比色法测定超氧化物歧化酶的临床评价及其应用研究

· 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 研究  · 比色法测定超氧化物歧化酶的临床评价及其应用研究 张 忠，高 静，董振南，田亚平 收稿日期: 2010-11-10 作者简介:张忠，男，技师，从事临床生物化学检验及全自动生化分析仪器管理。Tel: 010-66937374; E-mail: zz71117@ 126． com 通讯作者:田亚平，男，主任医师。Tel: 010-66937374; E-mail: tianyp@ 301hospital． com． cn (解放军总医院生化科，北京 100853) 摘要:对比色法测定超氧化物歧化酶试剂盒进行临床评价; 比较健康人群与多种疾病患者的血清超氧化物歧化酶( Super- oxide dismutase，SOD) 浓度，探索血清 SOD对多种疾病的预警价值。用罗氏全自动生化分析仪测定，分析评价比色法测定 超氧化物歧化酶试剂盒的准确性、精密度及线性等指标。选取明确诊断的多种疾病( 包括冠心病、肝脏疾病和脑部疾病) 共 105 例作为疾病组及 144 名健康查体者作为对照组，测定两组血清 SOD 浓度。结果显示，用该方法测定 SOD 高、低两 种浓度血清的准确度分别为 99． 8%和 97． 8 %，批内变异系数分别为 0． 59%和 0． 43%，批间变异系数分别为 1． 45%和 1． 09% ;在 12． 5 ～ 200U /mL范围内，线性良好，与理论值的相关系数为 0． 9999 ( R2 = 0． 9998) 。疾病组的血清 SOD 水平为 97． 77 ± 28． 31U /mL，显著低于对照组 139． 79 ± 13． 88 U /mL( P ＜ 0． 01) ;疾病组内的每种疾病血清 SOD水平均明显低于对 照组( P ＜ 0． 01) ，但各种疾病之间血清 SOD 水平无差异; 比色法测定血清 SOD 的 ROC 曲线下面积为 90． 5% ; 当界值为 116． 15 U /mL时，约登指数最大( 0． 86) ，此时灵敏度为 97． 22%，特异性为 74． 3%。以上结果表明，超氧化物歧化酶比色 法试剂盒操作简便、稳定、快速，符合临床应用要求，适合进行临床大样本的常规检测。对多种疾病具有良好的预警价值。 关键词:超氧化物歧化酶; 比色法; 评价 中图分类号: R446． 1 文献标识码: A 文章编号: 1006-1703( 2011) 02-0105-03 Clinical Evaluation and Application of Detection of Superoxide Dismutase by Colorimetry ZHANG Zhong，GAO Jing，DONG Zhen-nan，TIAN Ya-ping ( Department of Clinical Biochemistry，PLA General Hospital，Beijing 100853，China) Abstract: To evaluate the reliability of serum superoxide dismutase colorimetry assay reagent，the precision，accu- racy and linearity of reagents were evaluated by detection the quantity of serum SOD with the Roche automatic bi- ochemical analyzer． The serum SOD levels in 105 patients who clearly diagnosed ( including coronary heart dis- ease，liver disease and brain disease) and 144 healthy people were detected． The results showed that the accuracy of the high value and low value of the serum SOD were 99． 8% and 97． 8 respectively． The within-run CV was 0． 59% and 0． 43% respectively，and the between-run CV was 1． 45% and 1． 09% respectively． Within the range of 12． 5 to 200 U/ml ，the kit had good linearity and the correlation was 0． 9999( R2 =0． 9999) ． The serum SOD level in disease group ( 97． 77 ±28． 31U/ml) was notably lower than that in control group( P ＜0． 01) ． The serum SOD level in different disease groups were all notably lower than that in control group( P ＜ 0． 01) ，while there was no differences in the levels of serum SOD in different disease groups． The area under the ROC curve was 90． 5% ． When the threshold was 116． 15 U/ml，the maximum Youden index was 0． 86 and the sensitivity and specificity were 97． 22% and 74． 3% respectively． The results indicate that the superoxide dismutase assay by colorimetry is simple，stable and fast method． It might be suitable for routine clinical detection of SOD in large scale． Key words: Superoxide dismutase; Colorimetry; Evaluate 501标记免疫分析与临床 2011 年 4 月第 18 卷第 2 期 SOD催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，是 体内唯一清除超氧阴离子自由基 ( O2 －·) 的一种 抗氧化酶。它广泛分布于全身各组织细胞及各种体 液中，是体内内源性的具有抗衰老、抗辐射、免疫调 节、调节血脂、美容功能的物质之一。近年来的研究 表明:人体内 SOD水平与自由基含量呈负相关，其水 平的高低可间接反映机体内自由基的含量，对于平 衡机体氧化-抗氧化系统、免除自由基损伤起着至关 重要的作用［1］。邻苯三酚比色法测定 SOD 的原理 是通过 SOD催化产生的超氧阴离子自由基的歧化反 应，使之转化为 H2O2 和 O2。在碱性条件下，邻苯三 酚会产生自氧化显色反应，其显色反应的强度与 SOD的活性成正比，从而计算出 SOD的含量。 材料和方法 1 材料 1． 1 仪器与试剂 罗氏全自动生化分析仪 ( ROCHE，瑞士) ; 超氧化物歧化酶 ( SOD) 比色法试 剂盒、质控、 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 均购自福建福缘生物科技有限 公司。 1． 2 研究对象 144 名健康对照者( 男，62 例， 平均 42． 2 ± 8． 5 岁; 女，82 例，平均 38． 4 ± 9． 4 岁) ， 均在查体后排除肿瘤、心脑血管疾病、肝脏疾病、自 身免疫疾病及泌尿系统疾病。选择与氧化应激相关 疾病的患者 105 例( 包括冠心病 40 例、肝脏疾病 55 例、脑血管病 10 例) 作为疾病组 ( 男，51 例，平均 44． 8 ± 10． 2 岁;女，54 例，平均 41． 2 ± 11． 3 岁) 。 1． 3 标本采集 均于早晨抽取所有研究对象 的空腹静脉全血 3mL; 所得样本以 3500r /min 离心 7min后分离血清待测。 2 方法 2． 1 检测方法 试剂盒测定参数设置及仪器 操作严格按厂家规定进行。 2． 2 试剂盒评价方法 准确度评价:通过测定 定值标准品( 高值: 200 U /mL; 低值: 150 U /mL) ，评 价超氧化物岐化酶比色法试剂盒的准确度。精密度 评价: 选取低、高 2 个水平的临床血清样本进行测 定，每个水平样本平行测定 10 次，计算批内变异系 数 CV。每份标本每天测定 1 次，连续测定 10 天，计 算批间变异系数。线性评价:将定值 200U /mL 的标 准品用蒸馏水稀释配制出从低到高 6 个浓度水平样 本( 12． 5U /mL、25U /mL、50U /mL、100U /mL、150U / mL、200U /mL) ，分别测定每一稀释浓度样本，实验 和数据采集在一个工作日内完成，分析序列随机排 列，每个样本重复测定 4 次后求平均值，以理论值为 横坐标，实测值为纵坐标绘制线性图。 2． 3 临床预警价值评价 分别测定疾病组和 对照组的血清 SOD值。 3 统计学处理 实验数据以数据平均值 ±标准差( x ± s) 表示， 组间比较采用 t检验。应用 SPSS13． 0 软件对实验数 据进行统计分析，以 P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。 结 果 1 试剂盒评价 1． 1 准确度实验 选取标准品进行测定，标示值 为 150U /mL、200U /mL，每个水平重复测定 5 次取平 均值，计算测定结果与标示值的相对偏差。150U / mL和 200U /mL标准品的测量值分别为 149． 7U /mL 和 204． 4U /mL，相对偏差为 0． 2%和 2． 2%，准确度 达到 99． 8%和 97． 8%。 1． 2 精密度试验 选取高、低 2 个水平的标准 品，平行测定 10 次，计算批内变异系数( CV) 。连续 测定 10 天，计算批间变异系数( CV) ，结果见表 1。 表 1 超氧化物歧化酶试剂盒精密度试验结果 组别 批内 ( n = 10) 批间 ( n = 10) x ± s CV% x ± s CV% 低值 115． 6 ± 0． 5 0． 43 149． 7 ± 1． 63 1． 09 高值 164． 6 ± 0． 98 0． 59 204． 4 ± 2． 96 1． 45 1． 3 线性试验 取高值标准品做倍比稀释，进 行线性测定，结果见图 1。由图可见，该方法线性良 好。最低检测限度为 12． 1U /mL。 图 1 超氧化物歧化酶试剂盒线性试验 2 临床预警价值评价 各疾病组 SOD 水平均显著低于对照组 ( P ＜ 0． 01) ，但各疾病组之间的 SOD 水平无统计学差异 ( P ＞ 0． 05) ，见表 2。血清 SOD 对疾病的 ROC 曲线 下面积为 90． 5% ( P = 0． 000 ) ，见图 2; 当界值为 116． 15U /mL时，约登指数最大 ( 0． 86 ) ，此时灵敏度 为 97． 22%，特异性为 74． 3%。 讨 论 本研究结果表明，比色法测定 SOD 方法的批内 变异系数分别为 0． 59%和 0． 43%，批间变异系数分 601 Labeled Immunoassays ＆ Clin Med，Apr． 2011，Vol． 18，No． 2 表 2 疾病组和健康对照组血清 SOD水平比较( x ± s) 组别 例数 血清 SOD水平( U /mL) 对照组 144 139． 79 ± 13． 88 冠心病组 40 101． 93 ± 30． 12* 脑血管病组 55 94． 50 ± 28． 12* 肝脏疾病组 10 99． 12 ± 21． 03* 注:与对照组相比，* P ＜ 0． 01 表示有显著差异。 图 2 比色法测定血清 SOD区分健康 和疾病的 ROC曲线 别为 1． 45%和 1． 09%，说明此试剂盒测定 SOD结果 非常稳定;标本浓度在 12． 5 ～ 200U /mL 时的实测浓 度和预期浓度一致，具有良好线性关系，符合说明书 关于线性的描述。 众多临床研究报道，由于氧容易接受电子导致 氧自由基形成激增而过剩，使机体发生过氧化损伤。 对氧需求高的器官如心、脑、肝、肾等人体生命重要 脏器，因其缺血、出血性病伤或手术治疗过程中很容 易发生严重的缺血-再灌注继发( 自由基) 损伤。如 不及时进行自由基清除干预，就会带来严重的后果。 本实验结果表明，各疾病组 SOD 水平显著低于健康 对照组( P ＜ 0． 01) ，血清 SOD对疾病判断的 ROC 曲 线下面积为 90． 5% ( P≤0． 000) ，表明血清超氧化物 岐化酶的测定具有较好的疾病预警价值［1-4］。 综上所述，SOD 虽然是一种非特异的辅助诊断 指标，但对机体自由基代谢紊乱、自由基清除干预对 策，以及对于同一病患病程转归( 自由基损伤的加剧 或降低、自由基清除剂药物或手术治疗效果) 的判 断，实施动态监测具有重要参考价值［5］。与以往试 剂相比，邻苯三酚比色法测定 SOD 试剂盒具有试剂 稳定、标本用量少、准确度和精密度高、操作简便快 速、可自动化等优点，值得推广应用。 参考文献: ［1］McCord J M，Edeas M A． SOD，oxidative stress and human patholo- gies: a brief history and a future vision［J］． Biomed Pharmacother， 2005，59( 4) : 139-142． ［2］杨耀娴，党 彤，张月成，等．联合检测血清层粘蛋白、透明质酸、丙 二醛及超氧化物歧化酶在肝病中的临床意义［J］．临床肝胆病杂 志，2003，19( 1) : 56-57． ［3］吴怀志，王洛夫，赵明敏． 脑梗塞患者外周红细胞 Cu /Zn SOD 水 平变化的观察［J］．微循环学杂志，1993，3( 1) : 16-17． ［4］李 勇，孔令青，高 洪，等．自由基与疾病研究进展［J］． 动物医学 进展，2008，29( 4) : 85-88． ( 刘晓敏编辑) 免疫荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的 建立及其临床应用评价 唐 盛1，林恒先2，龚海涛2，单万水3 ( 1．深圳大学医学院，广东 深圳 518060; 2．深圳市迈科龙生物技术有限公司，广东 深圳 518057; 收稿日期: 2010-10-19 3．深圳市第三人民医院检验科，广东 深圳 518020) 摘要:通过试验研究，确定了抗体荧光标记的最佳条件、免疫荧光法检测的最适抗体浓度及最佳反应条件，从而研究免疫 荧光法检测奈瑟氏淋球菌方法的建立，并对奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒进行临床试验，评价其检测效果。采用 分离培养法和奈瑟氏淋球菌免疫荧光法检测试剂盒对 1100 例临床样本进行平行检测，并以分离培养法检测结果为对照， 统计免疫荧光试剂盒与分离培养法检测结果的总符合率及阴、阳性符合率。试验结果统计分析显示，受测免疫荧光试剂 盒检测与分离培养法检测的总符合率为 97． 64%，阳性符合率为 93． 28%，阴性符合率为 98． 17%，Kappa值 ＞ 0． 8，表明受 测免疫荧光试剂盒与分离培养法的临床检测结果无显著性差异。受测免疫荧光法检测试剂盒检测快速、简便、经济、准 701标记免疫分析与临床 2011 年 4 月第 18 卷第 2 期