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抗乙肝胎盘特异转移因子的特异免疫活性观察

抗乙肝胎盘特异转移因子的特异免疫活性观察第 15卷第2期泰山医学院学报 v0I．15 N0．2 1994年 lOURNAL OF TAISHAN M EDICAL COI LEGE 1994年研究证明．银染成分并非 NOR本身，而是与 NOR相关的一种酸性蛋白，因而这种蛋白被称为银染核仁组成区相关蛋白 (AgNORs)，它可能是 RNA聚合酶 I的亚单位，与 TRNA基因转录活动有关。其数目增加表明①细胞增生活跃，②核仁融合有缺陷，③细胞染色体倍数增加，④TRNA 转录活动增加...

第 15卷第2期泰山医学院学报 v0I．15 N0．2 1994年 lOURNAL OF TAISHAN M EDICAL COI LEGE 1994年研究证明．银染成分并非 NOR本身，而是与 NOR相关的一种酸性蛋白，因而这种蛋白被称为银染核仁组成区相关蛋白 (AgNORs)，它可能是 RNA聚合酶 I的亚单位，与 TRNA基因转录活动有关。其数目增加表明①细胞增生活跃，②核仁融合有缺陷，③细胞染色体倍数增加，④TRNA 转录活动增加。我们的观察也发现在恶性病变中AgNORs数量增多。其分布形式以弥散型为主，颗粒较小，弥散于核内，而良性病变中其数量较少，其分布形式以聚集型(团块状)为主，颗粒较大，多居核中心部位。 3．2 从我们的观察结果中看出，恶性病变组及其它 5组良性病变的细胞核中的 Ag— NORs计数均显著高于正常对照组 (P< 0．001)，而恶性病变组又显著高于各良性病变组(尸／ ·七2口内容提要报告提取自HBvM—Ag阴性、HBvM～Ab阳性胎盘的特异转移因子的免疫活性，证明经本剂注射的小白鼠外周血淋巴细胞明显增多，胸腺重量和胸腺指数亦明显增加，进而脂酶染色证明 75 属 T一样淋巴细胞，25 属 Thy一样淋巴细胞。此外．用正常人外周血白细胞，或小鼠腹腔巨噬细胞和脾蛔胞体外转移特异胎盘转移因子(PSTF) 的特异免疫活性；豚鼠或小鼠注射 PSTF体内转移 PSTF特异免疫活性，再取其腹腔巨噬细胞和脾细胞，作白细胞粘附抑制试验、白细胞移动抑制试验、特异淋巴细胞转化试验和小鼠足掌注射试验，均可得到明显阳性结果，说明 PSTF对 HBV具有特异免疫活性，阳性供体可将 PSTF的特异免疫活性转移给阴性受体。关键词抗乙肝胎盘特异转移因子；T淋巴细胞；特异免疫活性。 ’ _ — - — — — — — - 一 — 。 - - 一 — ～。 r HP下F 维普资讯 http://www.cqvip.com 篝 2朝张光褂等抗己肝曲盘特异转韩困子的特异免痤活性理寨以正常人体胎盘为原材料提取胎盘转移因子 (HPTF)，70年代末首在我国获得成功，实验研究不仅可以证明符合转移因子理化特性，而且亦有较好免疫活性，临床试用治疗多种疾病亦能获得较好的效果，因而被认为是一种新型免疫调节荆 ]。随后，为探讨乙型肝炎的免疫治疗，又以 HBVM—Ag阴性、HBVM—Ab阳性胎盘为原材料，制备抗乙肝胎盘特异转移因子 (PSTF)亦获得成功，临床试用治疗急慢性乙型肝炎、肝硬化亦均可获较好效果 ]。为探讨治疗机理，试作进一步免疫活性研究，现将结果报告如下。 l 材料和方法 1．1 PSTF 收集 HBVM —Ag阴性、 HBVM—Ab阳性胎盘，按转移因子制备方法，另在制备过程中增加 0．125 甲醛 (v／v)和 56℃10小时灭活，最后经截留 10000分子量超滤膜超滤而成。由本院制荆实验室提供。 1．2 HBsAg纯蛋白购自北京医科大学肝病研究所。 1．3 实验方法 1．3．1 PSTF对小鼠免疫功能影响 1．3．1．1 实验动物 18g一22g体重昆系小鼠 3o只，雌雄各半，随机分为三组。第 1 组为对照，腹腔内注射生理盐水 0．2ml／只／日，第 2、3组分别腹腔内注射 PSTF 0．2 ／只／日，均为连续 7天。 1．3．1．2 细咆计数与分类实验第 8天摘眼球收集血液，2小时内计数白细咆．同时推片作细咆分类和脂酶染色，观察 T淋巴细咆亚群。 1．3．1．3 啕腺、脾脏重量和指数小鼠经取血后，再取出胸腺和脾脏，用分析天平称重量，井计算出二者指数。 1．3．2 白细胞粘附抑制试验 1．3．2．1 体外转移 PSTF特异免疫活性 ①正常人外周血白细咆分离出正常人外周血白细胞，制戚悬液后与 PSTF37℃共育 3o分钟，转移 PSTF特异免疫活性0 }另一份以生理盐水代替 PSTF作对照。白细咆粘附抑制试验按常规方法进行0 ”]．两人同时各计数白细咆计数板上一个太方格内白细咆．平均数作报告。非拈甜白细胞指数一含 HB5Ag瞥内平不舍 HI~．Ag瞥内平均非拈酣白细胞均非桔甜白细胞两赢百罕酉丽 i丽一 ②小鼠白细咆处死昆系小鼠后，用 Hank液洗出腹腔内巨噬细胞，同时取出脾腔制备脾细胞悬液．二者混合后．调整细胞数为 1×10 ／ml，转移 PSTF特异免疫活性和实验方法同上。 1．3．2．2 体内转移 PSTF特异免疫活性取昆系小鼠腹腔注射 PSTF0．5ml／只／日，连续 3天，第 4天处死．洗出腹腔内巨噬细胞，井取出脾脏制成脾细胞悬液，二者混合后，调整细咆数，按上述方法作白细咆枯附抑制试验。 1．3．3 白细胞移动抑制试验 1．3．3．1 体外转移 PSTF特异免疫活性正常人外周血白细咆悬液的制备和体外转移 PsTF特异免疫话性均同白细胞粘附抑制试验。白细胞移动抑制按下面两种方法： ①琼脂糖平板法常规制备琼脂糖平板，按常规作白细胞移动抑制试验[1 l1]。白细胞移动抑制指数一嚣铹 ②毛细管法常规制备好培养基，按常规作自细胞移动抑制试验m“ ，计算方法同上。维普资讯 http://www.cqvip.com 1．3．3．2 体内转移 PSTF特异免疫活性取体重 300g豚鼠腹腔注射 PSTF0．5ml／只／日，连续 7天，第 12天处死，洗去腹腔内巨噬细胞，再取出脾脏制成细咆悬液；或小鼠腹腔注射 PSTF0．2ml／只／日，连续 5 天，第 6天处死，洗出腹腔内巨噬细胞，同时取出脾脏制成脾细胞悬液；不同来源细胞悬液混合后，调整细胞数为 1×10 ／ml，按上述琼脂糖平板法观察白细胞移动抑制试验。 1．3．4 特异淋巴细胞转化试验取 8同龄 Balb／C小鼠 9只，雌雄不限，平均分 3 组。实验组腹腔注射 PSTF0．2ml／只／日，对照组 l腹腔注射 HPTF0．2ml／只／日，对照组 2腹腔注射生理盐水，均连续 7天，第 8天取出脾脏利成脾细胞悬液，调整细胞数为 1×1O ／ml，接种于 96孔细胞培养板，每孔 100tA，用不同剂量 HBsAg刺激培养，放 37℃ 5 CO：孵箱内，分别在 3 5、7天加入四甲基偶氮蓝染料，24小时后再加助溶剂，孵育 l2～18小时，用酶联仪测定 OD值，并计算刺激指数。 1．3．5 小鼠足掌注射试验取体重 l8g ～ 22g昆系小鼠 24只，雌雄各半，随机平分 2组。实验组腹腔注射 PSTF0．2ml，对照组腹腔注射生理盐水 0．2ml，均每天一次，连续 5天；第 8天在右后肢足掌皮下注射 HBsAg，左后肢足掌皮下注射生理盐水，肉眼观察反应；第 lO天剪下注射部足掌送病理切片检查。 2 结果 2．1 PSTF对小白鼠免疫功能的影响 2．1．1 白细胞计数、分类和脂酶染色检查实验组小鼠经 PSTF注射后，白细胞总数，特别是淋巴细咆数，均明显高于对照组，其中又以 PSTF和乙肝疫苗联用增多最明显(表 1)。脂酶染色证明 75 属 T一惮淋巴细胞 25 属 Thy一样淋巴细胞。衰 1 小■经 PSTF注射后外周血白细胞 2．1．2 啊腺和脾脏重量及指数实验组 2．2 白细胞粘附抑制试验平均胸腺重量和指数均明显高于对照组 2．2．1 体外转移 PSTF特异免疰活性 (表 2)，而脾脏重量和指数则与对照组无正常人外周血白细胞经 32次实验观察，实明显差异；提示增多的淋巴细胞可能是来验组非粘附白细胞指数远大于有意义的自胸腺的淋巴细胞。脂酶染色进一步证明 30；小鼠腹腔巨噬细胞和脾细胞混合悬液，属 T一样淋巴细胞占 75％，属 Thy一样淋经 16次实验，非粘附白细胞指数亦明显高 2 巴细咆占25 ，说明增多的淋巴细咆主要于 30(表 3)。属 T淋巴细胞。维普资讯 http://www.cqvip.com 曙等乙肝眙盎特异辖辑园子删特异缸痉话性观察裹 2 小置经 Ps_rF注射后晴臆重量和指数 2．2．2 体内转移 PSTF特异免疫活性实验 36次，观察组平均非粘附白细咆数为 99．6，对照组为 27．4，非粘附白细胞指数为 263．5，亦显著高于有意义的 3O。 2．3 白细胞秽动抑制试验 2．3．1 体外转移 PSTF特异免疫活性正常人外周血白细咆经琼脂糖平板法或毛细管法观察白细咆移动抑制指数．均小于有意义的 0．8，特别是毛细管法更为明显 (表 4)。裹 4 正常人白鲴胞经 PSTF体卦转营特异免痤活性后白细胞营动抑制指数 2．3．2 体内转移 PSTF特异免疫活性豚鼠或小鼠经 PSTF注射获得特异免疫活性后，平板法再遇 HBsAg，可见白细胞移动抑制明显．指数明显小于有意义的 0．8 (表 5)。衰 5 豚■和小●经体内转营 PSTF特异免疫活性白鲴胞粤动抑制指数 2．4 特异淋巴细胞转化试验小鼠经 PSTF注射转移特异免疫活性后，处死取出脾畦制成悬液．调整细咆数为 1×10 ／m1．经加 HBsAg37℃孵育 5天后，实验组淋巴细咆转化刺激指数明显高于对照组(表 6)。说明 PSTF对 HBV具有特异免疫活性，淋巴结构转化属抗原特异性维普资讯 http://www.cqvip.com 囊山医学院学报第 15卷 2．5 小鼠足掌注射试验小鼠经 PSTF注射获得特异免疫活性，在足掌皮下注射 HBsAg后 4小时，注身中侧肢体，特别膝关节以下即示明显水肿、充血，最甚者失去正常运动，而对照组则不明显；剪下注射部足掌作病理切片检查，除见局部明显充血、水肿、遢变外，特别可见大量单核细胞、少数多核细胞浸润，同样对照组不甚明显(图 1，2)。 3 讨论在我国自胎盘转移因子制备获得成功后，为探讨乙型肝炎免疫治疗，特别是寻找抗乙肝特异转移因子，我们首以 HBVM— Ag阴性、HBVM--Ab阳性胎盘制备抗乙肝胎盘特异转移因子，结果亦获成功，临床圈 1 对照组足掌注射部白细胞j蔓润不明显(HE染色 × l00) 试治急慢性乙型肝炎、肝硬化亦获较好效果[ 】。胎盘内含血丰富，特别近年实验观察亦已证明胎盘内舍体细胞亦具免疫活性[1 ，因而胎盘提取物免疫活性值得深入研究。从本文实验观察看，PSTF确可使小鼠外周血 T淋巴细胞明显增高，影响小鼠免疫功能。此点不仅恰与提取自人白细胞转移因子免疫活性相符，而且与临床治疗的免疫反应亦相符。急、慢性乙型肝炎经试用 PSTF治疗后，原低于正常的 E花结形成率(活性 E花结和总 E花结 )、淋巴细咆转化率，以及 T 淋巴细胞亚群中 CD 、 c 、和 c ／CD。比值，均明显上升，达到正常或接近正常，CDe则明显下降[1 “]。图 2 实验组足掌注射部明显单桉细胞伴有多l圭细胞浸稳(HE染色 x100) 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 2期张光曙等．抗乙肝眙盘特异转访圈子的特异堑瘦恬性观察为探讨 PSTF的特异免疫活性．特别试用正常人外周血白细咆、小鼠腹腔巨噬细咆和脾细咆悬液．体外转移 PSTF特异免疫活性；或小鼠先经 PSTF注射，体内转移特异免疫活性；然后作自细胞粘附抑制试验，结果非粘附自细咆指数均远大于有意义的 3O。同样，用正常人外周血自细胞体外转移 PSTF特异免疫活性，或豚鼠和小鼠注射 PSTF．体内转移特异免疫括性，再取其腹腔巨噬细咆和脾细咆作自细咆移动抑制试验，结果自细咆移动抑制指数均小于有意义的 0．8。两种试验均证明PSTF对 HBV 具有特异免疫活性。此外．小鼠经 PSTF注射体内转移特异免疫活性后，取脾脏细胞与HBsAg共育可见淋巴细胞转化率明显增加，刺激指数明显高于对照组，同样证明 PSTF对 HBV具有特异免疫活性。再者，小鼠足掌注射试验被认为是检测特异免疫活性的较好方法。本文观察小鼠经 PSTF注射获得特异免疫活性后，足掌皮下注射 HBsAg，肉眼检查可见注射侧肢体明显水肿、充血，甚至不能正常运动；注射足掌局部病理切片检查亦可见局部水肿、充血和退变，特别单核细咆浸润，间有少数多核细咆存在，而对照组则变化不明显提示 PSTF对 HBV具有特异免疫活性。综合本文实验观察．证明 PSTF不仅具有非特异性免疫活性，特别对 HBV 尚具有特异性免疫活性，而且这种特异性免疫活性可由阳性供体，通过体外或体内转移给阴性受体，改善病体免疫功能。参考文献 1 藿保来主编转移因干爱 DLE 时研览与临 l珠应用北京，学苑出扳社 l999．4～ l70 2 刘月新．王勋楚一鹱荒芳一等一竹新的免疫调节制—— 胎盘因干的制奋与研究．中国克疽学志， l985 l(5)：51 3 马布仁，幸素华，谢秩勋，等胎盘肚克疫活性的实验研究．辉放军医学书志，l988．13(6)：335 4 立蔓，扬道理，卉法莲，等胎盘免疫调节肚的研制，免疫学快报，l987，3：34 5 Huo Baolait W ang Ruzhaag，Zou Zhao~ea—Re search and applkation of transIer factor aad DLE．Bei一 )1ng{Xueyuaa Press—l989，l 65～ 170 6 诈光曙，幸学志，王祥旦，等．胎盘特异转移因干涪怠慢性乙型肝更 ZOO例临庸挥讨．辉放军医学杂志， l990 lj<1) 21 7 张光曙胎盘特异转廿因干治疗慢性乙型肝更 400侧．新药与临庸 1990 9{4) 】93 8 Zha“ Gua~gshut Hou Xianr~ngt Zhao Huichuan et a1．EvalBat[on of the effects of acute heD_ atitis B tr蜘 ted wnh specific placenta ransfer [actor． 1a：Edited by Takehiko Tujesawa．n a1．Recent ad— vatl~s ia tras~er ac／or and DLE．Tokyo：M 删 en Co， l991 217 9 蔫治华，高骥干．棒惠玲，等．HBsAg特异免疫 RNA砷乙型肝赛病^ 白细胞的过鲑免疫现章．中华冉斟志，1979．19(3)：288 】0 棒方岑主编．医疗护理挂术操作常规．北京：战士出版社，l980．1488~ l490 1】廊训义主编．免疫学扣免疫学辁验北京：人民卫生出版社，1989．177 12 刘伯宁．进一步开展胎盘学研宅．中华妇产斟志，1989．26(6)：Z2 19 张光曙．孙思才，韩纪举特异胎盘肚对乙璧肝更病制 E花蛄和淋转影响的观察．见藿保采王煽．转牡目干的研究进展．北京：中国抖学技末出扳社、 l990 284 14 张光曙．孙思才，韩纪举．乙型肝点在特异胎盘转牡因干治疗中 T淋巴细胞亚牟的变化．见霍保来主编．转牡目干酌研览进展，北覃：中国抖学技术出版社．1990．278 (收稿日蚜 1993—08 31) (校对刘东) 维普资讯 http://www.cqvip.com 第15卷第2期泰山医学院学报 Vol 15 No．2 1994年 J0URNAL 0F TA1SHAN M EDICAL COLLEGE 1994年三一 STUDY 0N THE SPECIFIC IM M UNE ACTIVITY 0F ANTI—HEPATITIS B PLACENTA SPECIFIC TRANSFER FACT0R Zhang Guangshu ， Sun Sicai‘， Han Jiju ， Zhao Huichuan‘ GuoQingfu ． L Jingyi (1 The Eighty—Eighth Hospital of P．L．A 2 The M ilitary Medicine Academy) ABSTRACT In this paper we proved that the anti—hepatitis B placenta specific transfer factor(PSTF)extracted from HBVM —Ag negative and HBVM — Ab positive placenta could raise thymus weight，thymus index，and peripheral W BC of the mice as— pecialIy the lymphocyte．W e alsa proved that the increased Iymphocytes belonged main— Iy (75．0 )tO T— appearance Iymphocytes and partly (25．0 )tO Thy—appearance Iymphocytes by an／te stain examination．Besides，by transferring the PSTF specific ira- mune activity in vitro with the peripheral blood W BC of the normal donors， macrophages washed Out from the abdominal cavity of the mice and the spleen cells and that in vivo with the macrophages and spleen cells of the mice for 5 succesive days．It could be concluded that PSTF has not only specific immune activity to HBV．but also the specific immune activity that could be transfered from the positive donors to the neg— ative recipients． KEY W ORDS anti—hepatitis B placenta specific transfer factor；T—lymphocyte} specific immune activity }e 小儿颅内肿瘤 296例临床分析 - 郑姬朱宋 (1 泰山医学院附属医院神经外科 2 山东省立医院神经外科) 内容提要报告小儿颅内肿瘤 296例，均经病理证实，临床特点有：(1)发病．、进展快、死亡率高；(2)易误诊；(3)90 有颅内压增高征。为提高儿科医生和神经外科医生对脑瘤的认识，多用 B超、CT检查有助早期诊断，以减少误诊。对恶性肿瘤术后常规进行化疗和放疗，方可提高存活率。囊性颅咽管瘤采用腔内放置同位素磷可延缓复发。关键词塞川、儿；监 t 髫维普资讯 http://www.cqvip.com

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