灵芝子实体的化学成分研究

江苏药学与临床研究 2006年第14卷第6期 · 实验研 究· 灵芝子实体的化学成分研究 王艳丽 张晓琦2 ：r ill才 叶文才 - 中国药科大学中药学院(南京 210009) 暨南大学中药及天然药物研究所(广州 510632) 摘 要：目的 研究灵芝(C,anoderma f )子实体中的化学成分。方法 用硅胶柱色谱法及 Sephadex LH-20柱色谱法 进行分离纯化，依据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构。结果 从灵芝的乙酸乙酯提取物中分离得到lO个化合物，分别被 鉴定为：灵芝烯酸 B(ganoderenlc acid B，1)、灵芝酸 A(ganoderic acid A，2)、甲基灵芝酸A(m~thyl ganoderate A，3)、甲基灵芝酸 B (methyl ganoderate B，4)、灵芝酸 E(ganoderic acid E，5)、甲基灵芝酸E(methyl ganodemte E，6)、灵芝酸 (ganodefic acid ，7)、灵 芝酸DM(ganoderic acid DM，8)和灵芝酸 G(sanederlc acid G，9)，2．(2 ．hydmxyd(P~osanoylamino)octadecane．1，3，4-triol(1O)。结论 化合物1O为新化合物。 关键词：灵芝；三萜；神经酰胺 中图分类号 R931．6 文献标识码 A 文章编号 1007．306(2006)06-349．03 Chemical Constituents of the fruiting bodies of Ganoderma lucidum WANG Yan-Ii -ZHANG Xiao．qi2-WAN G Guo．cai2-YE Wen-cai - Department ofNatural Medicinal Chemistry，China Pharmaceutical University( 210009) 。／nst／tute of Traditional Chinese Medicine and Natural Products，Jinan Univeni@(Guangzhou 510632) A B： ACT：AIM To study the chemical constituents of the fruiting bodi~$of C,ano&mna ／uddum．MEⅡ10DS Chemical constituents wore isolated and purified by silica gel column chromatography． structures were identified by iH~an$of physicochemical and soectral data．REsIⅡ From the ethyl acetate extract of the materia1．ten compounds were isolated．nleir structures were identitled 8,8 ganoderenic acid B(1)，ganoderic acid A(2)，methyl ganederate A(3)，methyl ganoderate B(4)，ganoderic acid E(5)，methyl ganodcrate E (6)，ganedcric acid c2(7)，ganodcric acid DM(8)and ganoderic acid G(9)，2-(2'-hydroxydoeosanoylamino)octadecane-1，3，4-triol(10)， respectively．CONa嘲 ON Compound 10 is ft．nL~t-compound． Ⅺ Wo麟 ：Ganoderma luc／dum；Triterpene；2-(2 -hydroxy-docosanoylamino)octadeeane-1，3，4-triol 灵芝为担子菌类多孔菌科灵芝属真菌赤芝 C．ano&rma luc／dum (Leyss．ex Fr．)Karst．或 紫芝 G．$inel'l,,~e Zhao，Xu et Zhang的子实体⋯o性温味淡， 归心、肺经，具有滋补强壮、宁心安神的功效【2】。多 分布于云南、贵州、山东、吉林、江苏、浙江、福建等 省。灵芝所含的化学成分复杂，三萜类化合物是其 主要化学成分之一，且具有抗癌活性[ 。为了进一 步寻找灵芝子实体中的抗癌活性成分，对产于安徽 黄山的灵芝子实体的化学成分作了研究。经过硅胶 柱层析，现已从赤芝 G．hx／dum子实体的乙酸乙酯 - [通讯作者] Tel：O2O．85221559 提取物中分离出1O个化合物，运用理化和光谱数据 分析，确定其化学结构分别为：灵芝烯酸 B(1)、灵芝 酸 A(2)、甲基灵芝酸 A(3)、甲基灵芝酸 B(4)、甲基 灵芝酸 E(S)、灵芝酸 E(6)、灵芝酸 C2(7)、灵芝酸 DM (8)和 灵 芝 酸 G (9)、2一(2 一hydroxy- docosanoylamino)octadecane一1，3，4-triol(10)。化合物 1O为新化合物。 化合物1O 白色粉末(CHC13一MeOH)，[a]D+ 10．9(C=0．16，CHCI3：C OH=1：1)。ESI—MS m／z： 654[M．H]一，678[M+№ ] ；HR—ESI—MS m／z： · 349 · 维普资讯 http://www.cqvip.com 江苏药学与临床研究 2006年第14卷第6期 678．5941[M+№] (计算值 678．5828[M+№] )， 结合NMR谱数据推断化合物1O的分子式为 C40H8l No5。m 光谱提示化合物 1O含有一个仲酰胺基 (3226，1622，1545 cmI1)和羟基(3335 cmI1)基团。 H和坞C NMR(C5D5N)谱显示其含有3个连氧 叔碳和一个连氧仲碳( 4．29—5．11，8c 62．1 76．8)，一个NH信号( 8．58，d，J=8．8 )，信号 175．2证实了仲酰胺基的存在，两个甲基信号( 0．86 and 0．85，t，J=7．2}iz)和一些饱和亚甲基信号 ( ：1．25—1．46， ：29．7 32．2)，提示该化合物可 能含有两个长的脂肪链。 H H COSY显示 H2 (8H：4．62，dd，J=8．0和 4．0 nz)与 H3 ( ：2．23，m)相关，H3 (8H：2．23，m)又 与}I4 ( ：1．76，m)相关，得到片断 1；另外，H2( 5．11，m)分别与Hl( ：4．52，dd，J=10．8和4．4 nz) 和H3( ：4．36，m)相关，H3( ：4．36，m)又与 }I4( ： 4．29，m)相关，得到片断2。 HMBC谱中显示cl ( ：175．2)分别与 H2 (8H： 4．62，dd，J=8．O和4．O}王z)，氨基 H( ：8．58，d，J= 8．8}王z)和H2( ：5．11，m)相关，C2(8c：53．1)分别氨 基H( ：8．58，d，J=8．8}王z)相关，将片断1和片断 2相连接。 结合 H． H COSY、蹦 Qc和 I-IMBC谱可确定化 合物1O的分子骨架，见图1。 表 1 化合物 1O的碳谱数据( N。Jin Ik) z cHp ’ ∞ 黼 ·s OHb 图 1 化合物 1O的甲醇解 化合物1O进行甲醇解(图1)。取样品2．0 nag， 在 1O IIll 1N的HC1甲醇中反应4小时，氮气吹干，用 8O％甲醇／石油醚两相萃取。石油醚部分主要含甲 酯a，80％甲醇部分主要含长链碱 b。石油醚部分用 制备薄层得甲酯a，用CHCI3溶解，并做GC．Ms分析， 实验表明其主要含有 m／z：370[M] 的组分，甲酯a 链长为C22。80％的甲醇水部分氮气吹干，用制备薄 层得长链碱b，加甲醇溶解，做 LC．ESI．MS"分析。实 验表明其主要含有 m／z：318[M+H] 的组分，长链 碱b含有3个羟基，链长为 Cl8。综上所述，推断化 合物10的平面结构为2．(2'h，- ，d0c0san0ylarnin0) octad~ane．1，3，4．tri0l，为一新化合物。 1 仪器和试剂 熔点用x．5型显微熔点测定仪测定(未校正)； m用Jasco FI／IR-480 Plus Fourier Transform红外光谱 仪(KBr压片)测定；NMR用Bruker AV4oo FI．型核 磁共振仪测定；ESI-MS用 Finnigan LCQ Advantage · 350 · MAX质谱仪测定；HR．ESI．MS用 Applied Biosystems MarinerTM 5140质谱仪测定。 柱层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品；硅胶 G 薄层预制板为烟台化学工业研究所产品；所用 试剂均为化学纯或分析纯。 灵芝样品采自安徽省黄山市，由安徽省芜湖高 等中医药专科学校刘 晓龙 教授鉴 定为赤芝 Ganoderma lucidum，药材标本(No．000115)保存于中 国药科大学天然药物化学教研室。 2 提取分离 灵芝子实体(6．9 kg)，粉碎后依次用石油醚(60 ℃一9o℃)、乙酸乙酯和甲醇回流提取，回收溶剂， 分别得到石油醚、乙酸乙酯和甲醇部位。乙酸乙酯 部位(80 g)加硅胶拌样，上样于硅胶(100 200目) 柱，以环己烷．乙酸乙酯系统(10：0—0：10)进行梯度 洗脱，以每500 ml为一份收集，合并相同组分，环己 烷 乙酸乙酯(6：4)部分再经 Sephadex LH．20柱和硅 胶柱层析，得化合物1(5 nag)、2(15 nag)、6(30 nag)、7 维普资讯 http://www.cqvip.com 江苏药学与临床研究 2006年第l4卷第6期 (7 mg)、8(12 rng)、9(10 rng)、10(20 rng)，环己烷。乙酸 乙酯(7：3)部分再经Sephadex 1．1-I 20柱和硅胶柱层 析，得到化合物3(16 nag)、4(43 rng)、5(17 mg)。 3 结构鉴定 化合物1 白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp：196 ℃ 一197 oC，LiebeiTnann-Burchard反应为 阳性o UV 245 rlnl，IR(KBr)v,,m：3431，1725，1668 G3"n～。 EST．MS m／z：513[M．H]一。再根据其 H．NMR和协C． NMR数据，鉴定化合物1，即文献[3]报道的灵芝烯酸 B(ganoderenic acid B)。 化合物2 白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp：l12 c【=一113 c【=，H2SO4加热显红色。ESI-MS m／z：539[M +Na] ，515[M．H]一。结合其 H．NMR和玎C．NMR数 据，鉴定化合物 2为文献[ ]报道的灵芝酸 A (ganodefic acid A)。 化合物3 白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp：182 oC一184 oC，H2so4加热显红色。ESI．MS m／z：553[M +Na] ，529[M H]一。 H和nC．NMR数据与灵芝酸 A相比较，非常相像，除了DC．NMR比甲基灵芝酸A 多了一个 占：51．9位甲基信号，相应 H．NMR也多了 一 个甲基氢信号占：3．69(3H，s)，推测该化合物可能 是甲基灵芝酸 A，且与文献[ ]报道的甲基灵芝酸 A 一 致，故确定化合物 3为甲基灵芝酸 A(methyl ganoderate A)。 化合物4 白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp：200 oC～201 oC，H2SO4加热显红色。EsI．MS m／z：553[M +Na] ，529[M．H]一。结合其 H．NMR和玎C．NMR数 据，鉴定化合物4为文献【5，6J报道的甲基灵芝酸 B (methyl ganodemte B)。 化舍物5 浅黄色针状结晶(乙酸乙酯)，mp： 194 oC～196 oC，H2SO4加热显红色。ESI．MS m／z： 5ll[M．H]一。结合 H．NMR和 C．NMR数据，鉴定化 合物5为文献[7]报道的灵芝酸E(ganoderic acid E)。 化舍物6 浅黄色针状结晶(乙酸乙酯)，H2S04 显红色。ESI．MS m／z：549[M+Na] ，525[M．1]一。 H和玎C．NMR数据与灵芝酸 E相比较，非常相像，除 了13C．NMR比灵芝酸E多了一个 占：51．8位甲基信 号，相应 H NMR也多了一个甲基氢信号 占：3．72 (3H，s)，推测该化合物可能是甲基灵芝酸E，且与文 献[10]报道的甲基灵芝酸E一致，故确定化合物6为 甲基灵芝酸E(methyl ganodemte E)。 化合物 7 白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp：271 oC一272 oC，H2so4加热显红色。ES!．MS m／z：541[M +Na] ，517[M．H]一。结合 H．NMR和 C．NMR数据 鉴定化合物7为文献[8]报道的灵芝酸 C2(ganodefic acid C2)o 化合物8 白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp：205 oC～206 oC，H2SO4加热显红色。ES!．MS m／z：469[M +H] ，467[M．H]一。结合其 H．NMR和uC．NMR鉴 定化合物8为灵芝酸DM(ganoderic acid DM)。 化合物9 白色针状结晶(乙酸乙酯)，mp：216 oC一218 oC，H2SO4加热显红色。ESI．MS m／z：555[M +Na] 。结合 H．NMR和玎C，NMR鉴定化合物9为 灵芝酸 G(ganoderic acid G)o 化合物10 白色粉末(CHC13．MeOH)，mp：138 oC～140 oC，ESI-MS m／z：654[M-H]一，C40I-Isl NO5， [a]D+10．9(C=0．16，CHCh：CH3OH=1C1)。 H— NMR(C5D5N，400 MHz)和 C．NMR(C5I)5N—d5，100 MHz)数据见结构解析部分。 参 考 文 献 1 Deng SQ． 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K，lucidenic add F and related mds[J]．蕊㈨ Phann Bd／，1986。34(9)：3 一3712． 9 Cai H，Wang ，Yang JS，d ．Structure ofGanoderie add DM，a n triterpenoidfrom the fruiting body of Ghn0 m ／ud&m~[J]．Ch／nese Chart／ca／Letters，1995，6(12)：1051—1052． 10 Kikuchi T。Kanomi S。Mumi Y．d ．Constituents of the l m s G∞∞ emn hl a【 lm(Fr．)Karst lI．Structures of ganoderic aeids F。G andH。lucidmicacid D2 and andl~latcd c~potmds[J]．CMm 栅 ， 1986，34(10)：4018—4029． (收稿 日期 ：200B11．13) · 351 - 维普资讯 http://www.cqvip.com