高速逆流色谱操作步骤和要点
操作步骤：
1. 配液。超声脱气约 20min，脱气后静置冷却至室温后泵液。
2. 打开恒温水浴，将温度升至设定温度。
3. 泵固定相。以 10～20ml/min流速泵入固定相，检测器出口端流出固定相约 20～50ml
后停泵。
4. 平衡。打开紫外检测器开始预热，正转转动主机至 900rpm（FWD 为正转，REV 为
反转），同时以 3ml/min 流速泵入流动相，至出口端流出流动相且此时紫外信号稳定，体系
基本已平衡。
5. 进样。以体系的上、下相溶解一定量的样品，超声溶解均匀后，在装样注射器中倒
入样品溶液，将进样六通阀切换至 load，推排气泡后吸液至样品全进入进样圈中，将 load
切换至 inject，检测器、工作站调零开始记录。
6. 接收流分。工作站记录，设备运行时间为 500min，保存后采集数据，保存。
7. 清洗。断开泵与主机的连接，将主机进口与气管出口连接，吹气；将主机中溶剂吹
出后，泵入约 50ml清洗液，吹气，重复此过程 2～3次；最后一次长时间（1小时左右直至
吹干）吹气时将主机内液体吹尽。
8. 关机。
操作要点：
本仪器适用于有机溶剂，316L不锈钢及 PTFE材料可耐受的酸碱溶液。
1. 本设备可承受的压力限制为 2MPa，请勿泵入不可溶解的固体颗粒。
2. 设备运行前先检查连接管路是否正确，是否紧密；检测器波长是否正确。
3. 配液时溶剂应混合均匀，自然分层澄清后可超声脱气，脱气时间不宜过长，脱气后
如溶剂有温热则最好冷却静置至室温后使用。
4. 样品溶解可为体系上相或下相，或同时两相溶解，不可以单一的溶剂来溶解进样，
以免破坏主机内的体系平衡。
5. 每次做完实验请及时清洗设备，一般清洗液为甲醇、乙醇等，如体系内含有酸、碱、
盐等溶剂，建议先以纯净水清洗 1～2次后，再以清洗液清洗。
6. 日常清洗完设备后，如需继续进行实验，请设备放置 2小时后重新平衡。
7. 操作中如有气泡、流失或其他异常现象可致电上海同田生物技术有限公司技术支持
部 021-51320588-8036。
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