从三七根_茎中快速批量分离提取三七皂苷R__省略__R_2及人参皂苷Rg_1有效

从三七根、茎中快速批量分离提取三七皂苷 R1、R2及人参皂 苷 Rg1有效部位群的方法 周家明 1，2，马妮 1，2，曾鸿超 1，2，张文斌 1，2，曾江 1，2，崔秀明 1，2※ （1.云南文山三七研究院新产品开发研究所，云南 文山 663000； 2.云南三七农业工程实验室，云南 文山 663000） 摘要：从三七根、茎中快速批量分离提取三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群。三七根、茎经 70%乙醇提取得三七粗皂 苷，粗皂苷用 D101大孔吸附树脂分离得三七总皂苷。三七总皂苷经硅胶柱“氯仿 - 甲醇 - 水”溶剂梯度洗脱过柱获得纯度为 60%的三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群。此法适合于批量分离提取三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群。 关键词：三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群；三七根、茎；分离提取 中图分类号：S567.23+6；TQ460.7+2 文献标识码：A Fast Batch Separation and Extraction Notoginsenosides R1、R2、Ginsenoside Rg1 from Rhizome of Sanqi ZHOU Jia-ming1，2，MA Ni1，2，ZENG Hong-chao1，2，ZHANGWen-bin1，2， ZENG Jiang1，2，CUI Xiu-ming1，2※ （1.Product development institute of Wenshan Sanqi Research Institute，Wenshan 663000，China； 2.Yunnan Sanqi agricultural engineering laboratory，Wenshan 663000，China） Abstrcte：Object：To study separating and extracting notoginsenosides R1，R2，ginsenoside Rg1 from rhizome of Sanqi. Methods：To ex- tract coarse saponins from rhizome of Sanqi by 70% alcohol，obtain total saponins making D101 resin，then by silica gel column. Re- sult：Separated and extracted 60% purity of notoginsenosides R1，R2，ginsenoside Rg1. Conclusion：The method is suitable for separating and extracting notoginsenosides R1，R2，ginsenoside Rg1. Key words：notoginsenosides R1，R2，ginsenoside Rg1；rhizome of Sanqi；separation and extracteion 收稿日期：2009- 07- 31 基金项目：上海市静安区软课题项目（2008HO2） 作者简介：周家明（1970-），男，副研究员，从事三七新产品开发研究。E- mail: zhjm37@163.com。 ※通讯作者：崔秀明，E- mail:sanqi37@vip.sina.com 三七［Panax notoginseng（Buck）F. H. Chen］为五加 科人参属植物，有“金不换”、“南国神草”等美誉，是我 国名贵中药材，也是云南独具特色的中药材资源，在云 南中药产业中占有举足轻重的地位和作用。三七根、茎 中的主要成分是达玛烷型皂苷。文山三七研究院新产 品开发研究所从三七根、茎中分离到皂苷类（达玛烷型 四环三萜）化合物 31个[1，2]，三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群在三七根、茎中的含量约为 5.0%。从三 七根、茎中分离提取三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有 效部位群的方法在文献中还没有报道。本试验先采用 特 产 研 究 Special Wild Economic Animal and Plant Research 文章编号：1001- 4721（2010）01- 0043- 03 43 常规方法从三七根、茎中用 70%乙醇提取粗总皂苷,然 后通过 D101大孔吸附树脂 80%乙醇提取三七总皂苷 [1~3]，再经硅胶柱以“氯仿 - 甲醇 - 水”溶剂梯度洗脱[4]得 到纯度为 60%的三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效 部位群。 1 材料与试剂 三七根、茎（由文山三七研究院提供，经云南文山 三七研究院崔秀明研究员鉴定为原植物样品）。硅胶 （200~300目，青岛海洋化工厂），RP- 8、RP- 18（Merck、 FUJI公司）；硅胶 G预制薄板（青岛化工厂），HP RP- 8 F254和 RP- 18 F254预制薄板（Merck公司）。展开剂：（1） 氯仿∶甲醇（9.5∶0.5~8∶2）；（2）氯仿∶甲醇∶水（8∶ 2∶0.2；7∶3∶0.3）；（3）甲醇∶水（4∶6~8∶2）；（4）正 丁醇∶乙酸乙酯∶水（4∶1∶5上层）。显色剂：10%的 H2SO4- EtOH溶液。 2 试验方法 2.1 取三七干燥根、茎 4.8kg，粉碎成 60目后加入 10 倍量 70%的乙醇（V/W），回流提取 3次，每次 2h，合并 乙醇提取液，回收溶剂，干燥得粗三七总皂苷 1.9kg。粗 三七总皂苷 1.9kg用少量水溶解后，通过 D101大孔吸 附树脂（15kg，Φ20cm×80cm）柱层析，先用 20kg水洗 脱弃去，再用 80%乙醇 25kg洗脱，合并乙醇洗脱液，回 收溶剂，干燥得到三七总皂苷 750g。所得三七总皂苷用 95%乙醇 3L加热溶解，吸附于 1.5kg的硅胶（200~300 目）上，室温（25℃）挥干，粉碎，过 80目筛备用。 2.2 取 4.5kg 硅胶（200~300 目） 装柱（Φ12cm× 120cm），进行柱层析分离。以氯仿 - 甲醇 - 水（9∶1∶ 0.1 V/V）混合溶剂洗脱，4L为一个流份，分别收集 10 个流份，第 4~5流份合并，减压回收溶剂，干燥得到提 取物皂苷淡黄色粉末 350g。经硅胶薄层板（SiTLC）鉴 定，该提取物含有 R1、R2、Re、Rg1、Rg2等化合物。将提取 得到的皂苷淡黄色粉末 350g进行纯化，以氯仿 - 甲醇 - 水（8.5∶1.5∶0.15 V/V）混合溶剂洗脱，1L为一个流 份，分别收集 8流份，第 3~5流份合并，减压回收溶剂， 干燥得到提取物皂苷淡黄色粉末 220g，经硅胶薄层板 （SiTLC）鉴定，该提取物主要有效部位含有 R1、R2、Rg1， 可测成分含量达到 60%以上。 3 结果与讨论 先采用 70%的乙醇提取粗三七总皂苷，然后再用 D101大孔吸附树脂 80%的乙醇洗脱提取可得到三七 总皂苷。因三七总皂苷在根、茎中含量较高，单体化合 物的相对含量在三七根、茎中,人参皂苷 Rb1及 Rg1含 量较高，其次是 R1、Re，含量较低的是 R2和 Rg2。用氯仿 - 甲醇 - 水（8∶2∶0.2）为展开剂展开，从 TLC鉴别色 谱图中可看出，有效部位群中 R2极性小，Rf值约为 0.7；Rg1处于中间位置，Rf值约为 0.35；R1极性大，Rf 值约为 0.2。所以，先用氯仿 - 甲醇 - 水（9∶1∶0.1）把 极性小于 R2的部分洗脱出去，然后再用氯仿 - 甲醇 - 水（7∶3∶0.3）把极性大于 R1的部分洗脱出去，剩下的 中间部份就是我们要的有效部位群。因有效部位群中 色素较多，颜色也较深，Rf值和 Rg1相近的也多，也就 是位于 Rg1上、下位置还有较明显的斑点，经硅胶薄层 板（SiTLC）鉴定，有效部位群含有 R1、R2、Re、Rd、Rg1、 Rg2等化合物。再将有效部位群以氯仿 - 甲醇 - 水（8.5 ∶1.5∶0.15 V/V）进行 3次的纯化（因颜色较深，多纯化 两次，把色素去掉，使有效部位显白色）就可得到主要 有效部位群 R1、R2、Rg1等主要成分。结果见图 1。 将阴性样品、对照品、样品用 HPLC做了定性、定 量，见图 2。 图 1 三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1，有效部位群 TLC色谱图 特 产 研 究 2010年第 1期44 周家明，等：从三七根、茎中快速批量分离提取三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群的方法 （上接第 42页） 5.2 通过 TLC对其中主要成分枸杞子、大枣及西红花 进行定性鉴定，在一定程度上保证药品质量，为松龄太 平春酒质量控制 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 提供了试验依据。对其有效成分 含量还将进行更深入的研究。 参 考 文 献 ［1］孟楣，高家荣，魏良兵.薄层色谱法鉴别枸杞子的实验研 究［J］.中国药事，2007，21（11）：912- 913. ［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工 业出版社，2005：16. ［3］唐芳，徐虹，赵绪元，等.齐墩果酸滴丸的质量控制［J］.中 国医院药学杂志，2008，28（16）：1416- 1418. ［4］赵甡慧，齐曼丽，刘德旺.通滞苏润江胶囊中番泻叶、诃 子、西红花的 TLC鉴别研究［J］.中国民族医药杂志， 2007，13（4）：52- 53. 图 2 三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群 HPLC 图谱 A.阴性样品；B.对照品；C.样品；a.三七皂苷 R1；b.人参皂苷 Rg1；c.三七皂苷 R2 4 结论 从三七根、茎中用 70%乙醇提取粗三七总皂苷,然 后通过 D101大孔吸附树脂 80%乙醇提取三七总皂苷， 再经硅胶柱以“氯仿 - 甲醇 - 水”（9∶1∶0.1；8.5∶1.5 ∶0.15；8∶2∶0.2；7∶3∶0.3）溶剂梯度洗脱，得到纯度 为 60%的三七皂苷 R1、R2及人参皂苷 Rg1有效部位群。 该方法分离步骤简化、时间缩短，适合于快速批量制备 及生产。 参 考 文 献 ［1］周家明，曾江，崔秀明.三七根、茎的化学成分研究Ⅰ［J］. 中国中药杂志，2007，（4）：349- 350． ［2］曾江，崔秀明，周家明.三七根、茎的化学成分研究Ⅲ［J］. 中药材，2007，（1）：1388- 1391． ［3］唐第光.大孔吸附树脂法提取三七总皂甙探讨［J］.中成 药，1990，（8）：5． ［4］刘德育，曾飒.从三七药材中快速批量分离提取人参皂苷 Rd的方法［J］.中药材，2006，29（3）：247- 249. !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 第 1期 45