板蓝根多糖对小鼠抗流感病毒感染的作用[1]

华西药学杂志 W C J · P S　2008, 23 (6) ζ 666～667 　　 作者简介 :左娅 (1970 - ) ,女 ,湖北恩施 ,主管药师 ,从事临床药学工作。E - mail: yjcjdm2@ yahoo1com. cn3 通讯作者 (Correspondent author) , E - mail: daim ing68@1631com 板蓝根多糖对小鼠抗流感病毒感染的作用 左 　娅 1 , 代 　明 23 , 王志勇 3 , 刘 　军 4 (1.湖北荆州市第一人民医院药剂科 ,湖北 荆州 434000; 2.病毒学国家重点实验室 /武汉大学动物实验中心 , 湖北 武汉 430071; 3.武汉大学中南医院药学部 , 湖北 武汉 430071; 4.病毒学国家重点实验室 /武汉大学医学院病毒研究所 ,湖北 武汉 430071) 摘要 : 目的 　研究板蓝根多糖对小鼠抗流感病毒感染能力的影响。方法 　将板蓝根多糖溶液腹腔注入流感病毒感染的模型 小鼠 ,观察小鼠的生存时间 ,计算肺指数 ,测定小鼠血清中抗病毒 IgG的变化及脾细胞 IFN -γ的水平。结果 　注射板蓝根多 糖的小鼠存活时间延长、存活率提高。与病毒对照组比较 ,肺指数明显降低 ,血清中抗体 IgG的水平升高 ,脾脏细胞 IFN -γ的 水平上升。结论 　板蓝根多糖能促进小鼠非特异性免疫、增强体液的免疫功能 ,并参与了调节细胞的免疫功能 ,从而提高了小 鼠抵抗流感病毒感染的能力。 关键词 : 板蓝根多糖 ;流感病毒 ;免疫 中图分类号 : R285　 文献标识码 : A　 　文章编号 : 1006 - 0103 (2008) 06 - 0666 - 02 Effects of Ban langen polysacchar ide on m ice resistance to Influenza v irus infection ZUO Ya1 , DA IM ing23 , WANG Zhi - yong3 , L IU Jun4 (1. D epartm ent of Pharm acy, First People Hospital of J ingzhou, J ingzhou 434000, China; 2. S ta te Key Laboratory of V irology / the Center for Anim al Experim ent of W uhan U niversity, W uhan 430071, China; 3. D epartm ent of Pharm acy, Zhongnan Hospita l of W uhan U niversity, W u2 han 430071, China; 4. S ta te Key Laboratory of V irology / Institu te of V irology, M edicine School of W uhan U niversity, W uhan 430071, China) Abstract: O BJECT IVE 　 To study the effect of Banlangen polysaccharide on m ice resistance to influenza virus infec2 tion1M ETHOD S　BALB /C m ice treated with influenza virus was injected intraperitoneally, while the control m ice were treated with physiological saline solution1Survival rate of m ice was recorded. Level of IgG in the mouse sera and level of IFN - γ in the mouse sp leens were measured1RESUL TS　Banlangen polysaccharide could significantly decrease the mortality rate, p rolong the living time of infected m ice, decrease the pulmonary index( P < 0101) 1The levels of IgG and IFN -γ of the m ice in Banlangen polysaccharide group were higher evidently than that in virus control and normal control1CO NCL US IO N　Banlangen polysaccharide can p rotect m ice a2 gainst influenza virus infection by enhancing non - specific immunity and humoral immunity and regulating cellular immunity. Key words:Banlangen polysaccharide; Influenza virus; Immunity CLC num ber: R285　　　 D ocum en t code: A　 　Article ID : 1006 - 0103 (2008) 06 - 0666 - 02 　　板蓝根是两年生植物菘蓝的根茎部分 ,含有氨 基酸、谷甾醇、靛青、多糖等成分 [ 1 ] ,具有凉血、清热 解毒、抗病毒的作用。研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明 ,板蓝根多糖是主要 活性成分之一 ,能显著提高免疫力 [ 2 ]。作者用流行 性感冒病毒感染小鼠 ,制备模型 ,再给小鼠注射板蓝 根多糖 ,观察小鼠的生存时间 , 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 多个免疫指标。 以此探讨板蓝根多糖对小鼠抵抗流感病毒感染能力 的影响及机制。 1　实验部分 111　病毒、药物与动物 流感病毒小鼠适应株 H1N1 (A /PR /8 /34,中国 预防科学院病毒研究所流感中心 )用 SPF鸡胚尿囊 接种 ,收集尿囊液 ,血凝滴度为 1ζ 2560 (每毫升约 2 ×103 倍 LD50 ) ,离心后分装 , - 70℃保存。板蓝根 (市售 ) ;小鼠 IFN - γ EL ISA 试剂盒 (U - Cytech B io Science公司 )。BALB /C♀小鼠 ( SPF级 ,湖北省 医学科学院 ) , 20～22 g。 112 　方法 11211　板蓝根多糖的提取 　按文献 [ 4, 5 ]方法 ,采用 水提醇沉法制备。板蓝根粉末经乙醚脱脂 , 100℃水 煮 7 h,离心 ,取上清液 ,减压浓缩、透析等工艺过程 ; 用乙醇沉淀 24 h,再用有机溶剂洗涤 ,真空干燥后即 得板蓝根多糖 ,提取率达 20%。 11212　分组及动物模型的制备 　将 120只小鼠随 机均分为正常组、病毒组、板蓝根多糖治疗 Ⅰ、Ⅱ组。 治疗 Ⅰ组病毒感染前 5 d开始 ,每只小鼠 ip 1 m l 1 g·L - 1·d - 1板蓝根多糖水溶液 ,连续 10 d;治疗 Ⅱ组 每鼠 ip 1 m l 1 g·L - 1·d - 1板蓝根多糖水溶液 ,连续 5 d;正常组和病毒组均 ip等量生理盐水 ,连续 10 d。 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net 各组小鼠 (除正常组外 )在实验第 5天、于乙醚浅麻 醉下 ,以 50倍 LD50的攻击量滴鼻感染流感病毒 ,每 鼠 0103 m l。每天观察小鼠的生存状况 , 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 各组小 鼠的死亡数和存活天数 ,病毒感染 15 d后 ,处死小 鼠。同时取肺组织测定肺指数 ,取血测定 IgG水平 , 取脾测定 IFN -γ。 11213　血清中抗流感病毒抗体 IgG的测定 　用病 毒液包被 96孔板 ,在包被孔中分别加入 100μl不 同稀释度的小鼠血清 ,设复孔、阴性对照 ,第二抗体 用 1ζ 200 HRP标记的羊抗小鼠 IgG抗体 , OPD - H2 O2 底物显色 , 1 mol·L - 1 H2 SO4 终止反应。空白 调零后 ,于 490 nm处测定各孔的吸光度。 11214　小鼠脾细胞中 IFN -γ的测定 　病毒感染后 第 15天处死小鼠 ,无菌条件下取脾组织 , 011 g组织 中加入 1 m l生理盐水 ,研磨成匀浆。此原液稀释 10 倍 ,连续 5个梯度。按 EL ISA试剂盒说明书检测样 品中 IFN -γ的含量。 11215　统计学处理 　组间比较用 t检验 ,以 P < 0105为差异有统计学意义。 113 　结果 11311　板蓝根多糖对流感病毒感染小鼠的保护作 用 　板蓝根多糖治疗Ⅰ、Ⅱ组能明显降低流感病毒性肺 炎的死亡率 ,延长小鼠的平均存活天数 ( P < 0101) , 提高病毒感染小鼠的存活率。治疗Ⅰ组对感染小鼠的 保护效果强于治疗Ⅱ组 ( P < 0105) (表 1)。 表 1　板蓝根多糖对感染小鼠的保护作用 ( …x ±s, n = 30) Table 1　Protection of Ban langen polysacchar ide to infected m ice by Influenza v irus( …x ±s, n = 30) Group s Dead m ice Death rate /% Death p rotection rate /% Survived days L ife - elon - gated rate /% V irus 22 7313 - 8110 ±0124 - Normal 0 0 - 14100 ±0100 - Banlangen Ⅰ 7 2313 50 12150 ±01273 5413 Banlangen Ⅱ 10 3313 40 10180 ±01273 3313 Compare with virus group: 3 P < 0105 11312　板蓝根多糖对小鼠流感病毒性肺炎的治疗作 用 　小鼠感染流感病毒后引发了小鼠肺炎 ,肺重增 加 ,肺指数也相应增加。肺指数可作为 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 指标之 一。板蓝根多糖对小鼠流感病毒性肺炎的治疗作用 见表 2。 表 2　板蓝根多糖对流感病毒性肺炎的治疗效果 ( …x ±s, n = 8) Table 2　Effect of Ban langen polysacchar ide aga in st Influenza v irus pneum on ia in m ice( …x ±s, n = 8) Group s Lung indexes Inhibitory rate /% P V irus 1155 ±0118 - < 0. 05 Normal 0195 ±0111 - BanlangenⅠ 1120 ±0112 2216 < 0101 BanlangenⅡ 1131 ±0111 1515 < 0101 11313　小鼠血清中 IgG水平的比较 　板蓝根多糖 治疗 Ⅰ、Ⅱ组小鼠产生的血清抗流感病毒的抗体滴 度 (A490 )分别为 01563 ±0108、01545 ±0108,明显高 于病毒组 (01311 ±0105)及正常组 (01134 ±0102) , 均有显著性差异 ( P < 0101)。说明板蓝根多糖能促 进小鼠产生高滴度的 IgG。但板蓝根多糖治疗 Ⅰ、 Ⅱ组间比较无显著性差异 ( P > 0105)。 11314　小鼠脾脏中 IFN -γ水平的测定 　正常组、 病毒组及板蓝根多糖治疗 Ⅰ、Ⅱ组的 IFN -γ水平 分别为 98 ±610、145 ±12、218 ±17、210 ±17 ng· L - 1。治疗 Ⅰ、Ⅱ组与病毒组、正常组比较 , IFN - γ 水平明显升高 ( P < 0105)。 2　讨论 板蓝根是一种常用的抗病毒中药 ,板蓝根冲剂 已广泛用于预防流感及其他病毒感染。文中从感染 小鼠的生存时间、肺指数、血清中抗体水平以及脾脏 细胞中的 IFN -γ水平等方面研究了板蓝根多糖抗 流感病毒的作用。 小鼠被注射板蓝根多糖后 ,血清中特异性 IgG 水平明显上升 ,对小鼠抵抗流感病毒感染起到了重 要作用。其抗病毒作用可能与其促进 B细胞的活 化、增殖有关。同时 ,脾脏细胞中 IFN -γ水平的明 显升高 ,说明 T细胞的活化也受其影响。板蓝根多 糖可能在体内针对病原微生物产生细胞免疫的过程 中起调节作用 ,可能为一种机体体液免疫及细胞免 疫的新型免疫增强剂 ,与文献 [ 6 ]报道相符。 实验显示 ,在流感病毒感染前注射板蓝根多糖 , 对小鼠的保护效果较好 ,与病毒感染的同时注射板 蓝根多糖比较 ,小鼠死亡率更低、生存时间更长。但 两组在小鼠血清特异性抗体及脾脏细胞中 IFN -γ 水平方面无明显区别。表明板蓝根多糖可能通过增 强机体的非特异性免疫而对流感病毒具有一定的预 防作用。 参考文献 : [ 1 ]　金奇. 医学分子病毒学 [M ]. 北京 :科学出版社 , 2001. [ 2 ]　彭少平 ,顾振纶. 板蓝根化学成分、药理作用研究进展 [ J ]. 中 国野生植物资源 , 2005, 24 (5) : 4 - 7. [ 3 ]　许益民 ,黄振新. 板蓝根多糖促进免疫功能的试验研究 [ J ]. 中西医结合杂志 , 1991, 11 (6) : 357 - 359. [ 4 ]　鲁建江 ,王莉 ,顾承志 ,等. 板蓝根多糖的提取及含量测定 [ J ]. 广东药学 , 2001, 11 (4) : 16 - 18. [ 5 ]　张萍 ,刘捷 ,邓扬悟 ,等. 板蓝根多糖的提取工艺及其清除自 由基作用的初步研究 [ J ]. 河南工业大学学报 (自然科学版 ) , 2006, 27 (3) : 36 - 38. [ 6 ]　吴慧平 ,陈建伟 ,李祥 ,等. 板蓝根多糖对 NF - κB活性的影 响 [ J ]. 药物生物技术 , 2001, 8 (5) : 276 - 278. 收稿日期 : 2008 - 01 766第 6期 左 　娅 ,等。板蓝根多糖对小鼠抗流感病毒感染的作用 　　　 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net