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5.3 双水相萃取.ppt

5.3 双水相萃取

莉莉周
2011-05-22 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《5.3 双水相萃取ppt》,可适用于高等教育领域

第三节双水相萃取Aqueoustwophaseextraction第三节双水相萃取Aqueoustwophaseextraction特点:()保留生物分子活性()除细胞碎片()成本高()大分子及小分子萃取()易于放大和连续操作处理量大适合工业应用。一双水相系统形成的因素)体系熵的增加)分子间作用力葡聚糖与甲基纤维素钠的双水相体系用于生物分离的双水相体系基本上可分为:高聚物高聚物体系(分子间斥力)聚乙二醇(PEG)葡聚糖(Dx)高聚物无机盐体系(盐析作用)PEG硫酸盐或PEG磷酸盐相图均相区两相区ab双节线均相区两相区系线临界点杠杆定律杠杆定律二双水相中的分配平衡生物分子的分配系数取决于溶质与双水相系统间的各种相互作用其中主要有静电作用、疏水作用和生物亲和作用等。因此分配系数是各种相互作用的和:lnm=lnmelnmhlnml从相平衡热力学理论推导溶质的分配系数表达式为:荷电溶质的分配系数的对数与溶质的净电荷数成正比。.疏水作用在pH为等电点的双水相中蛋白质主要根据表面疏水性的差异产生各自的分配平衡。三影响分配系数的因素(一)聚合物的种类、浓度及平均分子量不同聚合物的疏水性递增次序:葡萄糖硫酸盐<羧甲基葡聚糖<葡聚糖<羟丙基葡聚糖<甲基纤维素<聚乙烯醇<聚乙二醇<聚丙二醇疏水性相差越大越有利于两相的分离。混溶性疏水梯度混溶性疏水梯度成相聚合物的总浓度增加系线越长两相性质的差别增大蛋白质越容易分配于其中的某一相。当聚合物的分子量降低时蛋白质易分配于富含该聚合物的相。系统m相体积产率%PEG(%)(NH)SO(%)PEG(%)(NH)SO(%)PEG(%)(NH)SO(%)PEG(%)NH)SO(%)PEG平均分子量对分配平衡的影响例如:PEG(NH)SO系统双水相萃取糖化酶○普鲁兰酶(%PEG%DexTmmol/LNaPOpH)□,α葡聚糖磷酸酶(%PEG%DexTmmol/LNaPOpH)●亮氨酰基tRNA合成酶%PEG%DexTmmol/LNaPOpH)PEG平均分子量对分配率的影响(二)pH值体系pH值影响蛋白质分子可电离基团的离解因而改变表面电荷而影响分配系数。 pH影响缓冲物质磷酸盐的离解程度影响相间电位差从而影响分配系数。血清蛋白在两种盐系统中分配系数m与pH的关系交错分配法(Crosspartitioning):测定蛋白质等电点的一种方法在双水相不同盐系统中分配系数与pH之间的关系曲线的交点即为蛋白质的等电点。(三)盐的种类和浓度盐的种类和浓度对分配系数的影响主要反映在对相间电位和蛋白质疏水性的影响。(四)温度分配系数对温度的变化不敏感可在室温下操作。一些无机离子的分配系数正离子分配系数K+负离子分配系数K-K+I-Na+Br-NH+Cl-Li+F-加入NaCl对卵蛋白和溶菌酶分配的影响相系统:%Dx%PEGmmolL磷酸钠pH四双水相萃取操作(一)双水相系统的选择(二)胞内蛋白质的萃取(三)多步萃取思考题思考题理解概念:相图双结线系线临界点交错分配法双水相体系可分为哪几类?目前常用的体系有哪两种?双水相萃取的影响因素有哪些?

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