微型月季的组培快繁技术

74 安徽农学通报，Anhui Agn．Sci．Bul1．2010，16(13) 微型月季的组培快繁技术 宗 树 斌 (江苏农林职业技术学院，江苏句容 212400) 摘 要：微型月季是一种 目前流行的微型花卉种质资源，其应用市场前景广阔、潜力巨大，利用组织培养技术进行微 型月季的快速繁殖具有重要意义。详细阐述了微型月季组培快繁过程中应注意的若干技术环节。 关键词：微型月季；组织培养；培养基 中图分类号 $685．12 文献标识码 A 文章编号 1007—7731(2010)13—74—02 Tissue Culture and Rapid Propagation Technique of Rosa Chinensis Minina Zong Shubin (JiangSu Polytechnic College of Agriculture and Forestry，JuRong 21 2400，China) Abstract：Rosa chinensis Minina is a popular kind of miniflowe~ cultivating resource which is applied on the mass market and has a huge potentia1．It is significant to rapidly propagation Rosa chinensis Minina utilizing the technique of tissue cul— tureo Key words I Ros~chinensis Minina；Tissue culture；Medium 微型月季(Rosa chinensis Minina)是蔷薇科蔷薇属 多年生木本植物，是现代月季中的一个特殊类型，其株型 矮小紧凑，叶片、花朵均小巧可爱，四季开花，花色丰富。 又因其管理粗放、用途广泛而越来越受到人们的喜爱。特 别是近 20a来 ，微型月季发展迅速，目前 己成为欧美月季 市场上最畅销的盆栽花卉之一⋯。被应用于室内栽培、路 边绿化、花坛布置、吊挂装饰、微型盆景制作、阳台布置等 多方面 。 目前市场上多用扦插的方法繁殖微型月季，由于微型 月季植株低矮，枝条细小，用扦插法存在繁殖系数低，成本 高的缺点，影响了生产规模的进一步扩大 。组织培养技 术具有繁殖系数高、速度快、成本低等特点，可以在短时问 内获得大量的商品苗，对于推广新品种，迅速占领市场，具 有重要的意义。 1 外植体的选择 1．1 外植体的取材时期 进行微型月季组织培养快速繁 殖，la中任何时间都可以采取外植体，但在周年生产过程 中，以5月和9月为最佳的外植体最佳的取材时间。5月 微型月季正处于腋芽萌动期，植物体内养分充足，激素水 平也正适宜于芽的萌动。9月是枝条的成熟期，即体内养 分以及激素水平含量高，此时进行离体培养，因其生理活 性和形态发生能力很强，容易萌发。其他月份因为微型月 季腋芽营养和激素缺乏而不适宜取材。 1．2 外植体的取材部位 以扩繁为目的多以腋芽为外植 体，启动培养后，再以腋芽发育的小苗的茎尖为母体进行 扩繁。腋芽的选取以开花枝上中间部位具有完整鳞叶的 腋芽为好。茎节上不同节位的腋芽的增殖率差异较大，靠 近顶端和基部的芽发育较慢，而中间部位的芽发育较快。 1．3 外植体的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面灭菌 微型月季属木本植物，在温室 生长的微型月季可先将其移出室外培养几天，再进行外植 体的选取，这有利于降低培养过程的污染率。另外，在外 植体灭菌时，采用磁力搅拌，消毒液(有效 NaCIO浓度 5．5％ ～6．5％)浓度为 1％，时间为 15～20min，可使消毒 效果达到最佳。 2 初代培养 初代培养是植物组织培养的基础，其目的是建立无菌 系，获得无菌材料，并使外植体进一步发育。微型月季初 代培养中腋芽的萌发受消毒方式、外植体采集时期、培养 条件、培养基成分、激素等多个因素的影响。 2．1 初代培养基 微型月季初代培养的培养基一般采用 为6一BA2mg／L+NAA0．3mg／L+培养基 MS，其腋芽启动 率可达 80％以上。 2．2 接种 采集微型月季带饱满腋芽的茎段，用流水冲 洗30min，去除泥垢，再用洗涤液浸20～30 min，用软刷轻 轻刷洗，流水 冲洗 30rain后，将枝条切成带腋芽的约 1．Ocm茎段，在超净工作台上将外植体放入75％酒精中消 毒20～30s，然后转入 10％的次氯酸钠溶液中消毒 15～ 20min，再用无菌水冲洗3—5次。将带腋芽的茎段接入消 作者简介：宗树斌(1982一)，山东巨野人，讲师，硕士，研究方向：园林植物与观赏园艺。 收稿日期：2010—05一l7 16卷 13期 宗树斌 微型月季的组培快繁技术 75 毒后的初代培养基上。 2．3 培养条件 接 种后先 暗处理 2d，然后转入 1600～ 20001x光强下培养 ，光照 16h／d，温度 22±2℃。 微型月季腋芽接种后 20d左右即可观察到叶片展开 ， 但是顶芽并未开始发育 ，茎也未见伸长 ，这只是芽 中原来 未发育成熟 的叶片在适宜的条件下吸收营养后单纯的生 长。若条件不适宜顶芽萌发，待顶芽长到一定程度后便停 止生长，甚至顶芽坏死 ，所以叶片 的展开并不意味着微型 月季芽的启动，植株再生。大约再经过7d后，顶芽开始发 育，长出新叶，才是启动的标志。 3 继代培养 在初代培养的基础上 ，获得的芽、苗数量有 限，需经继 代培养 以获得大量的无菌苗材料。继代培养试验材料为 初代培养获得的无菌苗。 3．1 继代培养基 微型月季继代增殖倍数和增殖效率主 要与培养基 的激 素浓度及 配 比，培 养基 的含糖量 和 pH 有关。 在继代培养中，关键是掌握细胞分裂素和细胞生长素 的适宜浓度及配比，低浓度细胞分裂素有利于不定芽的增 值，浓度过高则抑制不定芽增殖，生长素对不定芽的增值 率影响不显著，适量的生长素有利于芽的高生长和叶生 长。实验证 明增殖培 养 中 BA浓度 以 0．5～1．5mg／L为 好，超过 2．0mg／L时抑制增殖 。KT的效果不如 BA好 ，且 随着 KT浓度的增大愈伤组织明显产生。NAA和 IAA对 增殖均有一定 的抑制作用 ，但 有利 于丛生芽 的高生 长， IAA的效果 比NAA好 ，浓度以0．2mg／L为好 。 影响继代增殖倍数的另一个因素是培养基中糖的用 量和pH值的高低，适当提高糖的浓度，降低 pH，对苗的分 化及幼苗的生长有较大促进作用。一般糖量加大，pH值 降低可以提高分化率 20％，同时缩短继代周期，缩短5～ 10d，但糖的用量不可超过 50g／L，pH值不可低于 5．5，否 则会出现大量小芽丛和玻璃化苗。 因此，微型月季继代培养的最适培养基配方为 ：MS+ BA1．0mg／L+IAA0．2mg／L糖 4O L，琼脂 6g／L，pH值 5．8 ～ 6．0。 3．2 继代培养次数 在进行微型月季组培快繁工厂化生 产中，掌握进行继代培养 的次数十分重要 ，它直接关系到 进行组培苗生产的 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 安排、全年的产量、及组培苗的生 根生长情况及变异率。 试验结果表明，随着继代次数的增加，微型月季继代 增殖系数呈先上升后下降的趋势，在第三代可达6．6，随 后出现降低。试验中还发现 ，随着继代次数的增加，变异 苗出现增多，使用同一继代培养基连续继代多次，其变异 率提高。组培快繁工厂化生产中最适的继代次数为4～5 次，应根据生产季节和需苗量来进行安排生产。 4 生根培养 组培苗的生根是非常重要的环节，根生长的好坏直接 影响过度苗的成活率。 4．1 选择壮苗进行生根培养 组培苗的生理生长状况对 其生根影响十分显著，继代苗处于旺盛的生长状态，苗高 2～3cm，茎粗 0．1cm左右，苗开始木质化，此时进行生根 培养，诱导时间短，诱导的根粗壮，根多。如果继代苗分化 率过高，苗小细弱，或培养时间过长，则将黄叶变弱，茎也 出现老化 ，很难诱导生根。 4．2 生根培养基 低浓度的生长素 IAA及 IBA、NAA0．1 ～ 0．5mg／L及低浓度 的糖 (2．0％ ～2．5％ )有利于微型月 季组培苗的生根。高浓度的生长素、细胞分裂素 BA对生 根有抑制作用，低浓度的生长素和 1／2MS配合对生根有 利 ，NAA的生根效果比 IAA好 ；低浓度 的 BA有利于根 的 伸长，但不利于根的加粗。另外，固体培养基比液体培养 基的生根效果要好 ，在生根培养基 中加入少许活性炭，对 生根有良好的促进作用。大量实验研究证明微型月季生 根培养最 适 的培养 基 为：1／2MS+IBA0．5～1．0mg／L+ NAA0．2mg／L+活性炭 0．2％。 4．3 生根培养环境条件 生根苗对温度和光照的需要， 与继代苗不 同。增强光照强度，提高昼夜温差 ，能够使生 根苗生长粗壮，叶色浓绿，根系短粗，侧根发达。在进行生 根培养时，可以在日光培养室培养，采用自然光照，温度保 持 15—30℃ ，昼夜温差 5～1O℃。 5 炼苗移栽 开瓶炼苗：选择根系完整，生长健壮的植株进行驯化， 首先把培养瓶的瓶盖打开炼苗 5～7d。然后把培养瓶再 移入温室炼苗5～7d，取出试管苗，洗净根部的培养基，再 移植在熟土 、草炭 、细沙按 2：1：1的混合基质中，移栽后 避免阳光直射，保持基质湿润 ，每间隔 10d喷低浓度百菌 清液防病，在保护设施条件下精心护理，成活率可达 85％以上 。在温室培养 50d左右可 以上盆或移入室外大 田培养。 参考 文献 [1]陈昌岑，朱建镛 ．不同季节 中IBA对迷你玫瑰不同节位之单节 插穗发育的影响[J]．中国园艺，1996，42(3)：204，216． [2]余树勋．月季[M]．北京：金盾出版社，1992． [3]朱建华，汤晓．月季的初代培养研究[J]．宁波职业技术学院学 报，2007，11(5)：100． (责编：张琪琪)