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H P kC法同时测定饲料预混料中.PDF

H P kC法同时测定饲料预混料中

小晶子
2011-04-17 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《H P kC法同时测定饲料预混料中pdf》,可适用于人文社科领域

·中国饲料年第lO期HPkC法同时测定饲料预混料中维生素C(VC)和VC磷酸酯的含量湖南农业大学食品科技学院张春艳广东海大集团畜牧水产研究中心周孝治【摘要】本文建立了高效液相色谱法(HPLC)同时测定饲料预混料中维生素c(vc)和VC磷酸酯含量的分析方法。采用LichrospherNH分析柱(mmx.ITinl谴v.m)以乙腈一磷酸缓冲灞t(.'v/v)为流动相流速为.mL/min检测波长为啪拄温为℃。在此色谱条件下VC和VC磷酸酯在.~.mg/L浓度范围内线性关系良好相关系数为.~.在..mg/kg加标浓度范围内。样品平均回收率为.%~.%日内相对标准偏差为O.%一.%日问相对标准偏差为.%~.%方法的检出限分别为.mg/L和O.mg/L。【关键词l维生素C维生素c磷酸酯饲料预混料高效液相色谱【中图分类号】$.【文献标识码】A【文章编号】()AbstractlTheexperimentWconductedtosimultaneouslydeterminethecontentofvitaminCandvitaminCphosphateinpremixfeedbyhir,hperformanceliquidchromatographic(HPIJc)method.Lichrosphel"一NHcolumn(mmX.姗i.d.¨m)wasusedwiththemixtureofmethanolphosphatebuffer(:V/V)athemobilephase.Theflowratewas.mL/mindetectionwavelengthWas咖columntemperatureWasoC.ThelinearrangeWas.~.ms/L。andthecorrelationcoefficientswere.~O.theaveragerecoveryratesofvitaminCandvitaminCphosphateinpremixfeedsampleswereintherangeof.%~.%whenspiked.~.ms/ks.innerdayBSDw鼬.%一.%interdayBSDw∞.%一.%。themethoddetectionlimitswere.ms/Land.ms/Lmspectively.【Keywords】vitaminCvitaminCphosphatepremixfeedHPLC维生素C(VC)又称L.抗坏血酸是动物生长发育过程中不可缺少的营养素之一(张辉等)。其结构中存在易氧化基团在饲料加工、储藏和使用过程中稳定性较差(葛建东和杨凌)。实际应用中常将VC酯化为稳定的VC磷酸酯.但由于其酯化程度及加工工艺不同饲料添加剂或预混料中VC磷酸酯常为单体VC和VC磷酸酯的混合物。因而其稳定性或利用率存在差异(张玮和尚平)。目前饲料添加剂中VC检测主要采用氧化还原滴定法和邻苯二胺荧光法。VC磷酸酯检测主要采用酶解法和紫外分光光度法。由于饲料预混料中干扰物质较多采用这些方法操作步骤复杂基金项目:湖南农业大学青年科学基金资助项目(QN)宰通讯作者且不能区分单体VC和VC磷酸酯的含量因而对不同厂家生产的饲料预混料中VC含量容易产生误判(张丽萍和吴小春)。本文旨在建立饲料预混料中VC和VC磷酸酯含量同时测定的高效液相色谱(HPLC)法以期获得简单快速、干扰少、回收率高、检测结果准确可靠的方法。l材料与方法.仪器与试剂Agilentl型高效液相色谱仪配有二极管阵列检测器(DAD)AgilentChem.Station色谱工作站HERMLEZ型高速离心机:SartoriusCPD型电子分析天平SCQ一A超声波清洗仪。VC标准品(Dr.Ehrenstorfer公司纯度≥.%)。VC磷酸酯钠盐标准品(Fluka公司纯度≥.%)。乙腈为色谱纯磷酸二氢钾、磷酸为分析纯.实验用水为Millipore超纯水。.溶液配制磷酸缓冲液的配制:准确称取万方数据lO年第期中国饲料一.g磷酸二氢钾用超纯水溶解稀释至mL用%磷酸调节pH至.。然后用.Ixm滤膜过滤配制成.mol/L磷酸二氢钾(pH.)的缓冲溶液。混合标准储备液的配制:准确称取VC和VC磷酸酯钠盐标准品各.nag于mL棕色容量瓶中用磷酸缓冲液溶解并定容至刻度即成.mg/L的VC和VC磷酸酯钠盐混合标准储备液于℃冰箱避光保存。.试验样品饲料预混料由广东某研究中心提供。.试验方法..色谱分析条件色谱柱:LichrospherNH分析柱(mmx.milli.d.斗m)流动相:乙腈一磷酸缓冲液(:VIV)检测器:DAD检测器检测波长为nln柱温:℃进样量:IxL流速:.mL/min。..样品的预处理称取样品.~g(精确至.g)于mL棕色具塞i角瓶中.加入流动相mL摇匀于cC水浴超声提取min冷却静置min取上层提取液约mL转入离心管中以drain离心min上清液用.¨m微孔滤器过滤进HPLC分析。..标准曲线的绘制用流动相将VC和VC磷酸酯钠盐混合标准储备液逐级稀释得到浓度为.、.、.、.、.mg/L和.mg/L的一系列标准工作液.在选定的色谱条件下.将浓度由低到高进样检测。以峰面积一浓度作图得到标准曲线回归方程。..样品的测定按外标法.将各试样经HPLC检测所得的VC和VC磷酸酯钠盐色谱峰面积分别代入相应的标准曲线方程.得到样品中VC和VC磷酸酯钠盐的含量.其中VC磷酸酯钠盐含量再乘以VC磷酸酯钠盐转换为VC磷酸酯的系数.求得样品中VC磷酸酯的含量。结果与讨论.样品预处理条件的选择..提取液的选择由于VC和VC磷酸酯属于极性化合物.其中VC溶液热稳定性较差.在中性或碱性水溶液中易被氧化。但在酸性溶液中比较稳定实验过程中分别用磷酸缓冲液(pH.)和流动相作为提取液考察了提取液对试样提取的影响。结果显示采用流动相作为试样提取液时提取效果良好且色谱峰形尖锐对称因此选用流动相作为试样提取液。..提取条件的选择实验选用流动相作为试样提取液对提取温度(、、、oC)和提取时间(、、、rain)两个条件参数进行了优化。结果表明:随着温度的升高VC磷酸酯的提取效率加快但单体VC的稳定性减弱随着提取时间的增加试样提取效率有所增加。当提取时间超过rain时提取液中杂质干扰增多最终确定参数为:提取温度℃提取时间min。.色谱条件的选择..检测波长的选择采用流动相作为背景缓冲液。对VC和VC磷酸酯标准液和样品溶液用二极管阵列检测器在~nm进行全波长紫外扫描。结果表明。VC和VC磷酸酯两种物质在nm处相对吸收最大。且杂峰干扰少.本实验选择检测波长为nm。..色谱柱的选择考察了C、C。和NH:分析色谱柱对VC和VC磷酸酯分离效果的影响.由于VC和VC磷酸酯极性较强在C埔和C。分析柱上保留时间短不能很好的与杂峰分离但在具有极性官能团的NH:色谱柱上VC、VC磷酸酯与杂峰之间分离效果良好相对保留时间较长故选择NH:色谱柱作为分离柱。..流动相的选择由于VC在酸性介质中比较稳定实验过程中考察了流动相磷酸缓冲液不同pH值(.、.、.)对色谱分离效果的影响。结果表明pH为.时VC和VC磷酸酯吸收值较大灵敏度高色谱峰形对称因此缓冲液pH选择为.。实验过程中还分别通过调节磷酸缓冲液不同浓度(.、.、.mol/L)和乙腈一磷酸缓冲液不同比例(:、:、:。V/V)来改善色谱峰的分离效果。结果显示随着磷酸缓冲液浓度的升高色谱峰形和分离度越好随着乙腈比例的升高保留时间缩短杂质干扰较大。当乙腈一磷酸缓冲液(.mol/L)比例为:(Wy)时目标峰与样品中的杂峰分离良好色谱峰形尖锐、对称(见图)在此色谱条件下VC和VC磷酸酯的保留时间分别为(.±.)min和(.±.)min。.标准曲线和方法检出限在上述色谱条件万方数据一一中国饲料年第期o毛's{O鼍柏时问m.nA时闻m.nB时问/minC注:^为标准溶液B为空白样品。C为加标榉品。图l不同样品中VC和VC磷酸酯的高效液相色谱图下。对.、.、.、.、.mg/L和.mdL的VC和VC磷酸酯混合标准工作液进样分析以HPLC测得的峰面积为纵坐标(:y)相应的浓度为横坐标(菇)绘制标准曲线得出VC和VC磷酸酯的线性回归方程、相关系数和线性范围根据倍信噪比(驯V)可计算出方法的检出限结果见表l。试验结果表明浓度为.~.mg/L时VC和VC磷酸酯线性关系良好.检出限分别为.m#L和.mg/L。裹lVC和VC磷酸酯的线性回归方程及检出限.方法的准确度和精密度对未添加VC和VC磷酸酯的空白饲料预混料进行加标样品回收率和精密度实验选择了.、.、.mg/kg三个添加水平.每个浓度平行测定次重复d结果见表。从表中的数据可以看出。添加浓度为..mg/kg时.饲料预混料样品中VC和VC磷酸酯的平均回收率为.%~.%.日内相对标准偏差为.%一.%.日间相对标准偏差为.%~.%。方法检测的准确度表饲料预混料中VC和VC磷酸酯的回收率和精密度测定和精密度良好满足分析的要求。.样品测定按本文所建立的方法测定了A、B、C、D、E五种不同饲料预混料样品中VC和VC磷酸酯的含量.将VC磷酸酯含量转换为VC含量(VC磷酸酯转换为VC的系数按.计)与所测单体VC含量之和得到总VC含量。结果如表所示.五种不同饲料预混料添加的总VC含量大致相同约为mg/kg但其中单体VC含量和VC磷酸酯含量却各不相同存在较大差异。表不同饲料预混料中VC、VC磷酸酯和总VC含量结论采用高效液相色谱法检测饲料预混料中VC和VC磷酸酯含量。其检测结果准确度高平均回收率在.%~.%。重现性好日内相对标准偏差在.%一.%日间相对标准偏差在.%~.%。样品的预处理简单快速不受样品中其他组分的干扰适用于饲料预混料中VC和VC磷酸酯的快速定量分析测定。参考文献葛建东。扬凌.饲料工艺对顿混料中堆生素的影响町.饲料研究。:~.张霹牟掘进g妾,h等.鱼类的堆生素C'l'jglll.饲井工业.():.张丽年.昊小春.圈内堆生素C仪暑定量分析进展m.四川轻化工学院学报。。():.张玮.尚平.穗定性雏生素C濠的提地工艺研究田.石末庄职土技术学院学报。:.【通讯地址:长沙市邮编:】万方数据HPLC法同时测定饲料预混料中维生素C(VC)和VC磷酸酯的含量作者:张春艳周孝治ZhangChunyanZhouXiaozhi作者单位:张春艳,ZhangChunyan(湖南农业大学食品科技学院)周孝治,ZhouXiaozhi(广东海大集团畜牧水产研究中心)刊名:中国饲料英文刊名:CHINAFEED年卷(期):()参考文献(条)葛建东杨凌饲料工艺对预混料中维生素的影响张辉牟振波单妾山鱼类的维生素C营养()张丽萍吴小春圈内堆生素C仪器定量分析进展()张玮尚平稳定性雏生素C源的提纯工艺研究本文链接:http:dgwanfangdatacomcnPeriodicalzgslaspx

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