重要仪器--显微镜

null一、显微镜一、显微镜光学显微镜 荧光显微镜 激光共聚焦显微镜 扫描电子显微镜 透射电子显微镜（一）一般光学显微镜（一）一般光学显微镜1.镜下结构称光镜（light microscope LM) 结构； 2.放大倍数1000倍； 3.分辨率0.2μm； 4.组织制成薄片，以利光线通过。 null光学显微镜基本结构null石蜡切片术 (paraffin sectioning)石蜡切片术 (paraffin sectioning)制片过程 （1）取材（1.0cm) 固定(甲醛） 酒精脱水（低-高） 透明（二甲苯） 浸蜡包埋 切片（5－10 um） 展片； （2）脱蜡（二甲苯） 酒精（高-低） 水 苏木精-伊红染色 酒精脱水（低-高） 透明（二甲苯） 封片（树胶） null（3）染色(staining)： 是用染料使无色组织切片着色，增加对 比度， 便于镜下观察。染色方法很多，但没有一种 能使细胞全部结构同时着色。 A.常用的染色方法： null小鼠胰岛细胞苏木精-伊红（HE）染色小鼠宫颈癌肿瘤组织病理切片显微镜观察null口腔上皮细胞H.E染色B.特殊染色方法B.特殊染色方法银染：用硝酸银将神经细胞染为黑色。 醛品红染色：将弹性纤维染为紫色。 甲苯胺蓝：将肥大细胞的分泌颗粒染为紫色。 活体染色：取动物组织材料之前活体注射染料，观察巨噬细胞的吞噬情况。null神经纤维的硝酸银染色C.其他制片方法C.其他制片方法a.冰冻切片：组织液氮骤冷，恒冷箱切 片机切片(糖类、脂类、酶、核酸等）。 b.涂片：将游离的细胞直接涂于切片上。 c.铺片：将疏松结缔组织或肠系膜等撕 成薄片铺在载玻片上。 d.磨片：骨和牙等硬组织可磨为薄片。null血液涂片null骨磨片（二）体视显微镜（二）体视显微镜体式显微镜的特点： 1． 双目镜筒中的左右两光束不是平行，而是具有一定的夹角---体视角（一般为12度---15度），因此成象具有三维立体感； 2． 象是直立的，便于操作和解剖，这是由于在目镜下方的棱镜把象倒转过来的缘故； 3． 虽然放大率不如常规显微镜，但其工作距离很长 4． 焦深大，便于观察被检物体的全层。 5． 视场直径大。 null体式显微镜下跳蚤的照片（三）荧光显微镜（三）荧光显微镜荧光显微镜包括一般荧光染色和免疫荧光染色方法,荧光染色方法可以显示细胞内的各种 成份,特别是对细胞内的两种核酸(DNA或RNA)及酸性粘多糖有较强的特异性,所以荧光染色法可以作为一种良好的细胞化学方法. 免疫荧光方法是把免疫学技术和荧光染色结合起来一种方法,它具有免疫学的特异性和荧光方法的敏感性,作为一种研究方法或实验手段,广泛地应用于医学领域内各种基础理论研究和临床诊断,如组织细胞学,微生物学,寄生虫学,病理学的研究以及自身免疫病诊断中得到了广泛应用. nullHoechest33258荧光染色TUNEL染色标记上绿色荧光荧光显微镜的基本操作荧光显微镜的基本操作1．关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯； 2．根据样品标记的荧光素选择相应的滤片； 3．放好样品，找到合适的视野； 4．如需拍照，请确认照相机内已装好彩色胶卷（最好使用27定胶卷）； 5．开启自拍装置，选择手动档，通常拍摄速度在0.5---10秒内； 6．使用结束，关闭所有电源并做好使用录。 7．如需详细说明，请借阅说明书。使用荧光显微镜的注意事项 使用荧光显微镜的注意事项 （1）严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。 （2）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。 （3）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。 （4）检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。null（5）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。 （6）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。 （7）荧光亮度的判断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ：一般分为四级，即“一”—无或可见微弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明亮的荧光。“+++”—可见耀眼的荧光。 （四）扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）（四）扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM）  扫描电子显微镜于20世纪60年代问世，用来观察标本的表面结构。 图像为立体形象，反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。 目前扫描电镜的分辨力为6~10nm，人眼能够区别荧光屏上两个相距0.2mm的光点，则扫描电镜的最大有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。 扫描电子显微镜扫描电子显微镜*扫描电子显微镜技术要观察的组织不需制成切片。 **固定后的标本，在其表面喷镀金，在荧光屏上即可显示细胞或组织表面的立体结构。 如细胞表面的突起、微绒毛、纤毛等。 nullSEM下的血细胞照片SEM下的金属材料照片null临床分离葡萄球菌L型葡萄球菌L型回复后null疟疾破坏的两个红细胞SEM特点SEM特点1、放大倍率高     可从几十倍放大到几十万倍，连续可调。观察样品极为方便。 2、分辨率高     分辨率是指能分辨的两点之间的最小距离。SEM是用电子束照射试样，目前用W灯丝的SEM，分辨率已达到3nm-6nm, 场发射源SEM分辨率可达到1nm 。     仪器的分辨率指标不是日常工作能实现的。拍摄分辨率照片是用碳镀金的特殊试样，拍照时 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 一些特殊条件，如放大倍率、电子束电流、加速电压等，有时要晚上没有任何振动和干扰情况下进行多次拍照，寻找最好的图像测量分辨率。 null3、景深大     景深大的图像立体感强，对粗糙不平的断口试样观察需要大景深。一般情况下，SEM景深比TEM大10倍，比光学显微镜（OM）大100倍。 4、保真度好     试样通常不需要作任何处理即可以直接进行形貌观察，所以不会由于制样原因而产生假象。这对断口的失效分析及贵重试样的分析特别重要。 5、试样制备简单     试样可以是自然面、断口、块状、粉体、反光及透光光片，对不导电的试样只需蒸镀一层10nm左右的导电膜。     另外，现在许多SEM具有图像处理和图像分析功能。有的SEM加入附件后，能进行加热、冷却、拉伸及弯曲等动态过程的观察。 （五）透射电子显微镜 (transmission electron microscope ，TEM)（五）透射电子显微镜 (transmission electron microscope ，TEM)电子显微镜与光学显微镜的成像原理基本一样，所不同的是前者用电子束作光源，用电磁场作透镜。另外，由于电子束的穿透力很弱，因此用于电镜的标本须制成厚度约50nm左右的超薄切片。这种切片需要用超薄切片机（ultramicrotome）制作。电子显微镜的放大倍数最高可达近百万倍（比光镜高1000倍），由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成。 null在光学显微镜下无法看清小于0.2µm的细微结构，这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构，就必须选择波长更短的光源，以提高显微镜的分辨率。 目前TEM的分辨力可达0.2nm TEM的制样技术TEM的制样技术1）超薄切片     通常以锇酸和戊二醛固定样品，以环氧树脂包埋，以热膨胀或螺旋推进的方式推进样品切片（图2-13），切片厚度20~50nm，切片采用重金属盐染色，以增大反差。莱卡超薄切片机null内质网透射电镜图肿瘤组织细胞透射电镜照片被金属所染部位，荧光屏上显得暗，图象较黑，称为电子密度高；反之则称为电子密度低。null2）负染技术     负染就是用重金属盐（如磷钨酸、醋酸双氧铀）对铺展在载网上的样品进行染色；吸去染料，样品干燥后，样品凹陷处铺了一薄层重金属盐，而凸的出地方则没有染料沉积，从而出现负染效果（图2-15），分辨力可达1.5nm左右。null被检结构和重金属盐相结合的称正染色；被检结构本身不与重金属盐结合，而其周围染上重金属盐的称负染色。一般染色都是正染色。 细菌核蛋白体null3）冰冻蚀刻     冰冻蚀刻（freeze-etching）亦称冰冻断裂（freeze-fracture）。标本置于-100˚C的干冰或-196˚C的液氮中，进行冰冻。然后用冷刀骤然将标本断开，升温后，冰在真空条件下迅即升华，暴露出断面结构，称为蚀刻（etching）。蚀刻后，向断面以45度角喷涂一层蒸汽铂，再以90度角喷涂一层碳，加强反差和强度。然后用次氯酸钠溶液消化样品，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜（replica）。复膜显示出了标本蚀刻面的形态，在电镜下得到的影像即代表标本中细胞断裂面处的结构。 null冰冻蚀刻电镜照片二、超净工作台二、超净工作台null超净台的优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，预备时间短，开机10分钟以上即可操作，基本上可随时使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。超净台由三相电机作鼓风动力，功率145～260W左右，将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为24～30m/min，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。 三、生物安全柜三、生物安全柜生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。 四、二氧化碳培养箱四、二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上加以改进，主要是能加入CO2，以满足培养微生物所需的环境。主要用于组织培养和一些特殊微生物的培养。 五、超纯水制备系统五、超纯水制备系统六、显微操作系统六、显微操作系统活细胞显微操作技术经历了前所未有的高速发展，随着显微镜制造技术、显微衬映技术和显微操作器的进步，实现了对活细胞进行显微操作试验。高精密的光学显微镜和微量操作工具使得显微操作技术达到分子大小的水平。 性能及用途：性能及用途：该系统由计算机控制，摄录像系统、自动定位装置、持针器、显微注射器、 高倍倒置显微镜、Y照相机和彩色CCD摄像机、彩色打印机组成。用于细胞 的三维精确定位、移位以及精确定量抽取和注射细胞内基因。 可广泛用于农业、工业、各级医院和科研单位，进行良种培育、特种动物 繁殖、制药、特殊生物制品、第二、三、四代试管婴儿、极体研究、核移 植、基因去除和植入、植入微电极和模片钳等各种生理试验。 七、拉针器七、拉针器八、断针器，磨针器八、断针器，磨针器九、电子天平九、电子天平校准 去皮 称量范围 称量精度 0.0001（最后1位估读）十、鼓风干燥箱十、鼓风干燥箱可调温度：室温-250度适用于工矿业企业实验室、医药卫生、科研单位作干燥、烘焙、熔蜡、灭菌、固化使用 十一、PCR仪十一、PCR仪PCR仪适用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域以聚合酶链式反应（Picymerase Chain Reaction , PCR）为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。 nullnull一、使用注意事项 1 、离心管一定要平衡好，放入离心陀时也要注意位置平衡。绝对不要超过离心机或离心陀的最高限转速。 2、一定要在达到预设转速后，才能离开离心机；若有任何异状，要立刻停机。 3、通常听声音即可得知离心状况是否正常，也可注意离心机的震动情形。 十二、离心机离心管平衡时需注意：离心管平衡时需注意：◆ 注意离心管只装七成满，虽然加有盖子，但也可能因离心力太强而外泄。 ◆ 大部分离心管都附有盖子，注意离心管的盖子也要一起平衡。 ◆ 离心管通常都会放在碎冰上，注意取出平衡时，要把碎冰的液体擦拭干净。 ◆ 落单的离心管要用另一只装有清水的离心管平衡。 ◆ 若离心陀的盖子没旋紧，离心时会掉出来，造成很大的伤害！ 十三、电穿孔仪十三、电穿孔仪用途： 1.将DNA、RNA和蛋白质等转化进入细菌或者酵母中 2.将外源基因转染入哺乳动物细胞中。十四、电融合仪十四、电融合仪细胞先在交流电场中聚集，然后通过直流脉冲融合。 结合融合特定的缓冲液体系，可完成高效的细胞电融合。 十五、旋转蒸发器十五、旋转蒸发器原理：负压条件下,蒸发瓶在恒温水浴锅中旋转，溶液在瓶壁上形成薄膜，加大蒸发面积。低温下高效蒸发，冷凝回收、浓缩分离物料。十六、高压灭菌锅十六、高压灭菌锅null不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。 注意添注去离子水。 null手提式高压灭菌锅十七、超速离心机十七、超速离心机离心机转速在20 000r/min以上的称为超速离心。离心技术，特别是超速离心技术是分子生物学、生物化学研究和工业生产中不可缺少的手段。  使用超速离心机的注意事项：使用超速离心机的注意事项：1.玻璃离心管绝对不能在高、超速离心机上使用。 2.对称平衡 。（离心力大，减少转子的使用寿命） 如离心管盖子密封性差液体就不能加满（针对高速离心且使用角度头），以防外溢。 3、超速离心时，液体一定要加满离心管，应超离时需抽真空，只有加满才能避免离心管变形。 4.使用角度头时别忘盖转头盖，如未盖，离心腔内会产生很大的涡流阻力和摩擦升温，这等于给离心机的电机和制冷机增加了额外负担，影响离心机的使用寿命。