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上传者: ytdyan 2011-07-20 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《透析doc》,可适用于自然科学领域,主题内容包含透析自ThomasGraham年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中除盐、符等。

透析自ThomasGraham年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状将生物大分子样品溶液置入袋内将此透析袋浸入水或缓冲液中样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为"保留液"袋(膜)外的溶液称为"渗出液"或"透析液"。透析的动力是扩散压扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度还正比于膜的面积和温度通常是透析升高温度可加快透析速度。透析膜可用动物膜和玻璃纸等但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜目前常用的是美国unionCarbide(联合碳化物公司)和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量缩写为MwCO)通常为万左右。商品透析袋制成管状其扁平宽度为mm~mm不等。为防干裂出厂时都用%的甘油处理过并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质它们对蛋白质和其它生物活性物质有害用前必须除去。可先用%乙醇煮沸小时再依次用%乙醇、molL碳酸氢钠和molLEDTA溶液洗涤最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明%乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于蒸馏水中若长时间不用可加少量NaN以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口用时必须仔细检查不漏时方可重复使用。新透析袋如不作如上的特殊处理则可用沸水煮五至十分钟再用蒸馏水洗净即可使用。使用时一端用橡皮筋或线绳扎紧也可以使用特制的透析袋夹夹紧由另一端灌满水用手指稍加压检查不漏方可装入待透析液通常要留三分之一至一半的空间以防透析过程中透析的小分子量较大时袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时体积增加%是正常的。为了加快透析速度除多次更换透析液外还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管以使透析袋沉入液面以下。检查透析效果的方法是:用%BaCl检查(NH)SO用%AgNO检查NaCl、KCl等。为了提高透析效率还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司(BiomedInstrumentsInc)生产的各种型号的Zeineh透析器由于使用对流透析的原理使透析速度和效率大大提高

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