电荷的季胺盐类化合物能被牢固地吸附于带有负电荷的细菌表面破坏细菌质膜使菌体成分漏出。这类化合物列细菌繁殖体有广谱杀灭作用且作用快而强毒性亦较小属于低效消毒剂(可杀灭细菌繁殖体、真菌和亲脂病毒。但不能杀灭芽胞、结核杆菌和亲水病毒)。属于此类的药物有新洁尔灭(常用浓度l~)、杜灭芬(O~O)、洗必泰(O~)。使用时应注意配制消毒液时不宜用硬水最好用蒸馏水。高浓度在低温时易发生浑浊或析出宜置于温水(约℃)中使其混匀溶解澄清再配制所需浓度。新洁尔灭等虽属低效消毒剂但在医疗用品生产环境中鉴于此类药物杀菌浓度低价廉(与乙醇相比)作为综合消毒措施中的补充减少生产环境细菌数量还是有实用价值的。此类消毒剂常用于手、皮肤及操作台面等消毒。.含氯类消毒剂溶于水中能产生次氯酸者称含氯消毒剂。这类消毒剂属中效消毒剂常用于水的消毒。一般认为含氯类消毒剂杀菌机理是通过次氯酸的形成由次氯酸分解形成新生态氧以及由消毒剂中含有氯的直接作用。因次氯酸不仅较与细胞壁作用且因其分子小不带电荷易于侵入细胞内与菌体蛋白质或酶发生氧化作用而使微生物死亡。目前我国常用者有漂白粉、次氯酸钙、二氯异氰尿酸钠、氯胺T等。()漂白粉:主要成分为次氯酸钙(含)还含氯化钙(、氧化钙(、氢氧化钙()及水()。为白色颗粒粉末状有氧臭能溶于水溶液呈混浊状有大量沉渣。稳定性差可在空气中逐渐吸收水与二氧化碳而分解若保存不当遇月光热、潮湿等分解反应加快。一般含有效氯量~常以%计算用量。若有效氯低于%则不能使用。对物品有腐蚀与漂白作用。()次氯酸钙(漂白粉精):白色粉末有氯臭易溶于水有少量沉渣。含杂质少较稳定不易受潮分解。含有效氯~(一般按计算用量)。对物品有比较强的腐蚀与漂白作用。溶液呈碱性。其pH随浓度增加而升高。()二氯异氰尿酸钠:别名优氯净。为白色晶粉有浓厚的氯气味含有效氯~.。性稳定易溶于水溶解度为(℃)。溶液呈弱酸性。溶于水中产生次氯酸其水解常数为×级较氯胺T为高。水溶液稳定性较差在紫外线作用下有效氯丧失加速。影响含氯类消毒剂的因素:药液浓度愈高杀菌效果愈好pH值愈高杀菌效果愈差温度增高可加强杀菌作用有机物存在可消耗氯影响其杀菌作用水质硬度由ppm增至ppm对杀菌作用影响不大。毒性:次氯酸盐释放出的氯可引起流泪、咳嗽并剌激皮肤和粘膜严重者可使人产生氯气急性中毒表现为躁动恶心、呕吐、呼吸困难、甚至窒息死亡。干粉和溶液溅入眼内可导致灼伤。使用时务必注意。常用消毒剂的种类和用途①~乙醇水溶液②洗必泰溶于乙醇再加入甘油用于皮肤、器具等消毒③异丙醇水溶液用于皮肤、器具等消毒④甲醛~甲醛液~ml再加入~g高锰酸钾每m熏蒸量密闭~h刺激性强⑤戊二醛水溶液用于空气、器具等消毒。广谱、高效、低毒可杀芽孢和病毒毒性较轻⑥新洁尔灭(苯扎溴铵)水溶液用于皮肤、粘膜、器具等消毒有清洁和消毒双重功效抗菌谱较窄⑦杜灭芬(消毒宁)~水溶液用于皮肤、器具等消毒⑧过氧乙酸 a、~水溶液b、新配水溶液c、gm用于器具等消毒抗菌谱广可用于皮肤消毒杀灭某些病毒熏蒸但性质不稳定。⑨乳酸 a、~molLb、~mlm熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸喷雾用于空气消毒有强杀菌作用熏蒸密闭h以上。⑩麝香草酚麝香草酚溶于乙醇喷洒墙面、地面杀霉菌。影响消毒剂作用的因素消毒剂细菌环境种类浓度作用时间菌龄种类有机物温度酸碱度选择适当的消毒剂GMP与微生物GMP与微生物在药品生产中由于受到各种要素(制药厂房环境的空气、制药用水、操作人员、物料、设备等)的影响都可能导致药品的微生物污染。因此GMP对各种要素都提出了防止污染的基本要求。中国药典微生物限度检查法规定的检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数和控制菌检查。推行GMP目的:消灭污染、混药、差错污染的定义:当一个产品存在有不需要   的物质时它即受到污染。污染的形式:尘粒污染、微生物污染尘粒污染尘粒污染尘粒污染:是指产品因混入不属于它的那些尘粒而变得不纯净。尘埃、污物、棉绒、纤维以及我们的头发都是尘粒污染的潜在原因。临床资料表明:如药品被-μm的尘粒污染了尤其是静脉注射用药可以导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等严重的会致人死命。微生物污染微生物污染微生物污染是指因微生物产生、附着而给特定的环境带来的不良影响。如果细菌得到了必要的养料、一定量的水份和合适的温度它们就能迅速繁殖它们繁殖的速度快得惊人。通常一个细菌在仅仅小时后可产生出兆(百万)个的细菌。传播污染的五大媒介传播污染的五大媒介空气水表面人物料不同环境中微生物量不同环境中微生物量单位:个g传播污染的四大媒介-空气传播污染的四大媒介-空气空气:空气并不是产生污染的介质但它是污染的危险携带者。充满微生物的尘埃和水滴就是通过空气作为侵袭我们产品的媒介而成为重要的污染源的。当我们谈话、咳嗽和打喷嚏时被污了的水滴正是不断地从我们的呼吸道中放入我们的工作场所。尘埃微粒正是通过空气流不间断地在我们整个药厂范围循环运行着。空气中存在的尘埃微粒是含有微生物(细菌等)的。因此空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。这就是为什么要尽量保持空气洁净是极为重要的。在药品生产中减少空气中微生物数量的方法有多种常用的有以下种方法:①空气洁净技术采用的过滤方法过滤是最常用的方法。过滤介质种类很多例如:纤维素、玻璃棉或人造纤维等。空气净化装置可用于整个房间如无菌操作室也可只限于操作区域局部如超净工作台。②化学消毒方法采用消毒剂作用于室内空气和物体表面。③紫外线照射方法采用紫外线对室内空气进行照射。传播污染的四大媒介-水传播污染的四大媒介-水水:从理论上来讲微生物在纯水中是不能生长的。但是所有的各类水不管怎样仔细地蒸溜或过滤总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。在生产过程中水是应用最广泛的原料之一。这就是为什么我们药厂的卫生规程不仅必须仔细地控制用于生产过程的水而且要控制好如何正确地用水来清洗我们的设备。常用的对水消毒的方法与空气消毒的方法一样也是化学消毒剂、过滤与紫外线照射种。①化学消毒剂方法对水的消毒以化学消毒剂方法较常用效果也最好。常使用次氯酸钠或通氯气。在使用中应注意到水系统中不能留有消毒不到的“死角”。②膜过滤法适用于水系统的连续循环处理。③紫外线照射法在水系统中应用紫外线照射消毒适用于需要特殊处理的水(如光学透明度要求高)一般在末端之前。这种方法因处理过的水无臭无味而优于化学消毒剂方法因不产生微生物移居滤器的现象而优于膜滤器。在水系统中这种方法综合应用设计安装在适当的位置。传播污染的四大媒介-表面传播污染的四大媒介-表面表面包括:天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子由于空气中的湿度所有表面都包上一层含水的薄膜。这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒有很多时候表面还覆盖一层油状物质此层油膜易受到尘粒污染。表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。一个表面看起来很干净而实际上已经被千百万个微生物所污染除非已经做了正确的消毒灭菌。制药企业生产车间的厂房库房及实验室都必须清洁整齐。建筑物表面不透水光滑平整、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落并能耐受清洗和消毒。设备、管道应易于拆卸、结构简单便于清洁消毒。特别是药品生产过程中使用的容器包括内包装容器都应进行清洗和消毒。传播污染的四大媒介-人传播污染的四大媒介-人人是最常见的传染源。事实上人们常说人是药厂中最不清洁的成份最大的污染源。为什么呢一个原因人体是一个永不休止的污染媒介。当您每天来药厂上班时您也许随身将几百万细菌带入工厂。人体不同部位所带细菌数量人员的发菌量人员的发菌量洁净室内当工作人员穿无菌服时静止时的发菌量为~个(min·人)躯体一般活动时的发菌量为~个(min·人)快步行走时的发菌量为~个(min·人)穿平常衣服时发菌量为~个(min·人)有口罩发菌量:无口罩发菌量为(:)~(:)咳嗽一次的发菌量为~个喷嚏一次的发菌量为~个。人员污染的途径和方式人员污染的途径和方式人的头发和皮肤水滴衣着化妆品和珠宝手饰生产过程中人们所引起的混杂和误差人的头发和皮肤人的头发和皮肤每分钟从人类皮肤中要散发出约,个微生物如果说一小粒糖的空间中能装载亿个微生物那么您想想看在一股头发中可以容纳多少微生物呢我们的手也拥有大量的微生物。此外在人们正常的日常活动中都接触大量微生物。水滴水滴呼吸和咳嗽将产生出大量水滴这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染。口腔是对污染最为敏感的地区。一次咳嗽或喷嚏将把干百万个微生物引入工作环境内。衣着衣着从可洗涤的纺织物中可能散发出棉绒和淀粉粒。而从羊毛、开士米和其它松软的针纺织物中也可能散落出纤维和磨损下的微粒。污染也可能通过我们的鞋子进入工作场所。化妆品和珠宝手饰化妆品和珠宝手饰发胶、气雾除臭剂、眼脸膏、香粉等为微生物污染提供了极好的源泉。耳环、戒指、项链、手链能传播微生物污染。如果一小片珠宝碎片落入一批产品中则可能引起严重的尘粒污染。生产过程中人们所引起的混杂和误差生产过程中人们所引起的混杂和误差由人引起的污染也可能来自于生产过程中出现的混杂和误差。例如当员工没有按照SOP进行工作时车间的污染程度增加。让产品容器不加盖地存放将导致产品污染。传播污染的四大媒介-物料传播污染的四大媒介-物料物料系指原料、辅料和包装材料等。原辅料可能将大量的微生物带入到药物制剂中。因此选用符合标准的原辅料将有利于控制药品和环境的污染水平。来源于动物的原料药或辅料(如明胶)有可能被动物病原体所污染来源于植物的原料药或辅料(如淀粉)则可能被多种细菌、霉菌、酵母菌所污染。原辅料的处理方法因药物类型而异许多原辅料需进行消毒或灭菌处理。植物药材可用晾晒、烘烤方法使之充分干燥以减少微生物繁殖。原辅料在储藏过程中必须注意环境条件。包装材料特别是内包装材料一方面包装药品另一方面防止外界微生物进入药中。若处理不当在药品储藏和运输过程中极易引起污染造成严重后果。总之包装材料应考虑不同需要加以清洁或消毒处理进行合理封装。原则是尽量减少微生物数量预防发生污染。药品的生产、储存、使用的全过程都有因微生物污染而导致药物变质的因素。而药物变质一般需要很高的微生物污染程度。也就是说微生物面广、量大的繁殖才出现显著的易被觉察的损坏现象。微生物污染导致药物变质的因素         了解污染源对药品生产全过程可能造成污染的来源进行深入的了解研究从而设计一个完好的生产工艺制定规章制度和标准操作规程从各个环节采取消毒和卫生措施来防止微生物污染使产品达到所要求的卫生学质量包括稳定性及各种微生物参数。进行微生物监测在药品生产过程中应按GMP要求不断进行各项微生物卫生学监测。例如:对洁净室空气中的浮游菌、沉降菌的监测对无菌设备清洁灭菌的验证对非无菌药品进行细菌和活菌数测定和病原菌的限制性检查等。防止微生物污染的原则药品生产人员卫生注意事项药品生产人员卫生注意事项新进人员的健康检查:药品生产企业在招收新职工时一定要对新职工进行全面的健康检查要确保新进厂的职工不患有急性或慢性传染病。另外还要根据新进职工安排的具体岗位性质再确定其它具体检查的项目。建立生产人员健康档案:药品生产企业应对职工建立个人健康档案以便于检查、了解、追踪个人健康好坏的状况培养药品生产人员良好的个人卫生习惯洁净区生产人员要求如何培养良好的个人卫生习惯如何培养良好的个人卫生习惯勤洗手、勤剪指甲定期洗澡、勤理发勤换衣服、勤洗工作服在生产区内做到三个严禁:禁止吃东西、禁止吸烟、禁止大声喧哗洁净区生产人员要求洁净区生产人员要求人员卫生净化要求鞋的净化:可使用一种地垫它具有粘性表面能杀灭细菌并经抗静电剂的处理可除去人员脚上的尘粒。工作服的净化:工作服的使用可沉积吸附大量微生物和不清洁物衣服本身也会散发纤维屑故应经常清洁、灭菌。手的净化:手是交叉污染的媒介要教育生产人员警惕对产品的污染。用消毒皂和流水洗。头罩:头罩必须把全部毛发遮住。口罩:常用的口罩由~层纱布制成。带口罩一定要遮住口、鼻不能带潮湿的口罩使用不能超过h不可正反两面使用。纱布阻留细菌的效率(洗涤次)口罩结构阻菌率(﹪)层层层层洁净区工作人员要尽可能少而精只有工作需要时才能进入操作人员在洁净区动作尽量要缓慢避免剧烈运动以减少人的发尘量洁净区的门应关紧避免不必要的移动以保持洁净区的风速、风量、风型和风压如果是无菌区的话操作人员的自我约束就更多要严格按无菌操作规程执行。日常工作日常工作生产前开启紫外灯灭菌生产结束后岗位人员的工作:彻底清洁生产现场和设备表面生产结束后灭菌人员的工作:用消毒剂擦拭顶(包括高效送风口)、墙壁、地面等并开启紫外灯定期进行消毒谢谢大家!

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