HPLC法同时测定消炎利胆片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

中国药师 2008年第11卷第7期 China Pharmacist 2008，Vo1．11 No．7 HPLC法同时测定消炎利胆片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量 郭炎荣 路玫 卢华 (广西壮族自治区人民医院 南宁530021) 摘 要 目的：建立消炎利胆片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定方法。方法：以XTerra RPC 。色谱柱为分离柱， 以甲醇 水(45：55)为流动相，采 用 HPLC法测定。结果：本品 中穿心莲内酯含量测定线性范围为 16—160 Ixg。mlI1(r= 0．999 9)，平均回收率为98．87％(RSD=1．90％，n=6)；脱水穿心莲内酯含量测定线性范围为32～320 Ixg·ml (r=0．999 9)， 平均回收率为99．54％(RSD=1．93％ ，n=6)。结论：此法操作简单、结果准确，可用于消炎利胆片的质量控制。 关键词 消炎利胆片；穿心莲内酯；脱水穿心莲内酯；高效液相色谱法 中图分类号：R927．2 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2008)07-0823-02 Simultaneous Determination of Andrographolide and Dehydroandrographolide in Xiaoyanlidan Tablets by HPLC Guo Yartrong，Lu Mei，Lu Hua(People’S Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region，Nanning 530021，China) ABSTRACT 0bjective：To establish a method for determination of andrographolide and dehydroandrographolide in Xiaoyanlidan tablets．Method：HPLC was conducted on a XTerra RPC1 column with a mobile phase of methanol—water(45：55)．Result：The linear range of andrographolide was 16—160 Ixg·ml (r=0．999 9)，and the average recovery was 98．87％(RSD=1．90％，n：6)respec— tively；The dehydroandrographolide was 32—320 Ixg·ml (r=0．999 9)，and the average recovery was 99．54％(RSD=1．93％ ，n= 6)respectively．Conclusion：This method was simple and feasible for the quality control of Xiaoyanlidan tablets． KEY W ORDS Xiaoyanlidan tablets；Andrographolide；Dehydroandroga'apholide；HPLC 消炎利胆片是由穿心莲、溪黄草、苦木等组成的复方制 剂 ，具有清热、祛湿 、利胆之功效 ，用于肝胆湿热弓I起的口苦 、 胁痛，急性胆囊炎、胆管炎等疾患。其主要有效成分为穿心 莲内酯及脱水穿心莲内酯等二萜内酯类 。本文采用高效 液相色谱法测定了穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯的含量 ，结 果准确、操作简便，现报道如下。 1 仪器与试药 美国Waters 600型四元液相色谱泵，Waters996型光电 二极管阵列检测器，WatersM32色谱工作站；METTLER AE 240型电子天平(瑞士)；超声振荡仪：SK3300LH(上海科导 超声仪器有限公司)。 穿心莲内酯对照品(批号 ：0797-200106)、脱水穿心莲内 酯对照品(批号 ：110854—200305)，均为中国药品生物制品检 定所提供。消炎利胆片(批号：060102、060303、060701，广州 花城制药厂)。流动相用水为重蒸水；甲醇为色谱纯，其余试 剂均为分析纯。 2 方法和结果 2 1 色谱条件及系统适应性 色谱柱：XTerra RP18(150 mm×3．9 mm，5 Ixm)；流动 相：甲醇一水 (45：55)；检测波长：250 nm；柱温：30 oC；流速 ： 1 0 ml·min～。在此色谱条件下，理论塔板数为按穿心莲内 酯峰计算>5 000。供试品中穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯 作者简介：郭炎荣，男，学士，副主任药师，从事i临床药学研究。 Tel：(0771)2186167 E-mail：guoyanro@163．tom 氢土莫酸提取效果较好，故选择甲醇为提取溶剂。 3．4 提取方法的选择 分别用“超声波处理(浸泡 1 h后超声处理40 min)”、 “索氏提取法 (10 h)”、“冷浸法 (振摇 2～3 min后浸泡过 夜)”等三种提取方法提取茯苓中的去氢土莫酸，HPLC测定 结果显示三种提取方法的去氢土莫酸含量测定结果基本一 致，三者比较，超声波处理的方法操作简便、省时。超声波提 取时间试验结果表明，超声处理40 min可将去氢土莫酸提 取完全。采用浸泡 I h后超声处理40 min的提取方法将去 氢土莫酸提取完全。 3．5 小结 茯苓药材具体成分含量测定目前仍无药典确定方法，本 文通过对四环三萜类物质进行定量分析研究，确定去氢土莫 酸含量测定方法，对茯苓药材内在质量控制提供可行依据。 参 考 文 献 l 赵吉福，陈英杰 ，姚新生．茯苓的抗肿瘤研究[J]．中国药物化学杂志，1993， 3(2)：128—129 2 仲兆金，许先栋．茯苓三萜化学成分及其光谱特征研究进展[J]．中国药物 化学杂志，1997，7(1)：71 78 3 沈芋，许先栋．茯苓三萜成分的最新研究进展[J]．中草药，1999，30(It)： 879 881 (2007-05—23收稿 2008-01 l5修回) ’ 维普资讯 http://www.cqvip.com www·zgys·org 研究报告 能与其他成分很好分离，分离度大于1．5，阴性试验在对照品 位置无干扰，见图 1。 A 丁 下 1 ] 2 c 8’ l B A．对照品穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯 B．阴性样品 C．样品 1．穿心莲内酯 2．脱水穿心莲内酯 图1 高效液相色谱图 2．2 对照品溶液制备 精密称取穿心莲内酯对照品10．0 mg、脱水穿心莲内酯 对照品20．0 mg于 25ml量瓶中，加 甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀 ，即得对照品贮备液。 2。3 供 试液的制备 取本品20片，除去糖衣 ，精密称定 ，研碎，精密称取粉末 适量(约相当于本品7片)，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇30 ml，密塞，浸渍 30 min，超声 30 min，过滤并将滤渣用少量 甲 醇洗涤两次，合并滤液和洗液，加甲醇定容至50 ml。进样前 用0．45 m微孑L滤膜滤过即得。 2．4 阴性对照溶液的制备 按本品的处方、制法制备缺穿心莲的阴性样品，按供试 品溶液制备方法制成缺穿心莲阴性溶液。 2．5 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线及线性范围考察 精密吸取对照品贮备液 1．0，2．0，4．0，8。0，10．0 ml，分 别置于25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度 ，摇匀 ，分别进样 5 l， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 峰面积，以峰 面积对浓度进行 回归分析，得 回归方 程 ：穿心莲内酯 ：Y=1．832×10 X一9．658(r=0．999 9)；脱 水穿心莲内酯：Y=4．065×10 X一5．362(r=0．999 9)。试 验结果表明，穿心莲内酯浓度在 16～160 g·ml 范围内，脱 水穿心莲内酯浓度在32～320 g·ml一 范围内，线性良好。 2．6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，连续进样 5次，测得穿心莲 内酯 RSD为0．75％；脱水穿心莲内酯 RSD为0．65％。 2．7 重复性试验 取同一批号样品(060102)分别制备 5份样品溶液进行 含量测定，结果穿心莲内酯 RSD=0．68％(I"1=5)，脱水穿心 莲内酯 RSD=1．21％(I"1=5)。表明该方法重复性良好。 2．8 稳 定性试验 取同一浓度供试品溶液分别在0，2，4，8 h进样测定，结 果表明被测成分在8 h内基本稳定。 2．9 加样回收率试验 取已知含量的样品粉末适量，精密称定 ，精密加入对照 品溶液 ，按供试液的制备方法测定。结果见表 1、表 2。 ． 表1 穿心莲 内酯加样回收率试验结果(n=6) 表 2 脱水穿心莲内酯加样回收率试验结果(n=6) 2．10 样品测定 按供试液的制备及检测方法 ，分别测定 3个批号的样 品 ，结果见表 3。 表3 含量测定结果(n=3) 3 讨论 穿心莲主要有效成分为二萜内酯类成分 ]，含有穿心莲 内酯、新穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯等成分 ，本文选择穿 心莲内酯及脱水穿心莲内酯二者含量作为测定指标。在供 试液提取方法选择时，参考有关文献 ，我们对各种提取方 法如直接超声提取、浸渍后超声提取以及回流提取等方法进 行了考察，并对提取溶剂的选择、提取溶剂的用量、浸渍时间 以及超声时间等因素水平进行了正交试验，结果浸渍后超声 方法所提得的总含量高于其他方法。 穿心莲成分的主要成分的含量与其产地、收期和加工提 取工艺有很大的关系，往往造成含量的变化，本文以 HPLC 法同时测定消炎利胆片中穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯含 量，具有专属性强、分离效果好、灵敏度高等优点，可适用于 消炎利胆片的质量控制。 参 考 文 献 1 肖树雄，王晓钰 ，郑剑红．穿心莲的成分及其分析方法研究概况[J]．中国 药师，2002，5(11)：693 2 任谦．穿心莲药材质量研究[J]．中药研究与信息，2004，lO(6)：24 3 张映娜，李肠华，范梅娟，等．HPLC法测定莲芝消炎胶囊中穿心莲 内酯和 脱水穿心莲内酯的含量[J]．中国药师，2006，9(12)：1131 (2007．12-28收稿) ㈠_二¨ I I I 1 I I I l l l l l l I ， ／ 维普资讯 http://www.cqvip.com