荧光和倒置相差显微镜

荧光和倒置相差显微镜的使用 荧光显微镜的使用 • (一)载玻片载玻片厚度应在 0.8～ 1.2mm 之间,太厚的坡片,一方面光吸收 多,另一方面不能使激发光在标本上聚 集.载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自 发荧光. 有时需用石英玻璃载玻片. • (二)盖玻片盖玻片厚度在 0.17mm 左右 ,光洁.为了加强激发光,也可用干涉盖玻 片, 这是一种特制的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面镀有若干层对 不同波长的光起不同干涉作用的物质 ( 如氟化镁)的盖玻片,它可以使荧光顺利 通过,而反射激发光,这种反射的激发光 可激发标本. • (三)标本组织切片或其他标本不能太 厚,如太厚激发光大部分消耗在标本下 部,而物镜直接观察到的上部不充分激 发.另外,细胞重迭或杂质掩盖,影响判断 . • (四)封裱剂封裱剂常用甘油,必须无自 发荧光,无色透明,荧光的亮度在 pH8.5 ～9.5 时较亮,不易很快褪去.所以,常用 甘油和 0.5mol/l pH9.0～9.5 的碳酸盐缓 冲液的等量混合液作封裱剂. 或者用 DABCO抗淬灭剂 • (五)镜油一般暗视野荧光显微镜和用 油镜观察标本时,必须使用镜油,最好使 用特制的无荧光镜油,也可用上述甘油 代替 荧光显微镜操作程序 • 开机: – 打开房间总电源开关 – 打开电脑电源开关 – 打开数码相机电源开关 – 打开显微镜电源开关(打开汞灯电源开 关) • 调试显微镜光路: • 把载玻片放到载物台上.调节聚焦. • 根据物镜指数乘 0.8 确定聚光镜光圈值 • 调整到位. 将视场光阑缩小,然后调节聚 光镜高度,直到从目镜中观察到视场 • 放大视场光阑,使其在目镜中的黑框扩 展到视野以外. 光阑的清晰成像. • 调试数码相机拍摄照片 • 打开专门拍摄软件，或者ipp进入预览 窗口，调节合适的曝光时间，如果要 定量 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ，一定要根据对照设定好曝 光时间，这样才比较科学 • DAPI（蓝光）定位细胞界面，红光(PI) 和绿光(FITC)比较容易淬灭（可以加 DABCO抗淬剂） • 关机: • 关闭显微镜电源. 关闭汞灯电源. 关闭 数码相机电源. 关闭电脑时点"重新启 动电脑",待电脑进入关闭状态并重新启 动关闭房间电源总开关 使用荧光显微镜的注意事项 • (1)严格按荧光显微镜出厂 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 要求 进行操作,不要随意改变程序. • (2)应在暗室中进行检查.进入暗室后,接 上电源,点燃超高压汞灯 5～1 5min,待 光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗 室,再开始观察标本. • (3)防止紫外线对眼睛的损害,在调整光 源时应戴上防护眼镜. • (4)检查时间每次以 1～2h 为宜,超过 90min, 超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标 本受紫外线照射 3～5min 后,荧光也明显减 弱;所以,最多不得超过 2～3h. • (5)荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检 查,以节省时间,保护光源. 天热时,应加电扇 散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时 间.灯熄灭后欲再用时,须待灯泡充分冷却后 才能点燃.一天中应避免数次点燃光源. • (6)标本染色后立即观察,因时间久了荧光会 逐渐减弱.若将标本放在聚乙烯塑料袋中 4℃保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸 发. • (7)荧光亮度的判断标准:一般分为四级,即 • “-"—无或可见微弱荧光. • "+"—仅能见明确可见的荧光 • ."++"—可见有明亮的荧光. • "+++"—可见耀眼的荧光. 倒置相差显微镜 • （一）相差显微镜的特点 • 相差显微镜是一种将光线通过透明标 本细节时所产生的光程差（即相位差 ）转化为光强差的特种显微镜 • 光线通过比较透明的标本时，光的波长（颜色）和 振幅（亮度）都没有明显的变化。因此，用普通光 学显微镜观察未经染色的标本（如活的细胞）时， 其形态和内部结构往往难以分辨。然而，由于细胞 各部分的折射率和厚度的不同，光线通过这种标本 时，直射光和衍射光的光程就会有差别。随着光程 的增加或减少，加快或落后的光波的相位会发生改 变（产生相位差）。光的相位差人的肉眼感觉不到 ，但相差显微镜能通过其特殊装置——环状光阑和 相板，利用光的干涉现象，将光的相位差转变为人 眼可以察觉的振幅差（明暗差），从而使原来透明 的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强，使我 们能比较清楚的观察到普通光学显微镜和暗视野显 微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些 细微结构。 • （二）相差显微镜的结构和装置 • 相差显微镜与普通光学显微镜的基本 结构是相同的，所不同的是它具有四 部分特殊结构：即环状光阑、相板、 合轴调节望远镜及绿色滤光片。 • 1、环状光阑 具有环形开孔的光阑。 位于聚光器的前焦点平面上，光阑的 直径大小是与物镜的放大倍数相匹配 的，并有一个明视场光阑，与聚焦器 一起组成转盘聚光器。在使用时只要 把相应的光阑转到光路即可。 • 2、相板 位于物镜内部的后焦平面上 。相板上有两个区域，直射光通过的 部分叫“共轭面”，衍射光通过的部分叫 “补偿面”。带有相板的物镜叫相差物镜 ，常以“Ph”字样标在物镜外壳上。 • 3、合轴调节望远镜 是相差显微镜一个极为 重要的结构。环状光阑的像必须与相板共轭 面完全吻合，才能实现对直射光和衍射光的 特殊处理。否则应被吸收的直射光被泄掉， 而不该吸收的衍射光反被吸收，应推迟的相 位有的不能被推迟，这样就不能达到相差镜 检的效果。旋转合轴调节望远镜的焦点，便 能清楚看到一明一暗两个圆环。再转动聚光 器上的环状光阑的两个调节钮，使明亮的环 状光阑圆环与暗的相板上共轭面暗环完全重 叠。如明亮的光环过小或过大，可调节聚光 器的升降旋钮，使两环完全吻合。 • 4、绿色滤光片 由于使用的照明光线 的波长不同，常引起相位的变化，为 了获得良好的相差效果，相差显微镜 要求使用波长范围比较窄的单色光， 通常是用绿色滤光片来调整光源的波 长。Olympus厂家生产的相差显微镜在 镜检时要使用该厂 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 的IF550绿色滤 光片作为配套器件。 • （三）相差显微镜的使用范围、操作 步骤及注意事项 • 1、使用范围 相差显微镜能观察到透 明样品的细节，适用于对活体细胞生 活状态下的生长、运动、增殖情况及 细微结构的观察。因此，是微生物学 、细胞生物学、细胞和组织培养、细 胞工程、杂交瘤技术等现代生物学研 究的必备工具。 • 2、操作步骤 • （1）根据观察标本的性质及要求，挑 选适合的相差物镜。 • （2）将标本片放到载物台上。 • （3）进行光轴中心的调整。 • （4）调整环状光阑与相板上的共轭面 圆环完全重叠吻合 • （5）放上绿色滤光片，即可进行镜检 ，镜检操作与普通光学显微镜 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 相 同。 • 3、注意事项 • 1.取培养细胞瓶时应该带手套轻柔操作 ，不用让培养液沾到瓶口，瓶盖也要 在培养箱拧紧 • 2.观察培养皿，底下可以放置一个载玻 片为支架 荧光和倒置相差显微镜的使用 荧光显微镜的使用 荧光显微镜操作程序 使用荧光显微镜的注意事项 倒置相差显微镜