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首页 GB 17818-1999-T 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法

GB 17818-1999-T 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法.pdf

GB 17818-1999-T 饲料中维生素D3的测定 高效液…

n940707
2011-04-14 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《GB 17818-1999-T 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法pdf》,可适用于农林牧渔领域

GB'r前言饲料中维生素D的测定目前尚无国家标准和国际标准本标准是参照美国公职分析化学家协会AOAC(年版)《混合饲料、预混合物和宠物食品中维生素D液相色谱法》及瑞士罗氏药品化学有限公司维生素研究部发表的《饲料中维生素和类胡萝卜素一现代分析方法尸用高效液相色谱法测定配合饲料和预混合饲料中维生素D”而制定的。在技术内容上参照两法在编写格式上依据GBT《标准化工作导则第单元:标准的起草与表述规则第部分:标准编写的基本规定》和GBT《标准化工作导则化学分析方法标准编写规定》。为了使饲料中维生素D测定方法科学、准确、经济、实用适合于我国不同实验室大量饲料样品的测定在参照国外分析方法的基础上增加了反相色谱测定条件。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人:陈必芳、赵小阳。中华人民共和国国家标准饲料中维生素D的测定高效液相色谱法GBTDeterminationofvitaminDinfeedsHighpressureliquidchromatography范围本标准规定了饲料中维生素D的测定一一高效液相色谱法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素D的测定测量范围为每千克样品中含维生素D(胆钙化醉)的量在U以上。引用标准下列标准所包含的条文通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时所示版本均为有效。所有标准都会被修订使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GBT分析实验室用水规格和试验方法方法原理用碱溶液皂化试验样品乙醚提取未皂化的化合物蒸发乙醚残渣溶解于甲醇并将部分溶液注入高效液相色谱净化柱中除去干扰物收集含维生素D,淋洗液馏分蒸发至干溶解于正己烷中注入高效液相色谱分析柱用紫外检测器在nm处测定通过外标法计算维生素D。的含量当样品中维生素D。标示量超过每千克IU时可省去高效液相色谱净化柱试验溶液直接注入色谱分析柱分析。试剂和材料除特殊注明外本标准所用试剂均为分析纯水为蒸馏水色谱用水为去离子水符合GBT用水的规定。无水乙醚:无过氧化物。过氧化物检查方法用mi乙醚加MI碘化钾溶液振摇Imin如有过氧化物则放出游离碘水层呈黄色。若加。淀粉指示液水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。去除过氧化物的方法:乙醚用硫代硫酸钠溶液振摇静置分取乙醚层再用蒸馏水振摇洗涤两次重蒸弃去首尾部分收集馏出的乙醚再检查过氧化物应符合规定乙醇正己烷:重蒸馏(或光谱纯)。,一二氧六环。甲醉:优级纯。一一一一‘国家质量技术监督局一一批准一一实施GBT,叔i一基对甲酚(BHT)无水硫酸钠氢氧化钾溶液g抗坏血酸乙醇溶液g:取。g抗坏血酸结晶纯品溶解于m工温热的蒸馏水中用乙醇稀释至mL临用前配制。氯化钠溶液gLo维生素D,标准济液门维生素D:标准贮备液:准确称取mg维生素D,(胆钙化醇)USP结晶纯品于mL棕色容童瓶中用正己烷溶解并稀释至刻度℃保存。该贮备液的浓度为每毫升含mg维生素D,维生素D:标准工作液:准确吸取维生素D。标准贮备液(()用正己烷按:比例稀释该标准溶液浓度为每毫升含lSg(U)维生素D,o门酚酞指示剂乙醇溶液gL,门氮气。仪器、设备门实验室常用设备圆底烧瓶带回流冷凝器恒温水浴或电热套旋转蒸发器。超纯水器(或全磨口玻璃蒸馏器)。高效液相色谱仪(两套)带紫外检测器试样的制备选取有代表性的饲料样品至少g四分法缩减至g,磨碎全部通过。mm孔筛混匀装入密闭容器中避光低温保存备用。分析步骤了门试验溶液的制备皂化称取试样配合饲料g浓缩饲料g,精确至。g。维生素预混料或复合预混料g,精确至。g,置入ml圆底烧瓶中加^mL抗坏血酸乙醇溶液(()使试样完全分散、浸湿加ml氢氧化钾溶液((),混合均匀。置于沸水浴上回流min不时振荡防止试祥粘附在瓶壁L皂化结束分别用mL乙醇,mL水自冷凝管顶端冲洗其内部取出烧瓶冷却至约C提取定债转移全部皂化液于盛有ml乙醚()的ml,分液漏斗中用^mL蒸馏水分次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗加盖放气随后混合激烈振荡min,静置分层。转移水相于第二个分液漏斗中分次用,mL乙醚重复提取两次弃去水相合并三次乙醚相。用抓化钠溶液()mI洗涤一次再用蒸馏水每次mL洗涤乙醚提取液至中性初次水洗时轻轻旋摇防山乳化乙醚提取液通过无水硫酸钠()脱水转移到ml棕色容量瓶中加mgBHT()使之溶解用乙醚定容至刻度(认)。以上操作均在避光通风柜内进行。浓缩从乙醚提取液(v,)中分取一定体积(v)(依据样品标示量、称样敏和提取液量确定分取量)置于旋转蒸发器烧瓶中在部分真空水浴温度C的条件「蒸发至干或用氮气吹干。残渣用正己烷()GsT溶解(需净化时用甲醇溶解按进行)并稀释至MI,(V,)使其获得的溶液中每毫升含维生素D,^pg(U)离心或通过。pm过滤膜过滤收集清液移入mL小试管用于高效液相色谱分析柱分析。使用高效液相色谱净化柱提取用m一甲醇()溶解圆底烧瓶中的残渣向高效液相色谱净化柱中注射。ml甲醇溶液(按所述色谱条件以维生素D标准甲醇溶液流出时间)收集含维生素D的馏分于ml小容量瓶中蒸发至干(或用氮气吹干)溶解于正己烷中。所测样品的维生素D,标示量在每千克超过NOW范围时可以不使用高效液相色谱净化柱直接用分析柱分析。测定高效液相色谱净化条件柱和固定相:LichrosorbRP,粒度pm,cmXmm(内径)。移动相:甲醉水(十),:mLmin:室温。检测器:紫外检测器使用波长nn,高效液相色谱分析条件正相色谱柱长:cm、内径mm不锈钢柱。固定相:硅胶Lichrosorbsi,粒度pm,移动相正己烷十,一二氧六环(十)恒量流动:mLmin,:室温。进样体积:jAL,检测器:紫外检测器使用波长nn,保留时间:min反相色谱柱长:cm内径mm不锈钢柱。固定相:ODS或C:a)粒度pm,移动相:甲醇十水(S),恒量流动。:mLmin,:室温进样体积:IL检测器紫外检测器使用波长nme保留时间:min定量测定按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数和灵敏度(AUFS)为准确测量按要求对分析柱进行系统适应性试验使维生素D,与维生素D原或其他峰之间有较好分离度其R>。向色谱柱注入相应的维生素D。标准工作液(V,)和试验溶液(V),得到色谱峰面积的响应值(P,P,)用外标法定量测定结果的计算与表述计算公式:结果按式(功计算GBTPXV二XVXp,XVxm一子XXV,XV,Xf,。。一每克或每千克样品中含维生素D,的量,IUm一一样品质量gV。一提取液的总体积mL····⋯⋯(I式中VII从乙醚提取液(V)中分取的溶液体积mLV试验溶液最终体积mLA一标准溶液浓度pgmLV一一维生素D。标准溶液进样体积pLV一一从试验溶液中分取的进样体积pLP与标准溶液进祥体积(V)相应的峰面积响应值尸与从试验溶液中分取的进样体积(V)相应的峰面积响应值厂一转换系数I国际单位((U)维生素D,相当于pg胆钙化醉一一为回流皂化时生成维生素D原的校正因子。注:标准维生索D结晶纯品与试样同样皂化处理后所得标准溶液注入高效液相色谱分析柱以维生素D。峰面积计算时可不乘平行测定结果用算术平均值表示保留有效数位。允许差同一分析者对同一试样同时两次测定(或重复测定)所得结果相对偏差:每千克试样中含维生素D,的量IU允许相对偏差YOX'Xlo,士>X'"X士>IXl‘士

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