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质粒小抽常见的几个小问题.pdf

质粒小抽常见的几个小问题.pdf

上传者: qindaming0322 2011-03-02 评分1 评论0 下载8 收藏10 阅读量365 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《质粒小抽常见的几个小问题pdf》,可适用于农业领域,主题内容包含质粒小抽常见的几个小问题、提不到质粒或质粒产量很低:b检查溶液II是否有沉淀。溶液II在室温较低时特别是在冬天容易产生沉淀。如果有沉淀产生一定要水浴符等。

质粒小抽常见的几个小问题、提不到质粒或质粒产量很低:b检查溶液II是否有沉淀。溶液II在室温较低时特别是在冬天容易产生沉淀。如果有沉淀产生一定要水浴(如度水浴)加热溶解并混匀后才能使用。c检查溶液IV中是否已经按照说明书的要求加入适量的乙醇并检查加入的乙醇质量。我们发现有些有些厂家生产的所谓分析纯无水乙醇(可能是假冒的)轻轻闻一下有乙酸的酸味明显是劣质乙醇。如果使用发酸的劣质乙醇会导致质粒产量下降甚至没有质粒。d检查抗生素是否失效如果抗生素失效或浓度太低可能会导致杂菌大量扩增从而得不到质粒或得到很少质粒。e大肠杆菌生长时间过长或过短也会导致抽提不到质粒或质粒产量很低。一般对数期的细菌最适合质粒抽提。DHalphaJM等菌一般以度摇过夜约小时比较合适而TG等生长较为快速的菌不宜摇过夜。细菌量以加入裂解液后能裂解成透明容易为上限适当多一些的菌量可以得到更多的质粒但是以质粒纯化柱的容量微克为限。f检查菌种本身是否有问题。一方面可以用抽提过的好的菌种作一个正对照用我们的试剂盒抽提看能否得到预期量的质粒。另一方面可以用其它方法如常规的碱裂解方法抽提相同的菌看菌本身及生长条件是否有问题。g溶液I加入后一定要充分悬浮细菌要保证看不到结块的菌否则细菌不易被裂解质粒产量会显著下降。h洗脱液最好使用碧云天提供的洗脱液不要使用重蒸水或MiliQ水洗脱如用水洗脱一定要保证水的pH值在之间。如果洗脱液使用时间较长并且盖子经热线电话:Email:mastershinegeneorgcn网址:wwwshinegeneorgcn常不盖紧由于空气中的二氧化碳的作用会使洗脱液酸化使pH值低于。如发现洗脱液pH值低于请不要再使用。可以改用pH的TE或pH值在之间的水。i在加入溶液IV(即洗涤液)后需离心秒倒弃收集管内液体后需再离心分钟。千万不能把两次离心合并仅离心一次否则会因为洗涤液的污染而导致产量下降或抽不到质粒。j一定要严格按照说明书操作特别要注意说明书中的注意事项。k如果排除了上述可能性还是有问题请和碧云天联系。我们会免费给您更换试剂以排除诸如加错乙醇溶液被其它试剂污染等可能出现的问题。有RNA污染:质粒抽提试剂盒有时确实会有少量RNA污染但并不影响后续的常规操就象常规的碱裂解方法抽提质粒也会有RNA污染一样。如果后续要作酶切分析且预期的酶切片断在bp左右请将抽提好的质粒再用RNaseA消化以去除RNA的干扰。热线电话:Email:mastershinegeneorgcn网址:wwwshinegeneorgcn

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