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Agilent6500系列 LC-MS Q-TOF 现场培训资料 .pdf

Agilent6500系列 LC-MS Q-TOF 现场培训资料…

mkyye 2011-07-14 评分 0 浏览量 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《Agilent6500系列 LC-MS Q-TOF 现场培训资料 pdf》,可适用于自然科学领域,主题内容包含AgilentLCMSDQTOF现场培训教材一、仪器硬件概览LANSwitchLAN典型配置图一、仪器硬件概览仪器原理简介Quad四极杆分析器由四根符等。

AgilentLCMSDQTOF现场培训教材一、仪器硬件概览LANSwitchLAN典型配置图一、仪器硬件概览仪器原理简介Quad四极杆分析器由四根棒状电极组成。相对两根电极间加有电压(VdcVrf)另外两根电极间加有(VdcVrf)。其中Vdc为直流电压Vrf为射频电压。四个棒状电极形成一个四极电场。右图是这种分析器的示意图:离子从离子源进入四极场后在场的作用下产生振动如果质量为m电荷为e的离子从Z方向进入四极场在电场作用下其运动方程是:离子运动轨迹可由马修方程的解描述右图是马修稳定图。这是一张RF和DC电压结合图。这张图可以预测给定的离子在四级杆场中是否稳定。对于特定的RF和DC电压包含这个点的在质谱区域内的离子将会通过进入四级杆进入检测器。这条扫描线由调谐文件中设置的宽度增益和宽度补偿决定。如果降低宽度补偿扫描线将会下降峰宽度将会加宽。如果扫描线被提高峰宽度将会变窄。一、仪器硬件概览仪器原理简介TOF离子离开离子源的动能T离子飞行的线速度v等于飞行距离L除以飞行时间t离子飞行的时间正比于离子质荷比的均方根离子质荷比正比于飞行时间的平方一、仪器硬件概览仪器原理简介QTOFTTIMode(TOFMode)、(MSMode)MSMSMode一、仪器硬件概览仪器构造离子源ADualESIBAPCICAPPIDMMIEDualNanoESIFPDFMALDIGChipCube分析用雾化器IButton参比用雾化器一、仪器硬件概览仪器构造示意图一、仪器硬件概览仪器构造实物四级杆一、仪器硬件概览仪器构造实物一、仪器硬件概览仪器构造录像(TOF)二、软件概览软件结构定性软件定量软件采集软件仪器配置诊断软件进程终结记录本TOF数据转换软件采集软件进程管理器二、软件概览数据采集软件MassHunterWorkstation打开保存方法打开保存序列序列编辑工具记录本隐藏显示功能区运行及序列控制菜单栏复合栏工具栏状态栏二、软件概览数据采集软件MassHunterWorkstation仪器状态区实时绘图区方法区序列区质谱轮廓图质谱棒图色谱图二、软件概览数据采集软件MassHunterWorkstation选择想要监视的参数二、软件概览数据采集软件MassHunterWorkstation在每个模块图标上单击左键可以显示相关的功能菜单灰色表示待机Standby二、软件概览数据采集软件MassHunterWorkstation指示在上一次扫描中参比离子的发现状态颜色状态绿色:所有的参比离子均找到了黄色:找到了部分参比离子红色:所有的参比离子均未找到指示在当前分析或上一次分析中参比离子的发现状态指示在当前序列或上一次序列运行中参比离子的发现状态二、软件概览定性分析软件数据导航区方法浏览区方法参数编辑区质谱图显示区色谱图显示区二、软件概览定量分析软件二、软件概览数据转换软件二、软件概览诊断软件QTOFDiagnostics三、开机如果使用液氮罐打开自增压阀门。打开N主阀门调节分压表压力至Mpa或psi(最大不要超过Mpa或psi)。打开高纯氮主阀门调节分压表压力至Mpa(最大不要超过Mpa或psi)打开计算机LANSwitch电源。打开液相各个模块电源打开质谱前面的开关等待大约两分钟直至听到溶剂阀切换的声音表明质谱自检完成。在计算机桌面上双击打开AgilentMassHunterWorkstation文件夹双击DataAcquisition进入工作站点击Standby按钮检查前级真空(典型值应Torr)和高真空等到高真空Torr时在QTOF图标上单击单击ON设定干燥气Lmin和雾化气psi应该能达到设定值。关闭工作站。打开AgilentTOFSoftware文件夹双击SystemLauncher,点击Shutdown。等待Status变为Terminated后点击Close。三、开机在计算机桌面上双击打开AgilentMassHunterWorkstation文件夹接着打开AcqTools文件夹双击QTOFDiagnostics进入仪器诊断界面在菜单上选择ConnectionConnect输入点击OK。标签栏显示InstrumentONOFF界面选择hourcycle点击ConditionHV。当ConditionHV结束后关闭QTOFDiagnostics。进入MassHunterWorkstation。四、调谐和校准将TOFESI调谐液装入CalibrabtB中。确认安装的离子源为DualESI源。进入AgilentMasshunterWorkstation点击FileOpenMethod选择Defaultm点击OK。在QTOF图标上单击左键TurnONQTOF。四、调谐和校准在Context下拉框中选择Tune切换到Tune界面选择极性为Positive选择Autotune标签等待仪器Ready后(QTOF图标变为绿色)点击TOFTune按钮。四、调谐和校准初次安装或TOFTune通不过时可以使用InitialTOFTune一星期可以做一次QuickTOFTune。一个月可以做一次TOFTune。检查TOF状态可以使用CheckTOFTune。默认的离子源参数为:GasTempDryingGasLminNebulizerpsigVcapV。如果改变了其中的参数有可能会造成调谐无法通过。根据实验需要选择极性为Positive或Negtive选择Autotune标签等待仪器Ready后(QTOF图标变为绿色)点击TOFTune按钮仪器会自动开始调谐TOF。调谐完成后会自动生成报告点击Print…按钮打印完成后点击Close关闭。此时屏幕显示Autotunecompletedsuccessfully。单击OK关闭。四、调谐和校准初次安装或QuadTune通不过时可以使用InitialQuadTune一个月可以做一次QuadTune。检查Quad状态可以使用CheckQuadTune。默认的离子源参数为:GasTempDryingGasLminNebulizerpsigVcapV。如果改变了其中的参数有可能会造成调谐无法通过。TOFTune完成后单击QuadTune仪器会自动开始调谐Quad。调谐完成后会自动生成报告点击Print…按钮打印完成后点击Close关闭。此时屏幕显示QuadAutotunecompletedsuccessfully。单击OK关闭。四、调谐和校准TOFTune和QuadTune完成后点击InstrumentState标签单击Save按钮将调谐结果保存到Autotunetun文件。单击Context下拉框选择Acquisition即可返回数据采集画面。四、调谐和校准校准完成后会显示校准曲线单击OK关闭。CalibrantBottle选择None。在Context下拉框中选择Acquisition返回采集画面提示保存TuneFile时选择Yes。推荐每天或序列运行前做Calibrate如果只是为了校准质量轴则不使用调谐。切换到Tune界面等待QTOF状态Ready后(QTOF图标为绿色)CalibrantBottle选择B点击TOFMSCalibration标签点击Calibrate。四、调谐和校准InitialTOFTune做的项目最多TOFTune次之QuickTOFTune最少。InitialQuadTune较之QuadTune做的参数一致InitialQuadTune会将窗口和参数放的更宽。CheckTOFTune和CheckQuadTune只是检查仪器状态不会修改任何参数也会自动生成报告。Calibrate只是校准TOF质量轴。不同调谐和校准的比较五、方法编辑液相部分自动进样器在此页面中设定进样方式及体积Option中可以设定进样器的一些辅助参数五、方法编辑液相部分泵在此页面中设定泵的流量和比例以运行时间Timetable用于设定梯度时间表Option用于设定泵的辅助参数如压缩因子等。运行时间包括后运行时间一般情况下只在泵的设置页面中设定其他模块只需要设定成SameasPump。五、方法编辑液相部分柱温箱在此页面中设定柱子温度Timetable用于设定温度时间表Option用于设定柱温箱的辅助参数。五、方法编辑液相部分检测器在此页面中设定DAD检测波长、参比波长及相应的波谱带宽和峰宽Option用于设定DAD的辅助参数如狭缝等。RequiredLamps如果不选择可以实现关灯状态下分析。在此页面中设定极性数据存储的类型液体流向。离子源是自动识别的不需要人为选择。TimeSegment相当于时间表可以对一些参数按时间进行编程。对于可以随时间变化的参数上会标以(Seg)标记。Experiment相当于Scan是指同一时间段内并列运行不同的参数对于可以并行的参数上会标以(Exp)标记。Profile数据可以提供更多的信息但同时也会占用相当多的磁盘空间。质谱部分General五、方法编辑五、方法编辑质谱部分Source表明这些参数可以随时间片断Segment变化表明这些参数可以随扫描Experiment变化离子源参数中干燥气温度、流量、雾化器压力设定主要考虑实际进入质谱的流动相的流速及组成来变化目的是为了去溶剂化完全。具体设定可以参考附录一。实际实验中需要优化的参数主要是Fragmentor此参数一般与待分析物质荷比及稳定程度相关一般而言质荷比越大Fragmentor越大。五、方法编辑质谱部分Acquisition根据具体应用选择使用何种模式也可以按时间段Segment组合使用。TOFMode(MSMode)在此页面中主要编辑MassRange(一般应用mz小于如果有其他范围需求参见附录)质谱采集速率。五、方法编辑质谱部分AcquisitionAutoMSMSModeSpectralParameters在此页面中设定一级、二级质谱MassRange及采集速率二级质谱采集速率最大为spectras。四级杆分辨率一般应用推荐使用Medium。五、方法编辑质谱部分AcquisitionAutoMSMSModeCollisionEnergy在此页面中设定碰撞能量。可以使用固定数值也可以使用线性变化数值或使用表格定制。五、方法编辑质谱部分AcquisitionAutoMSMSModePrecursorSelectionⅠ在此页面中设定母离子选择数量及阈值、是否使用动态排除、静态排除。五、方法编辑质谱部分AcquisitionAutoMSMSModePrecursorSelectionⅡ在此页面中设定母离子优选价态。五、方法编辑质谱部分AcquisitionAutoMSMSModePreferredExclude在此页面中设定母离子优选mz、价态、保留时间、碰撞能量。五、方法编辑质谱部分AcquisitionTargetMSMSModeSpectralParameters在此页面中设定一级、二级质谱MassRange及采集速率二级质谱采集速率最大为spectras。五、方法编辑质谱部分AcquisitionTargetMSMSModeCollisionEnergy在此页面中设定碰撞能量。可以使用固定数值也可以使用线性变化数值或使用表格定制。五、方法编辑质谱部分AcquisitionTargetMSMSModeTargetedList在此页面中设定目标母离子及相应参数。五、方法编辑质谱部分RefMass在此页面中选择是否需要内标校准及参比雾化压力内标离子选择及检测、校准参数。五、方法编辑质谱部分Chromatogram在此页面中设定实时监视的信号实时信号调整参见附录。五、方法编辑方法信息点击Properties标签此页面显示了方法路径、前运行及后运行脚本。在Description中可以输入方法说明信息。五、方法编辑保存方法点击FileSaveas…Method方法推荐保存到安装工作站时指定的路径下。(D:MassHunterMethods)六、运行样品运行单个样品从FileOpenMethod调用选定的方法点击仪器状态区右方ON按钮。在方法区中点击Sample标签在此页面输入样品名称、样品位置、文件名、路径、项目名后点击工具栏按钮开始进样。(此处如果输入了数值进样量以此处为准如果是则表示使用方法中的设置)六、运行样品运行序列样品A设定序列运行参数点击Worklist菜单下WorklistRunParameters…输入操作者名字指定采集方法和数据分析方法路径指定数据文件路径定义脚本输入序列备注。点击OK。六、运行样品运行序列样品B编辑序列表样品名称样品位置采集方法数据文件样品类型备注进样标记序列行号在序列表任何一列的标题上单击右键点击ShowHideColumn…可以定义序列表要显示的列也可以通过AddColumn(s)…添加自定义列标样级别(样品类型为Calibration或QC时起作用)六、运行样品运行序列样品C添加样品选中序列表行单击右键单击AddSample可以增加一行在此行中依次输入各个参数即可完成一个样品的添加也可以单击AddMultipleSamples…批量添加样品。指定方法和路径后点SamplePosition选择样品后点OK表示使用方法中的设置六、运行样品运行序列样品D运行样品通过进样标记选择需要进样的行选中这里表示所有行全部进样选择好需要进样的行后点击工具栏上的图标开始进样。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)在桌面上双击图标打开定性分析软件A打开数据文件第一次打开定性分析软件时会自动弹出OpenDataFile对话框选择待分析的数据文件单击Open按钮即可打开。此对话框也可以通过在菜单栏上单击FileOpenDataFiles…或工具栏上的图标打开。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)B使用默认窗口设计在菜单栏上单击ViewWindowsLayoutRestoreDefaultLayout。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)C提取离子流图选择MethodExplorer下的Chromatogram功能区选择DefineChromatograms此时右边会显示相应的参数窗口单击图标执行。此时会在色谱图显示区会显现提取到的色谱图。在此窗口内选择恰当的色谱图类型、MSLevel、极性输入要提取的mz范围。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)D积分在方法浏览区选择Chromatogram功能区选择Integrate右边会显示积分参数一般情况下可以选择MSMSIntergrator单击图标执行。单击(IntegrationPeakList)图标可以显示积分结果七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)E预览质谱图选中图标(MSSpectrumPreview)再使用选择范围工具在色谱图上选择一段区域双击鼠标左键在MSSpectrumPreview窗口中会显示相应的质谱图。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)F提取质谱图在MSSpectralPreview窗口上点击鼠标右键选择CopytoUserSpectra此时会将这张质谱图添加到左侧数据导航区中的用户质谱图中窗口的标题也改变为MSSpectrumResults七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)G扣除背景干扰在色谱图中使用选择范围工具选择一段背景范围单击鼠标右键选择ExtractSpectrumtoBackground此时在左侧数据导航区中会出现BackgroundSpectra再选中导航区中的UserSpectra并单击鼠标右键选择SubtractBackgroundSpectrum在右侧MSSpectrumResults窗口中会显示扣除背景后的质谱图。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)H计算分子式设定计算条件在质谱图上按住鼠标右键拖曳可以放大质谱图在质谱图上按住鼠标左键选择想要计算的质荷比mz单击方法浏览区中的Spectrum功能区选择CalculateSpectrumFormulas右侧显示分子式计算对话框设定元素组成允许偏差加和离子同位素计算得分限度等参数。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)H计算分子式计算结果单击执行图标开始计算计算完成后会显示MSFormulaResults窗口计算结果包含同位素匹配得分(最高得分为其余是相对值)、质量偏差、不饱和度。单击可以显示更详细的信息同时在下方的质谱图上会显示出理论的同位素匹配框。七、数据分析定性分析软件(QualitativeAnalysis)I打印报告在方法浏览区选择General功能区选中ChooseReportTemplates右侧对话框中选择需要的模板。单击菜单FilePrintAnalysisReport…打印分析报告在弹出的对话框中选择打印预览设定相应参数单击OK后显示预览报告单击Print打印或单击Setup根据需要修改后再单击Print打印报告七、数据分析定量分析软件(QuantitativeAnalysis)参考GQTOFFormalizationManual练习用数据存在定量软件光盘Data目录下八、关机在质谱控制软件QTOF图标上单击左键选择Vent。出现确认提示时单击Yes按钮。系统开始放空此过程需要等待大约min。如果想监视系统真空也可以单击Context下拉框选择Tune切换至Tune画面单击Diagnostics标签观察真空也可以从此处放空。min后关闭工作站。八、关机ShutdownEngine。关闭质谱前面的开关。关闭液相各个模块电源开关。关闭N总阀门。如果使用液氮罐同时应关闭自增压阀门。关闭高纯氮主阀门。九、附录不同流量推荐的离子源参数设定九、附录改变QTOF质量测定范围单击Context下拉框选择Tune切换到Tune画面单击InstrumentState标签点击MassRange下拉框可以选择不同的MassRange(mz,mz,mz)注意:一旦改变了MassRange必须运行Calibrate九、附录调整实时绘图在实时色谱图显示区单击鼠标右键单击Change在弹出的对话框中左侧选择想要监视的信号单击Add添加设定范围后单击OK。

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