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毛细管气相色谱法测定发酵液中丙酸的含量

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毛细管气相色谱法测定发酵液中丙酸的含量 !" 《饲料工业》·!""#年第 !$ 卷第 %期 丙酸(!"#!$#%$& ’&$(,以下简称 )*)是一种理想而 又有前途的粮食、食品和饲料防腐剂,在国外饲料工 业中的应用最为广泛 + ,,- .。我国作为世界饲料生产 大国,对丙酸的需求量很大,并且呈现逐年递增的 态势。据统计,仅 ,/// 年,我国就从国外进口丙酸/ 0012 + - .。预计到 -113 年,我国的丙酸需求量将超过 ,1 1112,而我国丙酸的年产量却不足 -112+- .。目前,国 际上主要采用化学合成法生产 )*,也有学者开...

毛细管气相色谱法测定发酵液中丙酸的含量
!" 《饲料工业》·!""#年第 !$ 卷第 %期 丙酸(!"#!$#%$& ’&$(,以下简称 )*)是一种理想而 又有前途的粮食、食品和饲料防腐剂,在国外饲料工 业中的应用最为广泛 + ,,- .。我国作为世界饲料生产 大国,对丙酸的需求量很大,并且呈现逐年递增的 态势。据统计,仅 ,/// 年,我国就从国外进口丙酸/ 0012 + - .。预计到 -113 年,我国的丙酸需求量将超过 ,1 1112,而我国丙酸的年产量却不足 -112+- .。目前,国 际上主要采用化学合成法生产 )*,也有学者开始研 究利用微生物(如丙酸杆菌)发酵法生产 )*+3 .。微生 物发酵法的原料来自农副产品,能充分利用可再生资 源,符合绿色化工发展方向,因而日益受到人们的重 视。)*发酵的 工艺 钢结构制作工艺流程车尿素生产工艺流程自动玻璃钢生产工艺2工艺纪律检查制度q345焊接工艺规程 研究和工艺控制都需要精确 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 发酵液中 )*的含量。检测丙酸的常用方法有滴定法 + 3 .、!4法和气相色谱法等。前两种方法都容易受到发 酵液中其它有机酸类影响,因此准确度和精密度均较 低,只能用于丙酸含量的粗测;传统的气相色谱法在 测定 )*含量时,先用乙醚萃取 )*,而后再进行气相 色谱检测。由于乙醚容易挥发且对 )*的萃取率较低 + 5 .,因此使得该方法的准确度和精密度也大打折扣。 本文报道一种新的测定发酵液中 )* 含量的气相色 谱方法。 ! 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 ,6 , 材料 ,6 ,6 , 菌种 丙酸杆菌 !"#!$#%$7’&28"$9: ;<8":’%$$,由河北华 荣制药有限公司惠赠,本实验室保藏。 ,6 ,6 - 发酵培养基 葡萄糖 =>、玉米浆 ->、碳酸钙 ,>、?#?@- ,1:A B @, ,6 ,6 3 仪器 国产 C?D0/1E气相色谱仪,配备 EFG氢火焰检 测器和超越 H -111色谱工作站;国产毛细管色谱柱; CI H 311*氮氢空气一体机;J4- H 0-气浴恒温振荡 器。 ,6 ,6 5 试剂 乙醚、甲苯、??@5、?4K和 4-JL5均为 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯;水 为去离子水,符合 CM B N==0-三级用水的规定。 ,6 - 方法 ,6 -6 , 丙酸发酵方法 采用 -O1:@三角瓶,装液量 -11:@,厌氧静止发 酵,接种量 ,1>,培养温度 31P,发酵过程用氨水定 时滴定维持 !4=Q O,发酵周期 ,11<+3 .。 ,6 -6 - 发酵液样品溶液的制备 取适量待测发酵液,在 3 111" B :$%、室温条件下 离心 O:$%,收集上清液。取 ,1:@ 上清液,用 O1> 4-JL5调 !4至 -6 O1 R 16 13,再用 ,1:@萃取剂振荡提 取(振荡器转速为 -11" B :$%,温度为 31P)。将振荡提 取得到的混合液在 / 111" B :$%、室温条件下离心 =:$%S 所得上层液即为发酵液样品溶液,可上气相色 谱仪进行分析。 ,6 -6 3 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 溶液的配制 精密量取 )*16 ,、16 O、,6 1、,6 O、-6 1、-6 O、36 1、 36 O和 56 1:@,分别移入 0个容量瓶中,用除去 )*的 发酵液定容至 ,11:@,摇匀备用。 ,6 -6 5 色谱操作条件 色谱仪进样器和检测器温度均为 -11P;柱室温 度 ,3OP;氮气(高纯氮)流速为 -6 /=:@ B :$%;采用不 分流方式进样,进样量 16 -!@,外标法定量。 " 结果与讨论 -6 , 线性关系 将“,6 -6 3”所得的系列标准溶液均按照“,6 -6 -” 的方法进行萃取,得到 0瓶系列标准溶液。将标准样 品溶液上机检测,以 )* 体积百分比浓度的 ,11 倍 T? U对 )*色谱峰面积的 , B ,1 111(*)作线性回归,得 回归方程 ? V ,6 3== /* W 16 101 5 T " V 16 //O D U。可见, 发酵液中 )*浓度在 16 ,> X 56 1>范围内时,)*浓 度与色谱峰面积呈良好的线性关系。 -6 - 萃取条件的优化试验 -6 -6 , 萃取剂的筛选 $国家“十五”科技攻关项目 T -11,M*D10M1O U和河北科技大 学科学研究项目 TIY-11-=3 U 饲 料 检 测 仪宏,河北科技大学生物科学与工程学院,副教授,院 长,1O11,0,石家庄市裕华东路 ,0= 号。 侯建革、张华峰、王丽丽、冯惠勇,单位及通讯地址同第 一作者。 收稿日期:-113 H 1- H -= 毛细管气相色谱法测定发酵液中丙酸的含量 仪 宏 侯建革 张华峰 王丽丽 冯惠勇 !" 图 ! 振荡时间对回收率的影响 图 " #$标样及试样色谱图 图 % 不同萃取剂的响应值 萃取剂的性质显著影响 #$ 在检测器上的响应 值。精密配制含 !& ’( #$的发酵液,分成 )份,分别采 用乙醚、甲苯、**+)和 *,-为萃取剂,按“%& !& !”方法 萃取发酵液中的 #$,所得发酵液样品溶液依次进样 测定各溶液中 #$在检测器上的响应值(图 %)。由图 % 可见,甲苯、**+)和乙醚的响应值均低于 *,-,并且, 采用乙醚作为萃取剂时,由于乙醚的沸点较低,极易 挥发,因此使得精密度明显降低(表 %)。综上,选择 *,-为萃取剂。 表 % 乙醚精密度试验结果 测定次数 #$色谱峰面积 平均值 变异系数 .( / % " )’0 ! " 122 " " 321 " 0!3& 4 3& 1" ) " %2" 0 " !20 !& !& ! 振荡时间对回收率的影响 精密配制含 !& ’( #$的发酵液,分成 0 份,按 “%& !& !”方法用 *,-萃取其中的 #$,振荡时间分别 为 0567、%’567、!’567、"’567和 )’567,所得发酵液样 品溶液在“%& !& )”条件下依次进样测定 #$色谱峰面 积,然后按“!& %”的回归方程计算出 #$含量测定值 (图 !)。根据图 !,选择萃取振荡时间为 "’567。 !& " 精密度试验 !& "& % 仪器精密度试验 精密吸取含 !& ’( #$的 *,-溶液 ’& !!+,重复 进样 )次,按“%& !& )”方法测定 #$色谱峰面积(表 !)。由表 !可见,本实验采用的国产气相色谱仪和毛 细管色谱柱具有较高的精密度。 表 ! 仪器精密度试验结果 测定次数 #$色谱峰面积 平均值 变异系数 .( / % %) %%! %" 2’4 )& 4’! %" !%0" %" ")0 ) %) 00! !& "& ! 方法精密度试验 按“%& !& %”方法培养丙酸杆菌,并按“%& !& !”方法 制得发酵液样品溶液,然后在“%& !& )”条件下测定所 得发酵液样品溶液中 #$的色谱峰面积,共重复 0次, 结果见表 "和图 "。 表 " 方法精密度试验 测定次数 #$色谱峰面积 平均值 变异系数 .( / % %! ")! ! %) ’"" " %" 40! %" "3’& 2 0& %’ ) %" ’3) 0 %" 2"" . 8 / #$标样色谱图 . #$的 9:&%& ’4567 / 仪宏等:毛细管气相色谱法测定发酵液中丙酸的含量 . ; / #$试样色谱图 . #$的 9:&%& ’4567 / 饲 料 检 测 !" 《饲料工业》·!""#年第 !$ 卷第 %期 表 ! 回收率试验结果 "#实际浓度 $% & 测定值 $% & 平均回收率 $% & 变异系数 $% &’ ( ) ! 平均值 $% & *+ ’ *+ *,, *+ *,- *+ *,- *+ ’*’ *+ *,. - ,.+ -* )+ */ (+ * (+ *’. ’+ /0, ’+ ,-/ ’+ ,,0 ’+ ,0* * ,/+ ** )+ )( !+ * !+ ’*) )+ ,.. )+ ,0’ )+ ../ )+ ,-! / ,/+ /. )+ ), !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 安定又名地西泮(12345637)为苯二氮卓类,白色 晶体,无臭,易溶于氯仿、丙酮,在乙醇中溶解,不溶于 水,紫外光()0-87)下显黄绿色荧光,是临床常用的 镇静、催眠药物。安定主要作用于大脑及边缘系统,与 中枢苯二氮卓受体结合,增强 ! 9氨基丁酸(:#;#) 的抑制作用。常用量还可抗焦虑,肌肉松驰作用;大剂 量可产生中枢神经抑制,呼吸抑制等中毒表现。长期 服用该类药物可产生依赖性或成瘾性,突然停药可产 生停药反应,表现为抑郁,精神激动,失眠等 < ’ =。 近几年来,有些饲料企业为了追求饲料的转化率 和高额利润,在饲料中随意添加镇静、催眠类违禁药 物。如在上海饲料办的专项检查中,经抽样检测,“睡 大壮”饲料产品中含有大量的安定 < ( =。(**(年下半年 全国饲料和饲料添加剂质量监督抽查结果中,共有 (-/批次样品检出了违禁药物和违规添加药物,其中安 定 ’(*批次占全部 ’ 0-*批次不合格样品的 .+ (% <) =。 安定经肝脏代谢为奥沙西泮,仍有生物活性,故连续 应用可蓄积。虽未见有食入含安定饲料饲养的动物食 品中毒报道,但医学界已证实畜禽产品中的激素及其 它合成药物的滥用与残留往往与人类常见的疾病问 题和某些食物中毒有关 < ! =。为此国家有关部门也下文 将安定类明确定为禁用药物之一 < - =。有关安定的血、 尿浓度检测报道较多,而饲料中检测报道较少,因此 饲料中该类药物检测方法标准的制定成为首要任务, 而方法的选择更是当务之急,本文旨在为建立饲料中 快速、准确、可靠的测定安定方法提供借鉴。 ! 检测方法 目前,检测安定较为常用的方法有:高效液相色 谱法(>"?@),薄层扫描法(A?@),光化学荧光分析法 ("@B#),差示分光光度法及酶联免疫吸附法(C?DE#) 等。而这些方法的样品前处理至关重要。 ’+ ’ 样品前处理 不同样品中安定的提取方法也不尽相同。 ’+ ’+ ’ 药品中安定的提取 常用甲醇超声提取、过 滤,滤渣用甲醇F水或甲醇F磷酸二氢钠溶液洗涤,合 并滤液后定容 < ’ =。 ’+ ’+ ( 血液中安定的提取 可分为液 9液萃取和固 相萃取。液 9液萃取主要是将样品置于离心管中,加 碱摇匀,用乙醚提取,0*G水浴中通氮气流挥干,残渣 用甲醇溶解。王立新、刘庆 < 0 =等人进行了二氯甲烷、乙 氯乙烯、乙酸乙酯,乙醚、氯仿几种溶剂的提取试验, 发现 >"?@ 测定结果不仅有杂峰干扰而且回收率偏 低,改用氯仿与异戊醇(,/ H ()混合提取,有良好的回 收率且基线平稳。固相萃取 < . =主要是将样品通过已活 化好的 E"C 9 @’/小柱,用水冲洗小柱,弃去水溶液, 除去柱上残留水液,再用甲醇冲洗 (次,接收甲醇洗 脱液,用氮气流挥干,残留物用甲醇F水溶解。后者较 前者提取简便,省时且柱子再生后可反复使用。 ’+ ’+ ) 尿中安定的提取 通常用液 9液萃取 < / =,先 碱化,后用乙醚(或氯仿)提取,氮气流挥干,残渣用甲 醇溶解。但因尿样中安定较少,而且代谢物多以其结 (+ ! 回收率试验 精密配制 "#浓度分别为 *+ ’%、(+ *%、!+ *%的 发酵液,按“’+ (+ (”方法提取其中的 "#,在“’+ (+ !”条 件下测定各自的 "#色谱峰面积并代入“(+ ’”的回归 方程计算出 "#含量测定值,各重复 -次,结果 )种浓 度的回收率分别为 ,.+ -*%、,/+ **%和 ,/+ /.%,变 异系数分别为 )+ */%、)+ )(%和 )+ ),%(表 !)。 饲 料 检 测 张东升,江苏省微生物研究所,(’!*0),无锡市钱荣路 . 号。 龚燕、蔡建荣、赵晓联,单位及通讯地址同第一作者。 收稿日期:(**) 9 *( 9 ’* 安 定 检 测 方 法 的 研 究 进 展 张东升 龚 燕 蔡建荣 赵晓联
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