抗生素研发中无菌验证检查法的问题与对策

中国药物与临床 2009年 11月第 9卷第 11期 Chinese Remedies＆Clinics，November 2009，Vo1．9，N0．11 表 1 2组疗效比较 注 ： 与对 照组 比较 P<0．05 迅速，效果确切，治疗周期短，不良反应小，并且原料容易采 购，制备方便，成本低廉 ，质量容易控制，一般的医院制剂室 均有能力生产，值得推广。 由于水杨酸对呼吸道刺激性较大 ，配制过程中工作人员 应佩戴 口罩，注意劳动保护；如果长期大面积应用水杨酸，偶 尔可能导致因吸收至全身性水杨酸 中毒 ，如头晕、呼吸急促 等[7]．虽然在临床治疗过程中未发生不良反应．但切不可掉以 轻心．要在今后的临床活动中继续观察其不良反应，及时收 集汇总，所以本品不适合长期大面积使用和孕妇使用，更不 可作痤疮的预防性使用，当痤疮症状被控制住后注意保持皮 肤清洁即可，以减少发生不良反应的可能性。 由于甲硝唑、水杨酸均为针状结晶，必须充分研磨，过 80 目筛．才能保证霜剂的细腻性；为了制得药物含量均匀的霜 剂，加入亲水性乳膏基质后应采用等量递增法，且应充分研 磨。 由于水杨酸具有很强的去角质、清理毛孔的能力 ，安 全性高 ，被誉为毛孔角质的调理者 ，在美容方面有广泛 的 应用 ，很多美容产品均含有不同浓度的水杨酸，我们配制的 消痤霜是否具有美容方面功效，有待在今后的工作中做进一 步的研究．以提高其使用范围。 参 考 文 献 1 吴志华．皮肤性病学．3版．广东：广东科技出版社．1997． 2 潘学田．中国医院制剂规范(西药制剂)．2版．北京：中国医药科 技出版社．1995． 3 曹春林．中药药剂学．上海．上海科学技术出版社。1988． 4 靳培英．痤疮分型论治-中华皮肤科杂志，2002．35(2)：162—165． 5 王辉 ，程志英．中药面膜治疗面部痤疮的疗效观察冲 国医院药 学杂志，2009，29(1)：53—54． 6 徐晶萍．刘长征．中药内服联合针刺治疗寻常痤疮 62例疗效观 察．中国皮肤性病学杂志，2009，23(1)：55—56． 7 诸骏仁．中华人民共和国药典临床用药须知(化学药和生物制 品卷 2005年版)．北京：人民卫生出版社。2005． 8 李凡 ．朱小燕，霍亚兰，等．皮肤磨削术治疗皮肤淀粉性变 30例． 冲 国美容医学，2006，15(6)：698． (收稿 日期 ：2009-07—21) 抗生素研发中无菌验证检查法的问题与对策 董晓娟 王 泽 邢俊生 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器 具、原料、辅料及其他品种是否毙菌的一种方法。中国药典进 一 步说明如果供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试 品在该检验条件下未发现微生物污染。由此可见，无菌检查 法的试验环境 、试验器具、无菌检查方法以及样品四方面因 素共同决定了该项检查结果是否真实可信，并不能全部反映 产品的真实情况。现结合实际检验工作对部分企业在无菌和 无菌验证存在的问题进行讨论。 ’ 1 无菌检查的现状 多数生产企业的常规工作量大，是否能做到无菌检验 ， 企业相对缺少标准化试验用仪器 ，微生物专业人才。对检验 人员的要求缺少统一的培训管理 ，中国药品生物制品检定所 已经编印了 《中国药品检验标准操作规范》2000年版，从仪 器、设备、用具、试液、培养基、对照用菌液、抑细菌和抑真菌、 作者单位：030012太原市传染病医院药剂科 (董晓娟 )；山西省 心血管疾病医院药剂科(王泽 )；山西省药品检验所抗生素室(邢俊 生 ) 通信作者：邢俊生 检查法、结果判定等方面对无菌检查的要求和操作要领进行 了规范化描述，但是部分申请人未严格执行。 检验方法本身的问题、检验结果不严谨。薄膜过滤法、直 接接种法各 自均有一定优缺点，需要在今后的过程中不断完 善和改进，直接接种法可操作性差，在实践中引入污染的风 险大．需要对环境以及人为操作等因素进行严格控制。 检验方法的验证、工作系统验证方法的进一步完善，无 菌检查方法的应用，可以考虑有无必要针对品种的不同特点 逐步建立各药物的可控的具体操作的试验规范。 2 无菌检查研究中存在的主要问题 2．1 无菌检查法的试验环境：在试验过程中忽视了对无菌环 境参数进行验证。或者忽视了应用标准化试验操作对试验环 境进行验证 ，并积累验证数据。 2．2 试验器具、设备：①培养基、稀释剂：由于目前的规范尚 缺少对培养基的相关验证要求，对培养基的使用多为按标签 上的浓度进行配制。进行灵敏度检查后再作为无菌检查使 用。实际上无菌检查出现在培养基上的问题也不少，应引起 足够重视。由于不同批次培养基的配料以及浓度的差别，和 中国药物与临床 2009年 11月第 9卷第 11期 Chinese Remedies&Clinics，November 2009，Vo1．9，No．11 实际操作人员的不同，可能造成相同稀释倍数的培养基实际 浓度不同、黏稠程度不同，以及酸碱度的不同，有时在对某些 产品效价的测定过程中会造成较大误差。应对不同浓度培养 基的灵敏度和浓度进行验证，确保在某个浓度范围内培养基 对试验数据的支持。药典纳入了 2种稀释剂。不同稀释剂针 对不同品种的适应性不同，但是 目前在对稀释剂的选择和操 作过程中尚没有要求进行验证。试验中需要对稀释剂和冲洗 液的使用进行必要的验证，确保稀释剂和冲洗液的使用对样 品中可能存在细菌和霉菌的相适应性和提供适宜的冲洗液 用量，确保在试验中能够准确地获得需要的结果。中国药典 纳入了培养基、稀释剂的灭菌程序。目前多作为常规操作．可 考虑根据每个品种的不同特性进行验证，选择提供明确的保 证试验结果的培养基浓度 、稀释剂类型，以及相适应的操作 规范。②试验菌：在研究过程中对培养基灵敏度检查和验证 用的菌株验证结论试验理论不充分。试验用菌种的来源依据 不充分 ，对菌株的培养和传代没有专业鉴定人员，对菌种的 使用不能进行科学有效的管理，导致无菌验证工作的失败和 数据的不可靠性，应引起足够重视。 2．3 样品因素：某些情况下，容易出现假阴性和假阳性现象． 深入研究和比较，积累数据资料。比如：在培养过程中如果温 度控制出现问题会造成在培养期内细菌生长的变化 。应该进 行必要的验证和评价。由于操作者消毒灭菌不彻底或操作失 误造成污染的风险也应进行分析和研究。 2．4 无菌检查法常见问题 ：对检验方法的验证、培养时间的 选择和结果判断缺乏系统的评价，应在验证资料中针对检查 方法进行比较后说明所选择方法的合理性；并且对不同培养 时间和培养温度、湿度的进行观察，记录其对细菌的影响．然 后确定具体的培养时间：最好对不同试验条件进行 比较研 究。 对样品检验数量和不同类型供试品的处理方式以及接 种方法选择的验证没有完整的评述。中国药典提供了无菌检 查每批取样量，但是当进行验证时，应针对具体的品种取不 同数量的样品进行验证比较，这样验证资料才能全面完整。 针对不同类型的品种无菌检查的处理方式不同．需特殊处理 的样品应进行比较试验进行验证。 在试验中对稀释剂和冲洗液的选择和用量需要进行试 验比较 ，确定冲洗量及其他关键操作步骤。但在现有的资料 中对上述内容没有相应的论述。 做出验证结果的判断时缺少具体的试验数据进行说明 很多验证资料的结论仅仅是一个试验的结论 ，应针对验证的 步骤和试验记录中出现的问题进行讨论，经分析比较论证后 再确定验证使用的方法 3 无菌检查和验证方法 · Il31 · 无菌检查法包括薄膜过滤法、直接接种法。需结合供试 品情况选择合适的方法，并选择敏感菌株对供试品抗菌活性 去除效果进行检验，制定出该品种的标准检验操作规程，明 确样品在前处理过程中的处理步骤、采用的具体方法 。以及 各个环节的操作关键，制定标准的技术文件。 抗菌药品无菌检查的关键要素包括：①去除抗菌活性， 减少药物对微生物生长的影响。②阳性菌的生长作为参考依 据。 采取的解决措施，以及对冲洗条件的改善，B一内酰胺类 抗生素使用 B一内酰胺酶中和，其他抗生素改善冲洗条件试 验 ，头孢类抗生素采用 400ml稀释液溶解，冲洗采用 0．1％蛋 白胨溶液，由于卫生学检查的复杂性和多样性，由此导致了 试验结果的不确定性。同时无菌检查为一次性的报告方式． 因此为确保试验过程规范性和试验结果的真实性 ，对方法进 行验证显得尤为重要。无菌检查验证 内容包括：无菌环境的 验证、灭菌器的验证 、培养基灵敏度的验证、阴性对照、阳性 对照等方面的验证工作。验证贯穿试验的整个过程。上述过 程可避免因阳性菌选择不合理、方法不合适等因素造成的试 验不科学，数据不可信等现象。 验证工作需要考虑供试品自身带来的影响、方法有效 性，操作过程的合理性等因素，例如：对于控制菌，在对为消 除供试品的抑菌作用所采用中和法、离心沉淀法、薄膜过滤 法等方法时进行验证，应进行对比研究，并要考虑整个试验 过程的连贯性以及对前后过程衔接的影响。供试品中抗菌活 性的去除以及供试品对微生物生长的影响也是验证的重点。 4 对无菌检查验证工作的建议 考虑到微生物限度和无菌检查的复杂性和多样性 ，以及 检查方法的不断创新和改善．在试验过程中需结合供试品情 况选择合适的方法，选择敏感菌株对供试品抗菌活性去除效 果进行检验。制定出该品种的标准检验操作规程．明确样品 在前处理过程中的处理步骤、采用的具体方法。以及各个环 节的操作，制定标准的技术文件。 生产企业需要建立无菌微生物检查的长效培训机制 ．建 立培训和管理机制，不断培训和了解当前检验方法。建立质 量保证体系包括人员、试验室条件和管理．检验方法的规范 化 ；标准菌株的使用和管理、试验菌液的制备的规范．需要建 立规范化的研究体系。建立微生物学检验研究标准化的平台 非常重要。生产企业在进行无菌验证的过程中应逐步完善对 验证方法的研究 ，采用有效的手段及不同的方法和试验条件 进行比较，丰富验证的内容，积累验证数据．建立共享的数据 库，提高验证技术水平。 (收稿 日期 ：2009—04—13)