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[gbk] 生物技术nullnull1、获取目的基因的方法①直接分离法（鸟枪法)供体细胞中DNA限制性酶运载体DNA片段不同受体细胞优点:操作简便缺点:工作量大，有盲目性，目的基因含有不表达的内含子 ②人工合成法Ⅰ反转录法:mRNA逆转录单链 DNA合成双链 DNA优点:专一性强，目的基因中不含内含子缺点:操作过程麻烦。mRNA生存时间短，技术要求高例如:人的胰岛素和血红蛋白的结构基因的获得Ⅱ由氨基酸序列合成据推测出的核苷酸序列，通过化学方法合成优点:专一性最强，目的基因不含内含子，可合成自然界不存在的基因缺点:目前，复杂的尚...

nullnull1、获取目的基因的方法①直接分离法（鸟枪法)供体细胞中DNA限制性酶运载体DNA片段不同受体细胞优点:操作简便缺点:工作量大，有盲目性，目的基因含有不表达的内含子 ②人工合成法Ⅰ反转录法:mRNA逆转录单链 DNA合成双链 DNA优点:专一性强，目的基因中不含内含子缺点:操作过程麻烦。mRNA生存时间短，技术要求高例如:人的胰岛素和血红蛋白的结构基因的获得Ⅱ由氨基酸序列合成据推测出的核苷酸序列，通过化学方法合成优点:专一性最强，目的基因不含内含子，可合成自然界不存在的基因缺点:目前，复杂的尚不知核苷酸序列的基因不能合成基因工程2、目的基因与运载体结合2、目的基因与运载体结合同一种限制性内切酶切割质粒和目的基因，加入DNA连接酶，形成重组DNA分子 3、目的基因导入受体细胞主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的方法花粉管道法4、目的基因的检测和表达4、目的基因的检测和表达检测根据受体细胞是否具有某些标记基因判断目的基因是否导入表达受体细胞表现出特定的性状 null质粒上带有Lacz基因，表达产物能使X-gal变蓝。如果基因中间插入目的基因，则Lacz基因不表达，表现白色菌落。null基因操作基本技术： DNA序列测定Walter Gilbert 和Frederick Sanger 因发明DNA测序技术，获得1980年诺贝尔化学奖。nullnull代谢产物生物工程产品六大营养营养协调Ph值适宜成本低杀死培养基和发酵设备所有杂菌（其他微生物）的胞体、芽孢和孢子。避免种间竞争。如青霉素将培养到对数期的菌体分开，分头进行培养，缩短生产周期防止污染随时取样检测培养液中细菌数目、产物浓度添加培养基、控制温度、pH、溶氧量、通气量、转速蒸馏、萃取、离子交换过滤、沉淀null 分辨率：区分开两个质点间的最小距离，受到光衍射性质的限制。光源波长白光527nm介质折射率，空气=1；水〉1；油〉1.5放大倍数：物镜x目镜进入物镜光锥顶角的一半，衡量透镜的聚光能力镜口率N.A1.光学显微镜用光线照明，最小分辨距离是0.2um 。null相差显微镜：用于观察活细胞、未染色组织切片或缺少反差的染色标本。荧光显微镜：利用较短波长的光使样品受到激发，产生较长波长的荧光，可用来观察和分辨样品中产生荧光物质的成分和位置。（叶绿素）紫外线显微镜：以紫外线为光源，分辨率提高一倍。制片技术：装片、切片、涂片暗视野显微镜：只允许被标本反射或衍射的光线进入物镜，分辨率提高40倍，可见核、线粒体。微分干涉差显微镜：显示结构的三维立体投影影像。null2.电子显微镜（透射、扫描、扫描隧道）用电子束取代光束，最小分辨率0.1nm 制片技术：超薄切片（50 nm左右）固定脱水包埋切片 电子染色 null冷冻断裂复型（冰冻蚀刻）提供样品表面信息，适于观察跨膜蛋白；显示活细胞中某些大分子复合物冷冻断裂的洋葱根细胞复型 NE：核被膜 NP：核孔 G：高尔基复合体 V：胞质液泡 CW：细胞壁喷镀拓片透射电镜观察冰升华null细胞实验操作技术 1．细胞培养如果提供适宜的条件，大多数动物和植物细胞都能在培养瓶中成活和繁殖。null 原代培养（primary culture）：从动物机体取出的进行培养的细胞群。原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长，需要更换培养基。将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养（Passage）。细胞株（cell strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，能够繁殖50代左右。细胞系（cell line）：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，在培养条件下可无限繁殖克隆（clone）：亦称无性繁殖系或简称无性系。对细胞来说，克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。实验室中常用的几种细胞系实验室中常用的几种细胞系 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 植物组织培养植物组织培养再分化脱分化愈伤组织外植体试管苗植株无菌环境下操作细胞分裂素、生长素细胞分裂素、生长素固体蔗糖细胞分裂素/生长素浓度比值高，芽易发生细胞分裂素/生长素浓度比值低，根易发生悬浮细胞培养、原生质体培养、单倍体培养动物细胞的培养过程动物细胞的培养过程幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞是其他动物细胞工程技术的基础无菌条件下液体、葡萄糖动物细胞培养技术2．细胞融合2．细胞融合通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。同核融合细胞：相同基因型的细胞融合而成。异核融合细胞：不同基因型的细胞融合而成。自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。null去壁去壁纤维素酶果胶酶原生质体植物细胞原生质体融合离心、振动、电刺激、聚乙二醇再生细胞壁杂种细胞去分化愈伤组织杂种植株激素筛选等量激素再分化植物体细胞杂交单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程实验：1975年米尔斯坦、柯勒null3．细胞拆合、核移植、胚胎培养、胚胎移植、胚胎分割移植、体外受精

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