无菌制剂生产环境甲醛熏蒸灭菌的验证

天津药学 Tianjin Pharmacy 2006年8月 第18卷第4期 无菌制剂生产环境甲醛熏蒸灭菌的验证 徐 影，何立波，刘小军 (深圳九新药业有限公司，深圳 518049) 摘 要 目的：探讨无菌制剂生产环境甲醛熏蒸灭菌的验证方法。方法：对一定量甲醛气体在不同灭菌时间的环境 取样进行无菌测定，且在不同时间排风后测定甲醛浓度以确定甲醛熏蒸最佳灭菌时间及排风时间。结果：最终确定了甲 醛熏蒸灭菌在≥12 h时，灭菌效果最好；排风≥5h对人身健康及产品安全最佳。结论：上述甲醛熏蒸时间及排风时间仅适 用于本企业粉针车间，因各制药企业空调等设备系统不尽相同，可以采用本文提示的方法进行验证后确定具体时间。 关键词 无菌制剂，甲醛熏蒸，灭菌方法 Validation method of formaldehyde sunoca~ng sterilizationin sterile formulation production envirommmt ， XuYing，HeLibo，IjuⅪ un (Shenzhen Gosun Pharmaceutical Ltd Co，Shenzhen 518049) ABSTRACTObject：Toinvestigatethe v~iclafionmethod offormaldehyde suffocating s~rilizafionin sterileformulation production environ— merit．Methods：The certain amount of formaldehyde was used for sterilization．The sterile determining was conducted at different times and the concentrationofformaldehyde at different exhaustingtimeswas also determinedto confmnthefumigationtime andthe exh~ tmgtime． Results：111e effective fumigation time Was longer than 12 h．It Was good and safe for people health and products quanty when the exhaust time Was longer than 5 h．Conclusion：111e data in the article Was only app~cable to Olff factory．111e air—condition system of each com— pany is differem，s0 the validation method established can also be adopted ，but the time of effective fumigation and exhaustion should be ful~her confirmed． KEY WORDS aseptic preparation production，formaldehyde suffocating，s~filization 无菌洁净室既要控制空气中一般的悬浮状态的气 溶胶粒子，还要控制活微生物数，需提供 “无菌”环境 (无菌室)⋯，应定期进行室内消毒灭菌操作。本文介 绍寻求甲醛最佳熏蒸消毒方式，以符合国家《药品生产 质量管理 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 》(GMP)(1998)对洁净室中空气浮游菌 及表面细菌的规定。 1 验证目的和范围 验证 目的为甲醛灭菌的熏蒸时间、排风时间及效 果等。验证范围为无菌制剂万级及十万级净化区域。 2 验证指标 保证无菌室用甲醛灭菌方法提供的空气环境，始 终符合国家《药品生产质量管理规范》(GMP)(1998)对 洁净室中空气浮游菌及表面细菌的规定，及《医药工业 洁净室(区)悬浮粒子浮游菌和沉降菌的测试方法》中 规定的微生物检验指标。 3 验证文件及生产文件的准备 要求由车间和设备部准备文件，验证 培训 焊锡培训资料ppt免费下载焊接培训教程 ppt 下载特设培训下载班长管理培训下载培训时间表下载 部逐一 检查确认。如有缺项，应记录说明。 文件准备及检查结果(略)。 4 仪器的校验 确认验证仪器均已经过校验，符合使用要求。 ★ 收稿 日期：2OO5—12—23 5 培训文件 验证操作人员需进行岗位操作法技术培训，培训 记录应予以审查，并附在验证记录后面。岗位操作法 (SOP)培训由车间和质管部(QC)组织进行，验证培训 部门审查监督培训情况。 6 验证实施过程——甲醛气体灭菌验证操作 6．1 确认在规定的甲醛浓度下达到熏蒸效果的最佳 时间 ， 当相对湿度>65％、温度为 24 40℃时，甲醛气 体的灭菌效果最好(作者实际经验所得)，但若采用过 多的甲醛，会因聚合而析出白色粉末附在建筑物或设 备表面。 6．1．1 甲醛的灭菌方法 6．1．1．1 灭菌前的准备 灭菌前先用丝绸浸注射用 水(或纯化水)擦洗房间和设备表面，然后用5％麝香 草酚溶液喷洒或擦洗，静置 1 h后，再用丝绸浸注射用 水(或纯化水)擦洗 1次。 6．1．1．2 药液与用量 甲醛溶液的用量按 10 na／m 准备 36％甲醛溶液(甲醛密度为 1．1 g／IIl1)，按 2—3 g／ITl3准备高锰酸钾l2]。根据需灭菌的体积(包括房间 及风管体积)，计算甲醛溶液用量。 维普资讯 http://www.cqvip.com 天津药学 Ti in Pharmacy 2006年8月 第 18卷第4期 81 6．1．1．3 取样装置与取样点的设置 在准备甲醛熏 蒸灭菌的房间取样点位置放入验证用装置，如不锈钢 支架放置装菌片的塑料管一个；每个塑料管装有枯草 黑色变种芽胞(ATcc9372)菌片1张，每张菌片上芽胞 数量为5×105～5×106之间。取样点的数量应根据万 级区的房间面积确定(≤9 rn2放置2个取样点，>9 rn2 或≤14 rn2的房间放置 3个取样点。>14 rn2或≤19 rn2放置4个取样点，>19 rn2每增加 5 rn2则应增加 1 个取样点)。 以分装间(万级区)为例，取样点设置为分装机罩 内、出瓶转盘、分装间回风 口、分装间回风管、分装机 底部。 6．1．1．4 熏蒸操作与灭菌 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 先将甲醛溶液置入 甲醛气体发生器(或加热盘、烧杯)中，并加入加湿用 水，必要时还可加入高锰酸钾(2～3 g／m3)，然后加热 (甲醛发生器可用蒸汽加热，加热盘或烧杯可放入热水 用以加热)使其蒸发成气体。 熏蒸灭菌流程为，停止空调器运转一启动甲醛气 体发生器或在加热盘中加热甲醛溶液，使甲醛气体扩 散(约 30 min)一启动空调器使 甲醛气体循环(约 2O min)后，停止空调器运转一房间甲醛气体熏蒸灭菌，熏 蒸时间分别为4、6、8、1O和 12 h一房间排风 24 h，用新 鲜空气换置(约 2 h)一 恢复正常运行(具体排风时间 根据验证而定)。 6．1．1．5 菌片培养 灭菌完毕，将塑料管内的菌片采 用无菌操作接种于培养液(枯草芽胞杆菌培养液)内于 37℃培养 48 h，并设置 1支未经消毒的菌片作阳性对 照。结果判断：经 48 h后，若培养液变浑浊，颜色由红 变黄为阳性；培养液澄清，颜色不变为阴性。继续培养 至第7 d，若仍无菌生长则判为灭菌合格。 6．1．2 结果 规定的甲醛浓度下熏蒸灭菌效果最佳 时间，见表 1。 表 1 不同时间的甲醛熏蒸灭菌效果比较 表 1显示，不同时间甲醛熏蒸后取样均经48 h培养，其 中4和6 h，均为阳性，8、lO和 12 h均为阴性，并继续培 养 7 d，结果表明甲醛熏蒸时间≥12 h熏蒸灭菌效果最 好。 6．2 通过对甲醛熏蒸灭菌后室内环境中甲醛残留量 的测试 确定排风时间 用甲醛气体熏蒸灭菌后，需用全新空气换气，由于 甲醛的环境 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 只有(1～2)×10～，要使环境中的 残留甲醛浓度尽可能低至不致使人嗅出特殊气味(< 0．55×10 )，且对人眼无刺激(<1×10 )，然后根据 测定的室内环境中甲醛残留量的结果，正确设定排风 时间，以保证在达到作业环境中无菌的前提下，对人身 健康及产品安全不致产生不良影响。 依照“6．1．1．4”项下方法对需灭菌的环境进行熏 蒸灭菌后，经排风2、3、4、5和 6 h后分别取样，测定甲 醛残留量，以确定排风时间。 6．2．1 取样方法及取样量 在各取样场所(分装间、 洗瓶间、轧盖间)，用约 3O L的塑料袋收集室内空气， 将袋内空气用吸收瓶、泵、气流计等组成的装置捕集至 瓶内吸收液中(样本数应≥3)。 6．2．2 测定甲醛浓度的方法【3 6．2．2．1 供试液的配制 取 0．5％硼酸溶液 20 lnl作 为吸收液，用溶液吸收法，以 1 L／min的速度分别使各 取样场所的空气通过 10 min，然后将吸收液移至 25 lnl 的量瓶中，加水定容，即得。 6．2．2．2 试验操作 ①取供试液2 lnl置具塞试管中， 加 5 mol／L NaOH 2 ml及 AI-IMT溶液 2 lnl，轻摇混匀 后，室温放置 20 min。然后加 0．1 mol／L K104溶液 2 lnl，摇 2～5 min至无气流生成为止；同时用水2 lnl同法 制成对照液，在波长 550 nln处测最大吸光度。②分别 取甲醛标准液 0、O．5、1．0、1．5和 2．0 ml，加水使成 2 lnI，再依“6．2．2．2”项下方法操作，测定吸光度，制备甲 醛浓度( ln1)与吸光度的关系检量线。 环境中的甲醛浓度(1OI6)可由下式求出： PON~N(IO_6)=a x丽22．4 x 25 x 式中a一 供试液中甲醛浓度 一 采样气体量(L) t一 采样时平均温度(℃) 22．4— 1 mol气体在 0、1个大气压(101．325 kPa)下的体积(L) 3O．O3～ 甲醛相对分子质量 25一 供试液全量(In1) 273一 标准状态下的绝对温度(K) 6．2．2．3 试液准备 (1)甲醛对照液 精密量取甲醛 维普资讯 http://www.cqvip.com 82 天津药学 Ti in Pharmacy 2O06年8月 第 18卷第4期 溶液(36％)1 ml，准确加水至 200 ml，作为甲醛稀释 液。精密量取 10 ml置碘瓶内，精确加入0．1 mol／L碘 液50 ml，加 1 mol／L氢氧化锂溶液 20 ml。避光放置 15 min后，加 10％硫酸 15 m1，用 0．1 mol／L硫代硫酸钠液 滴定。另用水 10 ml进行空白试验。 甲醛 稀 释 液 中 的 甲 醛 浓 度 (ne4m1) = ( 一 b)×1．501 3 ————而—一 一 甲醛稀释液消耗0．1 mol／L硫代硫酸钠液量 (m1) 一 空白试验消耗0．1 mol／L硫代硫酸钠液量 (m1) 1．5013— 1 ml碘液 (0．1 mol／L)相对 甲醛的量 (ITlg) 10一 甲醛稀释液取样量(m1) 精密量取上述甲醛稀释液，加水准确稀释 1 000倍作为 甲醛对照液。 (2)A删 rI’溶液 取 4一氨基 一3一肼 一5一巯基 一 1，2，4一三唑0．5 g，加 0．2 mol／L盐酸 100 ml溶解，避 光保存。 6．2．3 测试结果 灭菌环境中甲醛残留量测试结果， 见表 2。 表2 灭菌环境中甲醛残留量测试结果 表2显示，排风 5 h以上对人身健康及产品安全为最 佳。 6．3 依据上述结果即在确定甲醛气体发生量时熏蒸 12 h排风5 h后，依据《医药工业洁净室悬浮粒子浮游 菌和沉降菌的测试方法》提示的测定方法和标准进行 环境监测，监测结果为局部百级区及万级区沉降菌和 浮游菌均为0，符合规定；十万级区包括洗瓶间、轧盖 间、洗消间、洗瓶更衣、轧盖更衣、洗消气闸和递料间的 沉降菌(个)分别为 2、1、2、5,3、2和4，浮游菌(CF~d／m) 分别为40、20、60、40、80、20和40，均符合规定。 7 结论 7．1 验证培训部已审阅上述所有试验结果及评价分 析意见，粉针无菌洁净室甲醛熏蒸工艺合理，能达到预 期灭菌效果。如果无菌洁净室外护卫结构及空调系统 经过改造，需进行再验证。 7．2 上述甲醛熏蒸时间及排风时间仅适用于本企业 粉针车间，因各制药企业空调等设备系统不尽相同，可 以采用本文提示的方法进行验证后确定具体时间。 参考文献 1 叶瑛瑛 ．药品生产质量管理规范选编(二)．北京：中国医药科技出版 社。1997．36 2 中国化工制药工业协会，中国医药工业公司．药品生产质量管理规范 实施指南．2001版 ．北京：化学工业出版社，2001．60 3 国家食品药品监督管理局．药品生产验证指南．2003版 ．北京：化学 工业出版社，2003．78 4 温玉麟 ．毒物化学物质毒性数据 ．天津：天津科学技术出版社，1989． '14 (上接 64页) 20 l6 于燕莉，李长生．刺五加注射液静脉滴注致过敏反应 3例 ．人民军 2l 医药学专刊，14(8)：58 l7 许临萍．刺五加针致变态反应 1例 ．现代中西医杂志，2005，14(13)： 22 1765 18 王义德，李海峰，陈枢侠．刺五加注射液致过敏性休克视盲 1例．中 23 国医院药学杂志，1998，18(12)：575 l9 王水英，谢晓英．刺五加注射液致眼结膜充血 1例 ．中草药，2005，24 24 (8)：686 武桂梅．静滴刺五加致育龄妇女泌乳 2例报道．中成药，1998，2：48 吕显梅，张丽华，苏文丰．刺五加注射液致过敏反应 l例．航空航天 医药，2003，14(1)：6 王翠梅，秦保萍，刘慧萍．刺五加注射液致过敏反应 2例．山西医药 杂志，2004，33(4)：359 赵春风，武亮．复方丹参与刺五加注射液致严重 胃肠过敏症 2例． 黑龙江中医药，1999，2：47 刘继华 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