乙肝病毒大蛋白检测在乙型肝炎诊治中的临床意义

www.wjgnet.com ■背景资料 随着近年来对乙 肝病毒 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面蛋白 中前S1、S2抗原 在乙型肝炎发病 机制、病毒感染 与复制等方面的 深入研究, 具有双 重拓扑结构的乙 肝病毒大蛋白对 HBV感染、复制 及其疗效动态监 测的临床应用越 来越被研究者重 视. ■研发前沿 研究乙肝病毒大 蛋白可否作为判 断乙肝患者病毒 复制与抗病毒疗 效的一种新的可 靠的定量血清免 疫学指标. 乐爱平, 鞠北华, 王文, 张文景, 南昌大学第一附属医院检验 科 江西省南昌市 330006 乐爱平, 江西医学院医学检验专业毕业, 学士, 讲师, 主要从事临 床免疫学的教学、临床与科研工作. 通���������������� 乐爱平, 330006, 江西省南昌市永外正街17号, 南昌 大学第一附属医院检验科. leaiping@126.com 电话�� 07�1��6�27���� 07�1��6�27�� 收稿日期�� 2006�03�1����� ��日期�� 2006�03�2������� 2006�03�1����� ��日期�� 2006�03�2�����2006�03�1����� ��日期�� 2006�03�2������� 2006�03�2�����2006�03�2����� Clinical significance of serum hepatitis B virus large surface protein in diagnosis and treatment of patients with hepatitis B Ai-Ping Le, Bei-Hua Ju, Wen Wang, Wen-Jing Zhang Ai-Ping Le, Bei-Hua Ju, Wen Wang, Wen-Jing Zhang, Department of Clinical Laboratory, the First Affiliated Hos- pital of Nanchang University, Nanchang 330006, China Correspondence to: Dr. Ai-Ping Le, Department of Clini- cal Laboratory, the First Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, China. leaiping@126.com Received: 2006-03-14 Accepted: 2006-03-24 Abstract AIM: To discuss the clinical significance of hepatitis B virus large surface protein (HBV- LP) detection in the diagnosis and treatment of patients with hepatitis B. METHODS: Enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure the levels of serum HBV-LP, HBV preS1, HBV preS2 and HBV mark- ers, and fluorescence quantitative-polymerase chain reaction (FQ-PCR) was used to detect HBV DNA in 162 patients with hepatitis B as well as 47 normal controls.. RESULTS: In serum samples of the patient with HBV infection, the level of HBV-LP had signifi- cant correlation with that of HBV DNA, HBeAg, HBVpreS2 and HBVpreS1 antigen (χ2 = 9.22, 11.89, 60.35, 99.87; all P < 0.01). The contents of serum HBV-LP was positively correlated with HBV DNA copies (r s = 0.64, P < 0.001). The level of serum HBV-LP was also significantly dif- ferent between the groups with different HBV DNA copies (P < 0.01). The level and positive rate of serum HBV-LP were significantly differ- ent between HBV DNA-positive and negative patients (Z = 5.85, P < 0.001), and they were in the same situation for HBeAg, HBVpreS2 and HBVpreS1 antigen (Z = 8.70, 8.44, 8.84; all P < 0.001). The serum HBV-LP was more sensitive than HBV DNA, HBVpreS2 and HBVpreS1 anti- gen in HBeAg-negative patients (76.8%). Serum HBV-LP was significantly different between the patients with HBV infection and normal controls (P < 0.01). CONCLUSION: HBV-LP may serve as a reliable marker in the reflection of HBV replication at protein level, and it is valuable to monitor HBV replication and prognosis of the disease, espe- cially in HBeAg-negative HBV infected patients. Key Words: Hepatitis B virus; Large surface protein; Hepatitis B virus DNA; Hepatitis B virus preS1 anti- gen; Hepatitis B virus preS2 antigen; Enzyme-linked immunosorbent assay; Fluorescence quantitative- polymerase chain reaction Le AP, Ju BH, Wang W, Zhang WJ. Clinical significance of serum hepatitis B virus large surface protein in diagnosis and treatment of patients with hepatitis B. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2006;14(16):1578-1581 摘要 目的: 探讨乙肝病毒(HBV)大蛋白(LP)在乙型 肝炎诊治中的临床意义. 方法: 对162例HBV感染者及47名正常对照血 清采用酶联免疫吸附试验检测HBV-LP, HBV 前S1抗原, HBV前S2抗原及乙型肝炎血清标志 物; FQ-PCR定量检测HBV DNA. 结果: 在H B V感染组中 , H B V-L P与H B V DNA, HBeAg, HBVpreS2, HBVpreS1间相关显 著(χ2 = 9.22, 11.89, 60.35, 99.87; 均P <0.01), 其 含量与HBV DNA拷贝数成正相关(r s = 0.64, P <0.001), 不同HBV DNA拷贝数组别间HBV- LP含量存在差异显著性(χ2 = 135.34, P <0.01); HBeAg, HBV DNA, HBVpreS2, HBVpreS1不 同模式间HBV-LP含量及阳性率均存在差异 世界华人消化杂志 2006年6月8日; 14(16): 1578-1581 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 临床研究 CLINICAL RESEARCH 乙肝病毒大蛋白检测在乙型肝炎诊治中的临床意义 乐爱平, 鞠北华, 王 文, 张文景 wcjd@wjgnet.com ® 乐爱平, 等. 乙肝病毒大蛋白检测在乙型肝炎诊治中的临床意义 1579 www.wjgnet.com 显著性(Z = 8.70, 5.85, 8.44, 8.84, 均P <0.001); HBeAg阴性感染血清中HBV-LP较HBV DNA, HBVpreS2, HBVpreS1更为敏感(76.8%). HBV 感染组与正常对照组间HBV-LP含量存在差 异显著性(P <0.01). 结论: HBV-LP是从蛋白水平反映HBV感染 者体内病毒复制程度的可靠指标 , 尤其是 HBeAg阴性患者体内病毒复制及预后判断的 良好血清学监测指标. 关键词�� 乙型肝炎病毒; 大蛋白; HBV DNA; 乙型肝 炎病毒前S1抗原; 乙型肝炎病毒前S2抗原; 酶联免疫 吸附试验; 荧光定量聚合酶链反应 乐 爱 平 , 鞠 北 华 , 王 文 , 张 文 景 . 乙 肝 病 毒 大 蛋 白 检 测 在 乙 型 肝 炎 诊 治 中 的 临 床 意 义 . 世 界 华 人 消 化 杂 志 2006;1�����(16)��1�7��1��1 http://www.wjgnet.com/1009-3079/14/1578.asp 0 引言 乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个严重的公共卫 生问题. 我国属高地方性流行地区, 一般人群中 HBsAg流行率为9.09%, 其中慢性HBV感染者 约占全世界的1/3[1]; 其流行现状是HBeAg阴性 活动期肝炎增多, HBV变异株增加, HBV的突 变率较高. 在慢性HBV感染患者中, 约15%-25% 最终死于与HBV感染相关的肝病[2]. 前瞻性研 究表明, 慢性HBV感染患者发展肝硬化的估计 年发生率为2.1%, HBeAg阳性者的肝硬化发生 率较阴性者高[3]. 有学者对HBeAg阴性的慢性 乙肝患者进行平均为期9(1-18.4)a的随访, 发现 其进展为肝硬化和肝癌(HCC)的发生率分别为 23%和4.4%[4-5]. 目前临床上主要以肝功能的改 善, HBeAg血清转换和HBV DNA阴转作为乙肝 患者病毒复制与抗病毒疗效的监测指标[6], 但尚 有一定的局限性, 尤其对HBeAg阴性慢性乙肝 患者缺乏准确反映体内病毒复制与抗病毒疗效 的血清学指标. 为此我们研究乙肝病毒大蛋白 (hepatitis B virus large surface protein, HBV-LP) 作为一种新的可靠的定量血清免疫学指标在乙 型肝炎诊治中的检测意义. 1 材料和方法 1.1 材料 我院2006-01/02 HBV感染者血清162例, 男109例, 女53例; 年龄5-70(平均27.8)岁; 均符合 HBV感染的临床诊断标准, 且无其他嗜肝病毒 合并感染. 正常对照组47名来自健康无偿献血 者的血清, 男31例, 女16例, 年龄6-78(平均30.3) 岁, 均无嗜肝病毒感染, 且无肝脏、肾脏功能损 害. 德国Diasorin公司的ETI-max3000全自动酶 免 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪; 美国PerKin Elmer公司的PE5700自动 荧光PCR仪. HBV-LP酶免定量检测试剂盒由北 京热景生物技术有限公司提供; HBV DNA荧光 定量试剂盒购自广州中山大学达安基因股份有 限公司; HBVpreS1定性检测试剂盒购自上海复 星长征医学科学有限公司; HBVpreS2检测试剂 盒由北京肝炎试剂研究中心提供; HBVM检测试 剂盒购自英科新创(厦门)科技有限公司. 所用试 剂均在其有效期内. 1.2 方法 H B V-L P检测采用E L I S A双抗体夹 心法 , 定量时利用定值标准品0, 10, 25, 50, 100, 200 μg/L, 通过4-Parameter model由ETI- max3000全自动酶免分析仪自动测定结果; 定 性则样品A值≥阴性对照均值(0 μg/L标准品) ×2.1时判为阳性, 反之为阴性. HBV DNA荧光 定量测定采用FQ-PCR, 其含量小于1.00×103 时判为阴性, 反之判为阳性. HBVM, HBVpreS1, HBVpreS2测定均采用ELISA, 定性结果判定均 严格按试剂说明书编程由ETI-max3000全自动 酶免分析仪自动判读. 实验所有操作均严格遵守 南昌大学一附院临床免疫实验室SOP文件. 统计学处理 计量资料用中位数描述, 组间 比较采用秩和检验, 两指标间相关性分析采用 Spearman等级相关分析; 计数资料的两指标间 关联与率的显著性检验采用卡方检验或精确 概率; 显著性检验水准为α = 0.05. 统计软件为 SPSS12.0. 2 结果 2.1 HBV-LP含量与HBV DNA拷贝数相关 HBV 感染者血清中, HBV-LP含量随HBV DNA拷贝数 的增加呈上升趋势. 随HBV DNA拷贝数组别级 ■相关报道 乙肝鸭模型证实 HBV感染者血清 的感染性不仅依 赖于Dane颗粒的 多少, 还依赖于富 含大蛋白的亚病 毒颗粒的数量. 亚 病毒颗粒能够反 式激活病毒, 使病 毒复制重新激活. ■创新盘点 本 研 究 显 示 , H B V- L P 含量与 HBV-DNA拷贝数 间具有良好的正 相关, 能反映HBV 感染者机体内病 毒感染与复制程 度, 较HBVpreS1, HBVpreS2, HBV- DNA, HBeAg敏 感, 大蛋白阳性能 区分HBeAg阴性 慢性乙肝中的活 动期肝炎, 尤其是 HBV-DNA低水平 复制时具有重要 意义. bP<0.01 vs 正常对照组; dP<0.01 vs <3组; fP<0.01 vs 3������ 组, ��6组. 表 1 HBsAg阳性的HBV感染血清HBV-LP与HBV DNA的 关系 HBV DNA拷贝数 的对数值 正常对照组 HBV感染组 <3 3������ ��6 >7 �����7 60 2����� 22 �6 0.23 (0.0��1.������) �.�2 (0.03�171.1�)b 1�.�1 (0.��������1.�����1)b 22.������ (1.�6�1�����0.�3)bd 13�����.�7 (0.27�200.31)bdf 0 (0) ���������� (73.7) 20 (�3.3) 20 (�0.�) �3 (������.6) n HBV-LP (μg/L) Median (Min-Max) HBV-LP阳性率 n (%) 1580 ISSN 1009-3079 CN 14-1260/R 世界华人消化杂志 2006年6月�日 第1�����卷 第16期 数增加, HBV-LP阳性率亦逐渐增加(P <0.05). 二 者之间有良好的正相关性(r s =0.64, P <0.001). 正 常对照组, HBV感染组中不同HBV DNA拷贝数 组别间HBV-LP含量存在差异显著性(χ2 = 135.34, P <0.001, 表1). 2.2 HBV-LP与HBVpreS1, HBVpreS2, HBV DNA, HBeAg相关性 在162例HBV感染者血清中, HBV- LP与HBV DNA, HBeAg, HBVpreS2, HBVpreS1 阳性符合率分别为91.2%, 96.8%, 96.8%, 100%. H BV-LP与H BV DNA, H BeAg, H BVpreS2, HBVpreS1的符合率分别为67.3%, 51.8%, 87.0%, 92.6%. HBV-LP与HBV DNA, HBeAg, HBVpreS2, H BVpreS1间相关显著(χ2 = 9.22, 11.89, 60.35, 99.87; P <0.01). HBV-LP与HBV DNA, HBeAg, H BVpreS2, H BVpreS1间存在差异显著性(χ2 = 23.11, 70.20, 6.86, 10.08; P <0.05), HBV-LP的检 出率为84.6%(137/162), 较HBV DNA, HBeAg, HBVpreS2, HBVpreS1高(表2). HBeAg, HBV DNA, HBVpreS2, HBVpreS1不同模式间HBV-LP 含量比较见表3. 2.3 HBeAg阴性HBV感染血清中HBV-LP检测 99例HBeAg阴性HBV感染者血清中, HBV-LP 与HBVpreS2, HBVpreS1间相关显著(χ2 = 33.14, 57.28; P <0.01), 而与HBV DNA间无统计学意 义(χ2 = 1.49, P >0.05). HBV-LP与HBV DNA, HBVpreS2, HBVpreS1间存在差异显著性(χ2 = 25.0, 7.58, 9.09; P <0.01), HBV-LP的阳性检出 率为76.8%(76/99), 较HBV DNA, HBVpreS2, HBVpreS1高(表4). 3 讨论 乙肝病毒的3个包膜蛋白是从一个开放阅读框 的3个不同起始位点与相同的终止位点翻译表 达而来. 在病毒粒子成熟过程中, 大蛋白preS结 构域开始时都停留在胞膜的细胞质中, 通过S结 构域的Ⅱ型信号和疏水C端跨内质网膜, 大约一 半大蛋白的跨膜区域的拓扑结构在翻译后发生 了改变, 使得preS区域暴露于病毒粒子的表面, 从而产生大蛋白的独特双重拓扑结构[7]. 通过双 重拓扑学结构, 大蛋白preS结构域定位于病毒包 膜的两侧, 在病毒生活周期中执行两个重要功 能: 在外侧, preS1的N末端区域作为配体与病毒 受体结合; 在内侧, 在病毒组装时作为基质蛋白, 通过其103位精氨酸和124位丝氨酸之间的preS 区域直接与核壳相互作用, 同时介导HBsAg亚 病毒颗粒的细胞质滞留[7-8]. 亚病毒颗粒的形成 和分泌可作为HBV包膜蛋白正确折叠和参与病 毒粒子形成的指标[9]. 本研究显示, HBV-LP的含 量在正常对照组与HBV感染组间存在差异显著 性(P <0.01). 162例HBV感染血清中, HBV-LP的 含量与HBV DNA拷贝数间存在良好的正相关 性(r s = 0.64, P <0.001), 不同HBV DNA拷贝数指 数级间HBV-LP含量及阳性率两两比较有统计 学意义(P <0.01), 二者间的含量及阳性率存在一 定的平行关系; HBV-LP在HBVpreS1, HBVpreS2, HBV DNA, HBeAg不同模式间的含量存在差异 显著性(P <0.01), 各指标间的阳性符合率具有高 度一致性, 其关联显著(P <0.01). 表明HBV-LP是 反映HBV感染者机体内病毒复制程度的可靠指 标. 研究同时发现HBV-LP在HBV感染血清中较 HBVpreS1, HBVpreS2, HBV DNA, HBeAg敏感, 分析其原因: (1)HBV-LP检测采用的是立体构象 型表位的mAb, HBVpreS1, HBVpreS2作为HBV- LP的一部分, 无法模拟其复杂的双重拓扑结构, 在制作单克隆抗体时由于序列的折叠、卷曲而 → ■应用 要点 综治信访维稳工作要点综治信访维稳工作要点2018综治平安建设工作要点新学期教学工作要点医院纪检监察工作要点 H B V- L P 是用于 HBV感染者机体 内病毒复制程度 监测及疗效判断 的 良 好 指 标 , 其 检 测 有 利 于 对 HBeAg阴性HBV 感染者的病情进 程、疗效判断及 预后的监测. 表 2 HBV感染者血清HBV-LP与定性检测指标的相关性 HBV-LP 阳性 阴性 合计 137 2� 162 �3 ���������� � 16 102 60 61 76 2 23 63 �� n HBV DNA ＋ － HBeAg ＋ － HBVpreS2 ＋ － HBVpreS1 ＋ － 120 17 ����� 21 12����� 3� 12� 12 0 2� 12� 37 表 3 HBeAg, HBV DNA, HBVpreS2, HBVpreS1不同模式间 HBV-LP含量比较 分组 HBeAg HBV DNA HBVpreS2 HBVpreS1 63 �� 102 60 12����� 3� 12� 37 130.�� (0.27�200.31) 10.73 (0.03�166.13) ������.������ (0.27�200.31) �.�2 (0.03�171.1�) 31.23 (0.27�200.31) 1.70 (0.03�1�����.������) 30.�7 (0.27�200.31) 1.67 (0.03�12.73) n HBV-LP (μg/L) Median (Min-Max) �.70 �.�� �.���������� �.������ <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 P Z ■名词解释 乙肝病毒大蛋白: 在病毒粒子成熟 过 程 中 , 大 蛋 白 preS结构域开始 时都停留在胞膜 的细胞质中, 通过 S结构域的Ⅱ型信 号和疏水C端跨内 质网膜, 大约一半 大蛋白的跨膜区 域的拓扑结构在 翻译后发生了改 变, 产生大蛋白的 独特双重拓扑结 构. 大蛋白preS结 构域定位于病毒 包膜的两侧. 在外 侧, preS1的N末端 区域作为配体与 病毒受体结合; 在 内侧, 在病毒组装 时作为基质蛋白, 通过其103位精氨 酸和124位丝氨酸 之间的preS区域 直接与核壳相互 作用. 阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 阴性 表 4 HBeAg阴性HBV感染者血清HBV-LP与定性检测 指标的相关性 HBV-LP 阳性 阴性 合计 76 23 �� 3����� �����2 7 16 �����1 �� 60 16 3 20 63 36 n HBV DNA ＋ － HBVpreS2 ＋ － HBVpreS1 ＋ － 6� 11 0 23 6� 3����� www.wjgnet.com 乐爱平, 等. 乙肝病毒大蛋白检测在乙型肝炎诊治中的临床意义 1581 失去表位暴露的机会导致漏检; (2)HBV突变株 不断增加、HBV DNA检测的方法学与灵敏度缺 陷等使HBV DNA阴转并不能真实反映肝组织 内HBV感染及复制情况, 尤其是HBV DNA低水 平时, 肝内HBV DNA仍可维持一定水平; 目前 抗病毒治疗只能抑制cccDNA再复制, 并不能抑 制已经形成的病毒表达蛋白, 富含大蛋白的亚病 毒颗粒在一段时间内仍存在; (3)由于持续免疫 压力、长期治疗、前C和C启动子变异等原因, HBeAg阴性的慢性乙肝流行率呈不断升高趋势, HBeAg的阴转已不能真实反映HBV复制情况. 综上表明HBV-LP是用于HBV感染者机体内病 毒复制监测及疗效判断的良好指标. 在99例HBeAg阴性的HBV感染血清中, 研 究表明, HBV-LP与HBVpreS1, HBVpreS2间关联 显著(P <0.01), 而与HBV DNA之间无统计学意义 (P >0.05), 这可能与HBV感染者体内DNA低水平 复制及HBV-LP细胞内滞留有关. HBV-LP检出 率较HBV DNA, HBVpreS1, HBVpreS2更为敏感 (P <0.01). HBV感染肝细胞合成的大蛋白数量远 远超过病毒形态发生所需要的量, 在缺少病毒核 衣壳的条件下, 最终形成球状或纤维状的空的亚 病毒颗粒(SPVs). 乙肝鸭模型证实HBV感染者血 清的感染性不仅依赖于Dane颗粒的多少, 还依 赖于富含大蛋白的亚病毒颗粒的数量. 亚病毒颗 粒能够反式激活病毒, 使病毒复制重新激活[10]. 提示大蛋白阳性对HBeAg阴性慢性乙肝中的活 动期肝炎, 尤其是HBV DNA低水平复制时的病 情具有监测意义. 有研究表明, 大蛋白超量表达 会通过反式调控作用使SPVs不会分泌, 形成亚 病毒包膜纤维体, 其在细胞内积累可导致肝细胞 液泡化和细胞凋亡[11]. 这提示HBV-LP含量的连 续检测有利于对慢性乙肝预后的监测, 防止或延 缓肝硬化或HCC的发生与发展. 综上说明HBV- LP的检测有利于对HBeAg阴性HBV感染者的病 情进程、疗效判断及预后的监测. 4 参考文献 1 梁晓峰, 陈园生, 王晓军, 贺雄, 陈丽娟, 王骏, 林长缨, 白呼群, 严俊, 崔钢, 于竞进. 中国3岁以上人群乙型肝 炎血清流行病学研究. 中华流行病学杂志 2005; 26: 655-658 2 庄辉. 我国乙型肝炎病毒感染与挑战. 中华传染病杂志 2005; 23(增刊): 2-5 3 L i a w Y F , T a i D I , C h u C W , C h e n T J . T h e development of cirrhosis in patients with chronic type B hepatitis: a prospective study. Hepatology 1988; 8: 493-496 4 Hsu YS, Chien RN, Yeh CT, Sheen IS, Chiou HY, Chu CM, Liaw YF. Long-term outcome after spontaneous HBeAg seroconversion in patients with chronic hepatitis B. 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Hepatology 2002; 36: 1400-1407 电编 李琪 编辑 潘伯荣 ■同行评价 本文结论有利于 提高HBV感染者 的血清学诊断的 准 确 性 , 有 临 床 实用价值. 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 实 验 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 合理, 方法 可靠, 基本结果可 信. www.wjgnet.com