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在测定维生素C的国标方法中.doc

在测定维生素C的国标方法中

小晶子
2011-04-13 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《在测定维生素C的国标方法中doc》,可适用于高等教育领域

在测定维生素C的国标方法中,荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法,,-二硝基苯肼法作为第二法在测定维生素C的国标方法中,荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法,,-二硝基苯肼法作为第二法一,荧光法原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰本方法的最小检出限为gml适用范围GB本方法适用于蔬菜,水果及其制品中总抗坏血酸的测定仪器实验室常用设备荧光分光光度计或具有nm及nm波长的荧光计打碎机试剂本实验用水均为蒸馏水,试剂不加说明均为分析纯试剂()偏磷酸-乙酸液:称取g偏磷酸,加入ml冰乙酸及ml水,搅拌,放置过夜使之逐渐溶解,加水至ml℃冰箱可保存~天()molL硫酸:取ml硫酸,小心加入水中,再加水稀释至ml()偏磷酸-乙酸-硫酸液:以molL硫酸液为稀释液,其余同配制()%乙酸钠溶液:称取g乙酸钠(CHCOONa·HO),加水至ml()硼酸乙酸钠溶液:称取g硼酸,溶于ml乙酸钠溶液()中临用前配制()邻苯二胺溶液:称取mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至ml()百里酚蓝指示剂溶液:称取g百里酚蓝,加molL氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为ml,磨溶后用水稀释至ml变色范围:pH=红色pH=黄色pH>兰色()活性炭的活化:加g炭粉于L盐酸中,加热回流~h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于~℃烘箱中干燥,备用()标准抗坏血酸标准溶液(mgml):准确称取mg抗坏血酸,用溶液()溶于ml容量瓶中,并稀释至刻度抗坏血酸标准使用液(μgml):取ml抗坏血酸标准液,用偏磷酸乙酸溶液稀释至ml定容前试pH值,如其pH>时,则应用溶液()稀释标准曲线的制备:取下述"标准"溶液(抗坏血酸含量μgml),,和ml标准系列,取双份分别置于ml带盖试管中,再用水补充至ml操作步骤样品制备全部实验过程应避光称取g鲜样,加g偏磷酸乙酸溶液,倒入打碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度如呈红色,即可用偏磷酸乙酸溶液稀释,若呈黄色或兰色,则用偏磷酸乙酸硫酸溶液稀释,使其pH为匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定当样品液含量在~μgml之间,一般取g匀浆,用偏磷酸乙酸溶液稀释至ml,过滤,滤液备用氧化处理:分别取样品滤液及标准使用液各ml于带盖三角瓶中,加g活性炭,用力振摇min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即样品氧化液和标准氧化液,待测定各取ml标准氧化液于个ml容量瓶中,分别标明"标准"及"标准空白"各取ml样品氧化液于个ml容量瓶中,分别标明"样品"及"样品空白"于"标准空白"及"样品空白"溶液中各加ml硼酸乙酸钠溶液,混合摇动min,用水稀释至ml,在℃冰箱中放置h,取出备用于"样品"及"标准"溶液中各加入ml乙酸钠溶液,用水稀释至ml,备用荧光反应取"标准空白"溶液,"样品空白"溶液及()中"样品"溶液各ml,分别置于ml带盖试管中在暗室中迅速向各管中加入ml邻苯二胺,振摇混合,在室温下反应min,用激发光波长nm,发射光波长nm测定荧光强度标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标,对应的抗坏血酸含量为横坐标,绘制标准曲线或进行相关计算,其直线回归方程供计算时使用计算X=(c×Vm)×F×()式中:X样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量,mggc由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液浓度,μgmlm试样质量,gF样品溶液的稀释倍数V荧光反应所用试样体积,ml例:测定每一制备溶液的荧光强度用标准溶液每ml含μg,μg,μg及μg,各标准浓度管读数减去相应的标准空白读数的各平均值做标准曲线由样品液读数减去样品液空白读数之值,从标准曲线上查得相应的抗坏血酸(μgml),按取样量及稀释率计算样品中抗坏血酸的含量如:取制备好的辣椒样品g,稀释到ml,氧化后分别取ml滤液稀释到ml样品读数为,样品空白读数为,样品读数减去样品空白读数为,查荧光标准曲线相当标准抗坏血酸的μg×××=(mgg)注意事项大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶,因此,抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生素C某些果胶含量高的样品不易过滤,可采用抽滤的方法,也可先离心,再取上清液过滤活性炭可将抗坏血酸氧化为脱氢抗坏血酸,但它也有吸附抗坏血酸的作用,故活性炭用量应适当与准确,所以,应用天平称量我们的实验结果证明,用g活性炭能使测定样品中还原型抗坏血酸完全氧化为脱氢型,其吸附影响不明显意见建议:二,,二硝基苯肼法原理总抗坏血酸包括还原型,脱氢型和二酮古乐糖酸样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与,二硝基苯肼作用生成红色脎,脎的含量与总抗坏血酸含量成正比,进行比色测定适用范围GB本方法适用于蔬菜,水果及其制品中总抗坏血酸的测定仪器恒温箱:±℃可见紫外分光光度计打碎机试剂本实验用水均为蒸馏水,试剂纯度均为分析纯molL硫酸:谨慎地加ml硫酸(比重)于ml水中,冷却后用水稀释至ml硫酸:谨慎地加ml硫酸(比重)于ml水中,二硝基苯肼溶液:溶解g,二硝基苯肼于mlmolL硫酸内,过滤不用时存于冰箱内,每次用前必须过滤草酸溶液:溶解g草酸于ml水中,稀释至ml草酸溶液:稀释ml草酸溶液到ml硫脲溶液:溶解g硫脲于ml草酸溶液中硫脲溶液:溶解g硫脲于ml草酸溶液中molL盐酸:取ml盐酸,加入水中,并稀释至ml活性炭:将g活性炭加到mlmolL盐酸中,回流~h,过滤,用水洗数次,至滤液中无铁离子(Fe)为止,然后置于℃烘箱中烘干标准()抗坏血酸标准溶液(mgml):溶解mg纯抗坏血酸于ml草酸溶液中()标准曲线绘制加g活性炭于ml标准溶液中,摇动min,过滤取ml滤液放入ml容量瓶中,加g硫脲,用草酸溶液稀释至刻度抗坏血酸浓度为μgml取,,,,,,ml稀释液,分别放入个ml容量瓶中,用硫脲溶液稀释至刻度,使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为,,,,,及μgml按样品测定步骤形成脎并比色以吸光值为纵坐标,以抗坏血酸浓度(μgml)为横坐标绘制标准曲线操作步骤样品制备全部实验过程应避光鲜样制备:称g鲜样和g草酸溶液,倒入打碎机中打成匀浆,取g匀浆(含mg抗坏血酸)倒入ml容量瓶中,用草酸溶液稀释至刻度,混匀干样制备:称g干样(含mg抗坏血酸)放入乳钵内,加入草酸溶液磨成匀浆,倒入ml容量瓶中,用草酸溶液稀释至刻度,混匀将上述两液过滤,滤液备用不易过滤的样品可用离心机沉淀后,倾出上清液,过滤,备用氧化处理:取ml上述滤液,加入g活性炭,振摇min,过滤,弃去最初数毫升滤液取ml此氧化提取液,加入ml硫脲溶液,混匀呈色反应于三个试管中各加入ml稀释液一个试管作为空白,在其余试管中加入ml,二硝基苯肼溶液,将所有试管放入±℃恒温箱或水浴中,保温hh后取出,除空白管外,将所有试管放入冰水中空白管取出后使其冷到室温,然后加入ml,二硝基苯肼溶液,在室温中放置~min后放入冰水内其余步骤同样品硫酸处理:当试管放入冰水后,向每一试管中加入ml硫酸,滴加时间至少需要min,需边加边摇动试管将试管自冰水中取出,在室温放置min后比色比色:用cm比色杯,以空白液调零点,于nm波长测吸光值计算同荧光法注意事项大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶,因此,抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用草酸溶液制成匀浆以保存维生素C若溶液中含有糖,硫酸加得太快,溶解热会使溶液变黑试管自冰水中取出后,颜色会继续变深,所以,加入硫酸后分钟应准时比色

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