液相色谱

nullnull上海岛津 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 中心 姚 劲 挺 Tel: 021-64728442-321 64711813 Fax: 021-64711499null上海代 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 处: 021-64728442 免费电话: 800-810-0439 维修部: 021-64451437 零配件: 021-64677635 http://www.shimadzu.com.cnnull 液相色谱基础知识null一、色谱起源null液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析 流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用 气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法 适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析 流动相只起运载样品分子的能力 液相色谱基础知识nullHPLC的分离类型正相色谱 (NP-HPLC) 反相色谱 (RP-HPLC) 反相离子对色谱 (RPIC) 离子交换色谱 (IEC) 空间排阻色谱 (SEC) 手性化合物分离模式(Chiral separation mode) null液相色谱按两相极性不同分为: 正相色谱 反相色谱 化合物保留时间随流动相配比的变化 不同极性的化合物出峰顺序 null正相HPLC色谱柱 硅胶型 氰基型 氨基型 糖类分析 二醇基型 蛋白质分析Silica gelSiSi-Si-CH2CH2CH2CN -Si-CH2CH2CH2NH2 -Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)Modified Sinull反相HPLC色谱柱C18 (ODS) type C8 (octyl) type C4 (butyl) type Phenyl type TMS type Cyano type-Si-C18H37SiNon-polar propertynull 色谱柱 : 非极性 溶剂 : 极性 水 / 甲醇 / 乙腈反 相 色 谱液相色谱流程图液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理流动相流动相流动相选择注意事项： 纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 流动相配制时的顺序null溶 剂 等 级水的等级 纯化水 蒸馏水 去离子水波长 (nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率null水 / MeOH梯度 ODS 柱鬼峰Gradient Curve1 ml/min, 0-100% MeOH over 10 mins and hold for 15 mins.溶 剂 等 级鬼峰的出现null溶 剂 等 级溶剂的等级 HPLC级 优级纯 分析纯都经过蒸馏和0.45um的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒)优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.22um的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱null甲醇 乙睛 正己烷分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图溶 剂 等 级溶剂前处理溶剂前处理 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 过滤膜种类 水系过滤膜 有机系过滤膜null 30mm内径： 适用于大进样量的过滤，由0.22µm和0.45µm两种规格, 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于50µl。 13mm内径： 适用于范围广的过滤，由0.22µm和0.45µm两种规格,材料为纤维素。 3mm内径： 适用于小进样量的过滤，由0.22µm和0.45µm两种规格。处理样品体积为7µl。 样品过滤头的类型：null滤膜类型： 聚四氟乙烯滤膜： 适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜： 不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶液，推荐用于蛋白质和其相关样品。 尼龙66滤膜： 适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸,70%乙醇、二氯甲烷、不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜： 具有蛋白吸收低，同样适用水溶性样品和有机溶剂。 溶剂前处理溶剂前处理 脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 一般混合溶剂中能容纳的空气量往往要比单个溶剂所能容纳的空气总量要小 气泡对测定的影响： 1）柱压波动，流量偏小 2）基线波动 返回null流路中形成气泡引起的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 改变保留时间和峰面积 流动相中形成气泡对液流的不良影响 泵中形成气泡使液流波动 峰变形 柱中气泡形成和累积使流动相绕流 尖峰或锯齿状噪声 检测池中气泡形成和累积产生基线噪声输液泵输液泵输液泵控制方式： 恒流控制 恒压控制输液泵类型： 注射泵 柱塞往复泵 隔膜泵null柱塞往复泵null柱塞往复泵优点 压力脉动小 易于更换溶剂 缺点 需要更换柱塞杆密封圈岛津VP系列输液泵岛津VP系列输液泵目的 单元 流速范围 特性和应用 分析 LC-10ADVP 0.001-9.999 无脉动，适于 半微量LC 和 LC-MS LC-10ATVP 0.001-9.999 非凡的耐用性， 适于常量分析*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度null等度洗脱null梯度洗脱null分析时间长分离度差 MeOH / H2O = 6 / 4MeOH / H2O = 8 / 2( column : ODS type )等度洗脱null95%30%MeOH 浓度梯度洗脱null梯度洗脱： 优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度 注意事项： 溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差 梯度混合的溶剂互溶性要好 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）null混合器低压梯度比例阀 高压梯度低压梯度脱气机高压/低压梯度系统null返回高压梯度系统 梯度准确度好 系统复杂 (需两台或三台泵) 低压梯度系统 系统简单 需在线脱气机 存在时间滞后效应高压/低压梯度系统进样器进样器自动进样器 手动进样器 原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入返回null手动进样器的原理图 装填状态进样状态返回null进样体积 检测器响应值定量管体积的一半3倍定量管体积全量注入部分注入进样体积与响应值关系返回柱温箱柱温箱分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性 柱温控制的优点：色谱柱色谱柱1）柱压低于150kgf/cm2（15cm色谱柱） 2）柱温在40℃左右，最高使用温度为50℃ 3）流动相PH使用范围为2～7.5 返回ODS柱的使用注意点：流动相注意点流动相注意点离子对试剂的使用 具有缓冲盐流动相的使用 分析结束及开始 流动相平衡 加快平衡时间 异丙醇的使用 LC检测器LC检测器紫外可见检测器（UV/VIS） 二极管阵列检测器（PDA） 示差检测器（RID） 电导检测器（CDD） 荧光检测器（RF） 电化学检测器（L-ECD） 质谱检测器（MS） 蒸发光散射检测器（ELSD） 紫外可见检测器紫外可见检测器原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：Lambert-Beer定律，A＝KCL 优点：1）对温度和流速变化不敏感 2）可用于梯度分析 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外可见检测器null紫外可见检测器岛津VP系列紫外检测器功能岛津VP系列紫外检测器功能1）设定时间程序（波长切换等） 2）双波长检测 3）比例色谱，初步判断峰的纯度 4）停泵扫描，确定组分最大吸收波长NEXTnull波长切换返回null双波长检测返回null比例色谱280nm220 nmratio 280/220返回null波长扫描返回二极管阵列检测器（SPD－M10AVP）二极管阵列检测器（SPD－M10AVP）二十一世纪 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 紫外检测器 色谱信息： 保留时间 常规紫外检测器 紫外光谱 二极管阵列检测器null样品池二极管阵列（512个单元）光栅D2 / W灯每一单元可检测一个 波长下的吸光度二极管阵列检测器null三维谱图二极管阵列检测器的优点二极管阵列检测器的优点1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索NEXTnull峰纯度检验（3点光谱图比较）Initial detection pointFinal detection pointT1T3T2peak topup slopedown slope1/21/3null乙酰水杨酸下降点上升点, 顶点峰纯度检验（3点光谱图比较）返回null光谱库检索返回检测器检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率变化以测定 试样各组分浓度。 优点：通用型检测器 缺点：1）对温度和压力变化敏感 2）不能用于梯度分析 示差折光检测器返回null 糖的色谱图Analytical Conditions Column : Shim-pack CLC-NH2 Mobile phase : Acetonitrile / water = 7 / 3 Flow rate : 1.0 mL/min Temperature : Ambient Peaks 1. 甘油 2. 木糖 3. 果糖 4. 葡萄糖 5. 蔗糖 6. 甘露糖 7. 乳糖荧光检测器荧光检测器原理: 基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 缺点: 仅适用于测定可产生荧光的物质 优点: 1) 灵敏度极高,是最灵敏的检测器之一 2) 选择性好 3) 对温度和流速不敏感,可用于梯度洗脱 可检测物质: 多环芳烃,霉菌毒素,酪氨酸,色氨酸,儿茶酚氨等(具有对称共轭体系) 数据处理数据处理岛津液相色谱数据处理单元： LC-Solution色谱工作站 CLASS-VP色谱工作站 C－R7A色谱数据处理机 C－R8A色谱数据处理机返回null液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理