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HPLC 色谱柱选择与方法应用

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nullHPLC 色谱柱选择与方法开发HPLC 色谱柱选择与方法开发概要概要固定相选择性色谱柱选择性的实际应用方法开发工具概要概要固定相选择性色谱柱选择性的实际应用方法开发工具选择性因素选择性因素分离度 Rs= (1/4) (a-1)  N [k/1+k] a= 选择性 N= 柱效 k= 容量因子选择性是最重要的因素!选择性因素选择性因素通过改变以下一点或几点来改善选择性: 温度流动相固定相 pH 温度温度通常缩短保留时间注意: 柱温限制分析物温度限制流动相流动相总则: 选择在分析物pKa +/- 2 pH的缓冲液 100%水相条件能改善极性保留(使用可在100%水相条件下使用的色谱柱) 等度 vs. 梯度水相稳定性水相稳定性几乎没有变化色谱柱稳定固定相选择性固定相选择性疏水性极性选择性芳香选择性疏水性疏水性固定相的保留强度通常用丁基苯的k值（容量因子）测量疏水性疏水性考虑: 键合相特性 (C18, C8, Phenyl, 等) 表面积 (m2/g) 键合相密度 (umol/m2) 疏水性疏水性C18 phasesC8 phase300Å C18 phase疏水性疏水性传统的色谱法使用 C18 好处: 亚甲基选择性最佳的疏水选择性疏水性疏水性传统的色谱法使用 C18 缺点: 较长的保留时间可能不保留极性化合物极性选择性极性选择性下面两者之间的相互作用: 固定相的极性基团分析物的极性官能团极性选择性极性选择性提高极性选择性极性端基封尾基团极性镶嵌基团苯基固定相极性选择性极性选择性色谱柱: Luna™ 5m C18(2) YMC-Pack™ Pro C18 Synergi™ 4m Polar-RP (醚连接的苯基柱) 150x4.6mm 流动相: 75:25 甲醇 : 水流速: 1 mL/min 组分: 1. Estrone 2. Estradiol极性选择性极性选择性芳香选择性芳香选择性苯基基团利用芳香环的作用使用甲醇可增大选择性较少疏水保留通常 C3 + 苯基基团芳香选择性芳香选择性色谱柱: Luna™ 5m C18(2) 150x4.6mm Luna™5m Phenyl-Hexyl 150x4.6mm Synergi™ 4mm Polar-RP150x4.6mm 流动相: 50:50 乙腈 : 20mM 磷酸钾 pH 2.5 流速: 1.0 mL/min 组分: 酸性的, 芳香化合物 1. Indoprofen 2. Ethyl paraben 3. Naproxen 4. Diflunisal 5. Indomethacin 6. Ibuprofen芳香选择性芳香选择性 C18(2) Phenyl-Hexyl Polar-RP pH 对选择性的影响 pH 对选择性的影响 pH 1 – 12 稳定性pH 对选择性的影响 pH 对选择性的影响 pH 对选择性的影响 pH 对选择性的影响 pH 对选择性的影响 pH 对选择性的影响固定相选择性固定相选择性C18 相苯基相概要概要固定相选择性色谱柱选择性的实际应用方法开发工具 Synergi™ Hydro-RPSynergi™ Hydro-RP 极高的疏水性保留极性端基封尾，100% 水相稳定改善极性选择性Synergi™ Hydro-RPSynergi™ Hydro-RPSynergi Hydro-RP VS. Luna C18(2)Luna™ C18(2)Luna™ C18(2) 已证实的可靠的 C18 色谱柱极低硅醇活性重现性高 Synergi™ Max-RPSynergi™ Max-RP 疏水性与 C18相似 – 但这是 C12 比多数C18高25%的游离硅醇覆盖率碱性化合物获得更尖锐峰形Synergi™ Max-RPSynergi™ Max-RP中性pH下的碱性药物另一新的产品 (Gemini™ C18) 另一新的产品 (Gemini™ C18) Gemini™ C18Gemini™ C18Luna™ C8(2) & C5Luna™ C8(2) & C5 降低疏水保留缩短运行时间Luna™ Phenyl-HexylLuna™ Phenyl-Hexyl 疏水 & 芳香选择性低 LC/MS 流失可再生的 & pH 稳定的苯基相Synergi™ Fusion-RPSynergi™ Fusion-RP 改善极性选择性,同时减少运行时间极低 LC/MS 流失 100% 水相稳定Synergi™ Fusion-RPSynergi™ Fusion-RP运行条件流动相: 75 : 25 20mM 磷酸钾 pH 2.5 : 乙腈流速: 1.5 ml/min 柱温: 室温检测 : 210nm 样品: 1. 马来酸 2. 氯苯那敏 3. 曲普利啶 4. 苯海拉明 Synergi Fusion-RP 4 80Å典型的C18极性保留时间更长疏水保留时间更短Synergi™ Polar-RPSynergi™ Polar-RP 极性 & 芳香保留 100% 水相稳定改善极性选择性Luna™SCXLuna™SCX 含胺和聚胺化合物咳嗽和感冒药物吗啡和滥用药物核苷，多肽和多肽图概要概要固定相选择性色谱柱选择性的实际应用方法开发工具方法开发工具方法开发工具疏水性级别固定相描述 & 色谱柱特点吸附剂特性 & 应用方法开发工具方法开发工具方法开发工具方法开发工具技术支持队伍问题解答指南 Advanza讨论会产品讨论会方法开发讨论会总结总结固定相选择性考虑固定相和化合物的疏水性、极性和芳香性色谱柱选择性的实际应用方法开发工具谢谢谢谢 Trademarks Xterra® is a registered trademark of Waters Corporation YMC-Pack™ Pro C18 is a registered trademark of YMC, Inc. Synergi™ , Gemini™, and Luna™ are trademarks of Phenomenex, Inc. Phenomenex is not associated in any way with Waters Corporation or YMC. Copyright © 2005 Phenomenex Inc., all rights reserved.

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