高效液相色法测定小儿四维葡钙片中维生素B1、维生素B2、维生素C的含量

高效液相色法测定 小儿四维葡钙片中维生素B1、维生素B2、维生素C的含量 赵培新 山东新华制药股份公司质检部（255005） [摘要] 目的 建立高效液相色法测定小儿四维葡钙片中维生素B1、维生素B2、维生素C的含量。方法： 以0.01mol/L 庚烷磺酸钠溶液（用20%磷酸调pH为2.7）-乙腈（800:200）为流动相；流速为1ml/min；色 谱柱为Shim-pack CLC-CN，5um，4.6mm×250mm；紫外检测器，波长为265nm；进样量为10ul；以峰面积 的外标法计算。结果：维生素B1、维生素B2、维生素C在标示量80％-120％的浓度范围内均具有良好的线 性、较好的方法回收率、优良的系统适应性实验数据。结论：该方法简便、快速，测定结果准确、可靠， 可用于小儿四维葡钙片中维生素B1、维生素B2、维生素C的质量控制。 [关键词] 小儿四维葡钙片；高效液相色法；维生素B1 维生素B2 维生素C 小儿四维葡钙片每片中含维生素B1 0.2mg、维生素B2 0.1mg、维生素C 2.5mg，其质量标准中没有对维 生素B1、维生素B2、维生素C的含量进行测定，只对其做了鉴别测定，这无法控制片剂产品中维生素B1、维 生素B2、维生素C的量。又由于片中存在多种维生素，且维生素C在溶液中不稳定，普通的方法很难达到专 属性。为了达到质量控制，我们通过验证，采用高效液相色法测定小儿四维葡钙片中维生素B1、维生素B2、 维生素C的含量，解决了小儿四维葡钙片的质量控制问题。 实验部分 1、色谱条件： 仪器：岛津LC-2010A液相色谱仪；Class-vp色谱工作站。 色谱柱：Shim-pack CLC-CN，5um，4.6mm ×250mm； 流动相：0.01mol/L 庚烷磺酸钠溶液（用20%磷酸调pH为2.7）-乙腈（800:200） 紫外检测器，波长：265nm ；柱温：室温； 流速：1.0ml/min；进样量：10ul；计算方法：峰面积的外标法。 2、方法： 2.1 溶液的配制： 2.1.1溶剂：流动相。 第 1 页，共 9 页 2.1.2 对照品溶液：称取VB2对照品约10mg于一100ml容量瓶中，加流动相适量，加热溶解；放冷， 再加入VB1对照品约20mg、VC对照品约250mg，加流动相溶解并稀释至刻度；取2.00ml，加流 动相稀释至50.0ml。 2.1.3 供试品溶液：取本品20片，精密称定，研细，取相当于2片的量于50ml容量瓶中，加流动相适 量，超声溶解，加流动相溶解并稀释至刻度，过滤。 2.1.4 测定：取对照液连续进样5次， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图，以峰面积计算VC、VB2、VB1的相对标准偏差应符 合规定，相邻两峰之间的分离度应符合规定；再取样品溶液进样，记录色谱图，以峰面积按 外标法计算VC、VB2、VB1的量。 2.2 专属性 2.2.1 溶剂的影响：取流动相进样，记录色谱图(见图 1)，溶剂色谱图中无干扰峰出现， 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明溶剂 对测定无干扰。 图 1 溶剂色谱图 2.2.2 辅料及其他成份的影响：按制剂配方规定的比例，辅料及其他成份称取一定的量，混匀，研 细，取相当于 2 片的量于一 50ml 容量瓶中，加流动相适量，超声溶解，加流动相溶解并稀 释至刻度；过滤，进样，记录色谱图（色谱图见图 2）。辅料及其他成份色谱图中无干扰峰 出现，表明辅料及其他成份对测定无干扰。 图 2 供试品中除主成份外其他成份的色谱图 第 2 页，共 9 页 2.2.3 VC 定性：称取 VC 对照品约 250mg 于一 100ml 容量瓶中，加流动相适量溶解并稀释至刻度； 取 2.00ml，加流动相稀释至 50.0ml。进样，记录色谱图（色谱图见图 3），VC 峰的保留 时间为 3.091 分钟。 图 3 VC 定性色谱图 2.2.4 VB2定性：称取VB2对照品约 10mg于一 100ml容量瓶中，加流动相适量，加热溶解；放冷， 加流动稀释至刻度；取 2.00ml，加流动相稀释至 50.0ml；进样，记录色谱图（色谱图见图 4），VB2峰保留时间为 4.156 分钟。 图 4 VB2 定性色谱图 2.2.5 VB1定性：称取VB1对照品约20mg于一100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度；取2.00ml， 加流动相稀释至50.0ml；进样，记录色谱图（色谱图图5），VB1峰保留时间为5.804分钟。 第 3 页，共 9 页 图 5 VB1 定性色谱图 2.2.6 对照品溶液：称取VB2对照品约 10mg于一 100ml容量瓶中，加流动相适量，加热溶解；放冷， 再加入VB1对照品约 20mg、VC对照品约 250mg，加流动相溶解并稀释至刻度；取 2.00ml，加 流动相稀释至 50.0ml。进样，记录色谱图（色谱图见图 6），VC、VB2、VB1之间有良好的分 离度（数据见表 1）。 图 6 对照品溶液色谱图 表1 分离度数据 组份 保留时间（Rt） 分离度(R) VC 3.093分钟 — VB2 4.160分钟 6.0 VB1 5.804分钟 7.3 2.2.7 供试品溶液：取本品 20 片，精密称定，研细，取相当于 2 片的量于 50ml 容量瓶中，加流 动相适量，超声溶解，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过。记录色谱图（色谱图见图 7）。 第 4 页，共 9 页 图 7 供试品溶液色谱图 2.3 系统适应性实验 2.3.1 对照品溶液：称取VB2对照品约10mg于一100ml容量瓶中，加流动相适量，加热溶解；放冷， 再加入VB1对照品约20mg、VC对照品约250mg，加流动相溶解并稀释至刻度；取2.00ml，加 流动相稀释至50.0ml。 2.3.2测定：取对照品溶液连续进样6次，记录色谱图，计算系统适应性实验数据（数据见表2）， 其中理论塔板数、拖尾因子、分离度及各组份峰面积的相对标准偏差均能满足测定方法的 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 。 表2 系统适应性实验数据 组份 保留时间（Rt） 理论塔板数(n) 拖尾因子(T) 分离度(R) 相对标准偏差（RSD）(%) VC 3.093 5852 1.19 — 0.03 VB2 4.160 6742 1.11 5.9 0.05 VB1 5.804 8386 1.13 7.2 0.11 2.4 线性及线性范围测定 2.4.1 线性测试溶液：按制剂配方规定的比例，辅料及其他成份按100%配料，主药分别按80%、90%、 100%、110%、120%的量配料，混匀，研细，取相当于2片的量于一50ml容量瓶中，加流动相 适量，超声溶解，加流动相稀释至刻度；过滤。 2.4.2 测定：取线性测试溶液，每个浓度点连续进样 3 次，记录色谱图（数据见表 3-表 5）。VB1、 VB2、VC在标示量的 80%-120%浓度范围内线性均较好，相关系数均符合规定。 第 5 页，共 9 页 表3 VC线性及线性范围测定结果 线性测试溶液 称样量（mg） 平均峰面积 1 195.9 799500 2 224.5 916904 3 248.3 1011659 4 273.3 1116614 5 295.1 1204730 线性方程 Y=4087X-1205 相关系数 R=1.0000 线性范围 195.9-295.1mg 表4 VB2线性及线性范围测定结果 项目 称样量（mg） 平均峰面积 1 8.50 140083 2 9.65 159941 3 10.75 178109 4 11.89 196688 5 12.95 213944 线性方程 Y=16561X-245 相关系数 R=0.9999 线性范围 8.50-12.95mg 表5 VB1线性及线性范围测定结果 项目 称样量（mg） 平均峰面积 1 16.66 120991 2 18.95 137573 3 20.62 149576 4 23.55 170637 5 25.55 184804 线性方程 Y=7180X+1464 相关系数 R=1.0000 线性范围 16.66-25.55mg 第 6 页，共 9 页 2.5 回收率（准确度）测试： 2.5.1 对照品溶液：采用系统适应性实验2.3.1项下的对照品溶液。 2.5.2 回收率测试液：采用线性测试液项下的90%、100%、110%三个浓度点的溶液。 2.5.3 测定：取对照液连续进样5次，记录色谱图；再取回收率测试液，每点连续进样3次，记录 色谱图，以外标法计算溶液中VB1、VB2、VC的量，并计算回收率(数据见表6-表8)，VB1、VB2、 VC的回收率均能满足方法的需要。 对应点 称量（mg） 计算量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） 90% 224.5 224.5 100.0 100% 248.3 247.7 99.76 110% 273.3 273.3 100.0 99.92 表6 VC回收率测定结果 表7 VB2回收率测定结果 对应点 称量（mg） 计算量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） 90% 9.65 9.64 99.87 100% 10.75 10.73 99.83 110% 11.89 11.85 99.68 99.79 表8 VB1回收率测定结果 对应点 称量（mg） 计算量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） 90% 18.95 18.96 100.1 100% 20.62 20.61 99.97 110% 23.55 23.52 99.86 99.98 2.6 精密度： 2.6.1 对照品溶液：称取VB2对照品约10mg于一100ml容量瓶中，加流动相适量，加热溶解；放冷， 再加入VB2对照品约20mg、VC对照品约250mg，加流动相溶解并稀释至刻度；取2.00ml，加流 动相稀释至50.0ml。 2.6.2 测定：由另一化验员，于不同的时间，新配制流动相，采用不同型号的仪器、不同的色谱 柱，取对照品溶液连续进样6次，记录色谱图，计算主峰峰面积的相对标准偏差均能满足方法 测定的需要，说明方法的性能较好。 第 7 页，共 9 页 表9 精密度测试结果 组份 次数 VC VB2 VB1 1 1024990 176628 155294 2 1025907 176781 155233 3 1034461 177974 155312 4 1029448 176994 155125 5 1018928 176430 155990 6 1026090 176653 155543 平均 1026637 176910 155416 RSD（%） 0.50 0.31 0.20 2.7 溶液的稳定性 2.7.1取2.3.1项下对照品溶液在0小时、4小时、8小时、12小时、16小时的不同时间，分别连续进 样6次，记录色谱图，计算从0小时到进样时的所有进样主峰面积的相对标准偏差（数据见表 10-表12），得到VC、VB2、VB1主峰面积的相对标准偏差均较好，溶液的稳定性能够满足测定 的需要。 表10 VC的稳定性 时间 面积 RSD（%） 0小时 1028278 1027808 1027485 1028115 1027924 1028131 0.03 4小时 1023562 1021644 1021532 1021318 1021910 1020840 0.32 8小时 1020784 1013410 1014431 1012266 1012899 1012726 0.59 12小时 1007591 999887 1001998 1000563 1000188 998747 1.01 16小时 990367 980638 981765 978638 978675 977734 1.69 表11 VB2的稳定性 时间 面积 RSD（%） 0小时 176248 176119 176174 176303 176295 176349 0.05 4小时 176876 176276 176540 176569 176787 176602 0.14 8小时 176597 177004 177038 176798 177036 177088 0.19 12小时 176920 177133 177094 177335 177278 177152 0.22 16小时 177374 177434 177432 177245 177486 177315 0.24 第 8 页，共 9 页 表12 VB1的稳定性 时间 面积 RSD（%） 0小时 149998 150051 150168 150321 150197 150434 0.11 4小时 151275 150743 150925 151038 150973 151101 0.30 8小时 151108 151438 151486 151219 151396 151351 0.34 12小时 151313 151793 152009 151746 152185 152037 0.43 16小时 151839 151186 151385 151154 151205 151955 0.40 2.8 供试品的测定结果 取三批供试品，采用本方法对VB1、VB2、VC进行测定（数据见表13），结果均能满足制剂的 一般要求。 表13 供试品中VB1、VB2、VC的测定结果 批号 标示量(%) VC 101.5 VB2 94.28 060908 VB1 100.1 VC 101.3 VB2 94.86 060909 VB1 100.0 VC 101.4 VB2 93.99 060910 VB1 100.1 3、结论： 实验结果表明：本方法采用高效液相色法测定小儿四维葡钙片中VB1、VB2、VC的含量，有很 好的专属性、系统适应性、中间精密度、准确度及良好的线性。测定时，操作简便、快速，结果 准确、可靠，本方法适用于小儿四维葡钙片中维生素B1、维生素B2、维生素C的质量控制。 第 9 页，共 9 页